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C. STRUCK
4.1 INTRODUCCIÓN
La forma en que los patógenos de las plantas atacan a sus plantas huésped es una de las
preguntas más interesantes en la patología de las plantas. Numerosos hongos y organismos
similares a hongos causan unas 10,000 enfermedades diferentes en las plantas (Pennisi,
2001). Las enfermedades fúngicas de las plantas causan problemas económicos al reducir
la germinación de las semillas, destruir plantas o cosechar productos y al secretar
metabolitos secundarios que son tóxicos para el hombre y los animales. La colonización
exitosa de la planta del hábitat, incluida la absorción de nutrientes y la
reproducción, depende en gran medida de un modo eficiente de infección. Los hongos
parásitos vegetales han desarrollado diversas estrategias para ingresar a sus huéspedes y
establecer un contacto directo con ellos. Las interacciones exitosas resultan en
enfermedades devastadoras de las plantas. En muchos casos, esto significa la producción
de grandes cantidades de esporas que se dispersan por el viento de un huésped susceptible
a otro. Además, hay varios ejemplos descritos de dispersión a larga distancia de esporas
de hongos por el viento que pueden propagar enfermedades de plantas a través de
los continentes y hasta permitir la invasión a nuevos territorios (Brown y Hovmøller,
2002).
Los mecanismos de infección de los hongos patógenos son muy variables. Durante
las primeras fases del proceso de infección antes de invadir el tejido vegetal, el desarrollo
de fu ngi depende en gran medida de las condiciones ambientales favorables, como la
humedad de la superficie, la humedad relativa, la temperatura y la luz. En algunos casos,
el suministro de nutrientes en la superficie también puede influir en la germinación.
La diferenciación morfogenética y fisiológica del hongo invasor depende del modo
de penetración. El proceso de infección consiste en una serie de estadios
morfológicamente más o menos distinguibles: germinación de las esporas, formación de
un apresorio y una hifa de penetración que penetra la cutícula y la pared celular
(Mendgen et al. , 1996). Dentro del tejido del huésped, los hongos patógenos desarrollan
hifas de infección y algunos biotrofos forman haustorios. Una revisión de este tema con
más detalles sobre biología celular es dada por Hardham (2001).
Las diferentes estrategias que utilizan los patógenos fúngicos para infectar sus plantas
hospedantes se entienden mucho mejor por medio de técnicas de genética molecular que
han permitido la identificación de genes fúngicos que son cruciales para el desarrollo de
la enfermedad.
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BM Cooke, D. Gareth Jones y B. Kaye (eds.), The Epidemiología de enfermedades de
plantas, 2ª edición, 117-137.
© 2006 Springer. Impreso en los Países Bajos.
cutícula del anfitrión Aparentemente, la adherencia de las almohadillas mejora con estas
enzimas. Las esporas tienen una capacidad reducida para adherirse a la superficie de la
hoja cuando estas enzimas se inactivan (Deising et al. , 1992).
En contraste con los propágulos de la mayoría de los hongos, conidios de mildiu
pulverulento bar ley (Blumeria graminis, syn. Erysiphe graminis) iniciar el proceso de
adhesión en ausencia de agua libre en una amplia gama de humedades relativas
elevadas. Carver et al. (1995) mostraron que el material extracelular liberado por
germinados de B. g raminis f.sp. avenae pega el hongo firmemente a la superficie de la
hoja. Los conidios de B. graminisf.sp. Los hordei producen un líquido que contiene
esterasas en respuesta a un estímulo de contacto no específico con la superficie de la hoja
de cebada o a una superficie de celofán humedecido (Nicholson et al. , 1988). Además,
este exudado contiene actividad de cutinasa (Pascholati et al. , 1992) que altera la
superficie de la cutícula y puede ayudar a que el hongo penetre la superficie de la hoja
más eficientemente.
Durante la fase inicial del proceso de infección antes de invadir el tejido de la planta, el
hongo en desarrollo depende en gran medida de las condiciones ambientales favorables,
tales como la humedad de la superficie, la humedad relativa, la temperatura y la
luz. Además, la disponibilidad de nutrientes es un estímulo importante especialmente
para los patógenos necrotróficos. El mecanismo preciso por el cual ocurre la germinación
es una interacción de varios factores. Se ha demostrado que la germinación de esporas,
la dirección de crecimiento de los tubos germinales y la posterior inducción de la
formación de apresores se desencadenan por las características químicas o físicas del
substrato. Para colocar el apresorio en el sitio óptimo para la penetración, se requiere un
evento de reconocimiento que incluya señales topográficas, químicas o ambientales (para
revisión, ver Staples yHoch, 1997).
Se ha descrito que los tubos germinativos de varios hongos patógenos crecen a lo largo
de las paredes celulares anticlinales de sus plantas hospedadoras. Estudios in vitro de la
germinación de esporas de Cochliobolus sativusindican que ambas señales químicas y
topográficos dadas por junturas de la pared celular anticlinales más de células epidérmicas
participan en la inducción appressorium (Clay et al., 1994).
Formación de apresorios por urediosporas Tubos germinales de la roya del
frijol Uromyces appendiculatus es inducida por diferencias físicas en la topografía de la
superficie de la hoja, como labios estomáticos de células protectoras, o por crestas
definidas de 0,5 μm de altura formadas en una superficie artificial (Hoch et al. . , 1987;
Kwon y Hoch, 1991). Además, se ha demostrado que muchos hongos de la roya exhiben
respuestas específicas de especie en membranas con topografías definidas (Allen et
al. , 1991).
Se encontró que el contacto superficial en las hojas del huésped o sustratos artificiales
era esencial para la formación de apresorios por los tubos germinales de Magnapor the
grisea (Xiao et al. , 1994). Además, una alta hidrofobicidad superficial y luz favorecieron
la formación de apresorios, pero estos factores no fueron esenciales (Jelitto et al. ,
1994). Gilbert et al. (1996) informaron pruebas para la regulación de la formación de
appressorium de M. grisea por señales químicas: descubrieron que los monómeros de
cutina de plantas hospedadoras y plantas no hospedadoras inducían la formación de
estructuras de infección. De Colletotrichum trifolii , el
causalagente de alfalfa antracnosis, un inducido por
lípidos proteína ki nase (LIPK) necesario
el complejo de la pudrición del tallo fue menor en los híbridos de maíz Bt que en el maíz
no Bt (Gatch y Munkvold, 2001). También se redujo la incidencia de la pudrición de la
espiga de Fusarium (Munkvold et al. , 1997). El tipo de interacción entre el insecto y el
patógeno sigue sin estar claro. Además de la formación de heridas de entrada para los
hongos, las larvas del barrenador del maíz llevan esporas de especies de Fusarium a la
superficie de la planta de maíz (Gatch y Munkvold, 2001). La incidencia de la
enfermedad se correlacionó positivamente con el daño causado por el maíz
europeo taladrador.
En muchos hongos, la penetración de la pared, ya sea por acción enzimática o por presión,
se inicia por la diferenciación de la apresoria (para una revisión, ver Deising et al. ,
2000). Appressoria se adhiere firmemente a susustrato y aumenta el área de contacto entre
el hongo y el huésped. Dependiendo de la especie, las apresorios se colocan sobre los
estomas o se desarrollan en distribución aleatoria sobre la superficie de la hoja. De un
poro en la base apresorial, una penetración hypha (o paridad de infección) crece
directamente a través de la cutícula y la pared celular en el tejido del huésped o, en el
caso de etapas dicarióticas de hongos roya, a través de la abertura estomática en la cámara
substomal.
La producción de apresorios está bajo control ambiental y genético. Para varios
hongos patógenos de plantas, tales como Magnaporthe grisea (Xu y Hamer,
1996), Colletotrichum lagenarium (Lev et al. , 1999),Cochliobolus
heterostrophus (Takano et al. , 20 00) y Pyrenophora teres (Ruiz-Roldan et al. , 2001)
se encontró que la producción estaba bajo el control de un gen homólogo de proteína
quinasa activada por mitógeno (MAP).En cada caso, estos genes no son necesarios para
el crecimiento vegetativo, sino para una infección exitosa de la planta huésped. Como se
encuentra por fusión con el verde
Appressoria crea una alta presión de turgencia que permite que la clavija de penetración
penetre en la pared celular de la planta (para una revisión, ver Bastmeyer et al. ,
2002). Ejemplos bien estudiados de penetración por fuerza mecánica son los del
hongo arrojado por el arroz M. grisea (Howard y Valent, 1996) y de Colletotrichum
graminicola , el agente causal de la antracnosis de numerosos pastos (Bechinger et al. ,
1999). En ambos casos, las paredes celulares de las apresorias maduras están melanized
y la melanina juega un papel crucial en la patogenicidad. Los experimentos con
inhibidores de la síntesis de melanina y con mutantes deficientes en melanina (Chumley
y Valent, 1990) muestran que la apresoria no melanizada tiene, por lo general, la
capacidad de penetrar la superficie de la planta y las membranas artificiales. La melanina
reduce la porosidad de la apresoria y, por lo tanto, ayuda a aumentar la presión osmótica:
hasta 8 MPa en apresorios de M. grisea (Howard et al. , 1991). No se sabe con certeza
cómo se puede generar esa alta presión dentro de las células vivas hasta que de Jong et
al.(1997) mostraron que el glicerol se acumula en la apresoria a concentraciones muy
altas (más de
3.0 M). La pared de apresorio melanized es impermeable al glicerol y por lo tanto
conduce a la generación de presión de turgencia . Tanto la movilización de glucógeno
como la de lípidos durante la germinación conidial y la posterior degradación contribuyen
a la biosíntesis de glicerol (Thines et al. , 2000).
cinerea (Van Kan et al. , 1997) han cuestionado la importancia de la cutinasa para la
patogenicidad fúngica. Estos resultados sugieren un papel saprofítico para las cutinasas e
implican que estas enzimas no son importantes en la infección de las plantas. Por lo tanto,
puede haber cutinasas adicionales que funcionen durante el ingreso de patógenos en un
sitio localizado manera.
Solo recientemente Li et al . (2003) proporcionaron pruebas moleculares para un
requerimiento de cutinasa para la patogenicidad de Pyrenopeziza brassicae, causa de
manchas de hojas claras en la colza. Un mutante deficiente en cutinasa no logró penetrar
en la cutícula y no pudo desarrollar síntomas de la enfermedad. La complementación de
este mutante con el gen Pbc1 de una sola copia de P. brassicae cutinasa restableció la
actividad de la cutinasa y la patogenicidad.
Sin embargo, la importancia general de funga l cutinasas para la penetración directa
de las superficies de las plantas sigue sin estar clara. El estilo de vida del patógeno,
saprófito o parasitario, puede desempeñar un papel y / o el sitio de ingreso de
patógenos. Pyrenopeziza brassicae no penetra en la hoja a través de los estomas, sino
que penetra directamente en la cutícula (Li et al. , 2003). Por lo tanto, la degradación
enzimática de la cutícula podría ser importante.
Además del papel de las enzimas cutinolíticas fúngicas para el proceso de penetración,
se ha evaluado la regulación, especialmente la inducción de estas enzimas . Los factores
del huésped como los monómeros de cutina podrían servir como señales que activan la
síntesis de la enzima del patógeno (Kolattukudy et al. , 1995). Además, para algunos
patógenos, se ha descrito que los monómeros de cutina son importantes para la inducción
de laformación de aprion orio.
Otro posible aspecto de la función de la cutinasa se informó para Monilia
fructicola . La producción de cutinasa fue inhibida por antioxidantes como el ácido
cafeico en el nivel de transcripción (Wang et al. , 2002). Por lo tanto, se puede suponer
que el microambiente del huésped, por ejemplo el estado de maduración, es un factor
importante para la actividad de la cutinasa.
células madre (Heiler et al. , 1993). Además, la producción de las enzimas pecticas
pectina metilesterasa y poliglacturonato liasa (Deising et al. , 1995) y las proteasas
extracelulares (Rauscher et al. , 1995) de este hongo de la roya depende de la
diferenciación de las estructuras de infección. Aparentemente, la acción concertada de
CWDE permite el crecimiento de la hifa a través del tejido de la hoja, pero previene la
maceración extensa de la pared celular y la muerte celular que interferiría con el estilo de
vida biotrófico del hongo.
Para el hongo biotrófico Blumeria graminis f.sp. hordei hay claros indicios de la
función de los CWDE. La celobiohidrolasa I está presente en la punta del tubo de germen
appressorial mientras que la isoforma II es presienten en la punta del tubo de germen
primario (Pryce-Jones et al., 1999).
Durante su fase biotrófica, el micelio de Venturia inaequalis no macera el tejido del
huésped y está restringido al área entre la cutícula y la pared celular epidérmica
externa. Se necesitan cantidades bajas de CWDE para eliminar barreras físicas y liberar
nutrientes. Kollar (1994) detectó un patrón de doce isoenzimas de células que se producen
constitutivamente en cantidades muy bajas in situ , así como en cultivos in vitro de
diferentes aislados de V. inaequalis . Este complejo sistema celulítico, con baja
variabilidad, parece estar correlacionado con la virulencia del hongo o puede dar
flexibilidad con propiedades que contribuyen al rendimiento de la enzima.
Xylan es el hemicelulosa predominante en las paredes celulares de las plantas que
contienen residuos de xilosa unidos por 1, 4-ß, que pueden ser sustituidos por diferentes
grupos laterales. La biodegradación de la cadena principal de xilano depende
principalmente de dos clases de enzimas, endo - 1,4 - ß - xilanasas (EC 3.2.1.8), que
hidrolizan la cadena principal de xilosa unida al 1,4 - ß y ß - xilosa (EC 3.2.1.37), que
hidrolizan xylobiose y otros xylooligosacchari cortos que resultan de la acción de las
endoxilanasas.
Debido a su papel potencial en la patogenicidad fúngica, las xilanasas se han
purificado y caracterizado a partir de un número creciente de hongos fitopatógenos y los
genes que codifican xilanasas se han clonado ycaracterizado. Wu et al. (1997) informaron
hasta cinco xilanasas del hongo de la explosión del arroz Magnaportha grisea, y se han
identificado al menos cuatro xilanasas diferentes a partir del hongo de la mancha de la
hoja del maíz, Cochliobolus carbonum (Apel et al., 1993; Apel-Bi rkhold y Walton,
1996), cada uno difiriendo en peso molecular y valores de pI. Los mutantes del patógeno
de maíz C. carbonum que carecían específicamente de un gen funcional para una enzima
degradadora de xilano mostraron una actividad reducida del 85-94%, pero el crecimiento
de esta cepa era indistinguible del tipo salvaje en medios que contenían paredes de células
de maíz o xilano como el única fuente de carbono (Apel et al. , 1993). Algunas de las
xilanasas se inducen solo durante la infección (Apel-Birkhold y Walton, 1996), lo que
sugiere diferentes conjuntos de funciones endoxilanasas en el crecimiento saprófito y
patogénico de hongos.
Grandes cantidades de CWDE son secretadas por saprófitos y patógenos
necrotróficos. En contraste con los hongos biotróficos, la participación de estas enzimas
en el proceso de penetración de los hongos necrotróficos es desconocida . Estos hongos
producen un alto nivel de CWDE durante la infección. Por lo tanto, es difícil hacer una
distinción entre la penetración de la superficie de la planta y la maceración del tejido
vegetal para el suministro de nutrientes. Debido a la importancia de los CWDE,
especialmente las enzimas pécticas, para colonizar el tejido vegetal, este tema será
discutido luego.
Los patógenos de las plantas se pueden dividir ampliamente en aquellos que matan al
huésped y se alimentan de los contenidos, los denominados necrótrofos y aquellos que
requieren un hospedador vivo para completar su ciclo de vida, los biotrofos.
4.4.1 Necrotrophs
Los parásitos necrotróficos obtienen sus nutrientes de los tejidos vegetales muertos. Estos
hongos se establecen dentro del tejido del huésped liberando enzimas de maceración y /
o enzimas desintoxicantes y fitotoxinas, que interrumpen la integridad celular y causan la
muerte celular de forma inmediata.
4.4.2 Biotrophs
Los hongos biotróficos que infectan plantas han desarrollado una relación íntima con sus
plantas hospedadoras. A diferencia de los necrótrofos, estos hongos colonizan y
extraen nutrientes solo
de tejido vivo. Este grupo representa económicamente los hongos parásitos de plantas
más importantes, incluidos los mildius vellosos, mildius polvorientos y royas. Además de
la pérdida de área foliar fotosintéticamente activa, la enorme producción de esporas de
estos hongos da como resultado una pérdida significativa de biomasa por parte del cultivo
enfermo.
Los patógenos hemibiotróficos están tipificados por una fase transitoria del estilo de
vida biotrófico. Estos hongos tienen fases de crecimiento biotróficas iniciales antes de
pasar a matar al huésped. Los ejemplos de hemibiótopos son Phytophthora
infestans , Cladosporium fulvum , Colletotrichum spp. y Magnaporthe grisea . Se ha
observado una fase predominantemente biotrófica hasta la reproducción en parásitos
como Septoria spp., Claviceps spp. y Venturia inaequalis (Parbery, 1996).
A diferencia de los hemibiotrofos, los hongos biotróficos obligados requieren plantas
hospedadoras vivas para completar su ciclo de vida. Un requisito particular para el éxito
de la infección es la capacidad de mantener vivas las células huésped. Los patógenos
obligatorios forman asociaciones de intimidación estables con sus anfitriones con los que
pueden coexistir durante un período de tiempo. Por lo tanto, causan muy poco daño
sistémico a las plantas hospedadoras. Mendgen y Hahn ofrecen una comparación de la
infección de biotrofos y hemibiotrofos en las plantas. (2002).
Para establecer una infección exitosa, los hongos patógenos biotróficos dependen de las
células hospedadoras vivas. Por lo tanto, la reacción de defensa fatal de las plantas es la
llamada reacción de hipersensibilidad, una muerte celular programada localizada en los
sitios de infección. Para una interacción biotrófica a largo plazo, la supresión o evitación
de la defensa de la planta es un prerrequisito importante (Panstruga, 2003). Sin embargo,
se han descrito varios genes avirulentos fúngicos que pueden evitar una interacción
compatible en plantas hospedadoras que contienen el gen de resistencia correspondiente.
Los ejemplos mejor estudiados de este grupo son los genes avirulencia (Avr)
de Cladosporium fulvum (Laugé y de Wit, 1998). Recientemente, una interacción directa
entre las proteínas de avirulencia de C. fulvum y la enfermedad del tomate resistan Se
demostraron las proteínas ce que conducen a la activación de la reacción de
hipersensibilidad (Rooney et al. , 2005).
¿Los hongos biotróficos obligados tienen la competencia para influir en los procesos
en sus huéspedes? Curiosamente, recientemente se informó sobre el primer ejemplo de
una posible proteína fungosa fúngica del hongo de la roya Uromyces fabae : la proteína
(RTP1p: proteínas transferidas a la roya) con una secuencia de señal potencial se translocó
de la matriz extrafustival al citoplasma de la célula huésped infectada (Struck et al. ,
2004b). Esta proteína podría estar involucrada en fenómenos de señalización entre el
huésped y el parásito.