PRESENTADO POR:

BRIAN JAVIER ATILANO CASTILLO

ANGELICA MARIA JIMENEZ ATENCIA
LUISA FERNANDAD PAEZ VITAL
SHARON ZAPA BUELVAS

PRESENTARLO A:
ING. MSc. YENIS PASTRANA PUCHE

MICROBILOGIA GENERAL

UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA
FACULTAD DE INGENIERIAS
DEPARTAMENTO DE INGENIERIA DE
ALIMENTOS
PROGRAMA DE INGENIERIA DE ALIMENTOS
BERASTEGUI – CÓRDOBA
19-11-2014
 AISLAMIENTO DE Pseudomona Mallei A PARTIR DE CEBOLLIN
Pseudomonas mallei insulation from horsemeat
Brian Atilano*, Angélica Jiménez2, Luisa Páez3, Sharon zapa4.

Resumen
En el presente estudio sobre una bacteria, fue el aislamiento de Pseudomona mallei a partir de la
carne de caballo, peculiar en el muermo del mismo, para esto previamente se investigaron las
características, requerimientos nutricionales y las condiciones ambientales óptimas para su
crecimiento. Se realizaron una serie de procedimientos en las cuales tenemos: los pre-
enriquecimientos, tinciones y pruebas bioquímicas en donde los resultados obtenidos fueron:
Crecimiento de colonias sospechosas (de color oscuro) en agar McConkey, en las tinciones se
observaron bacilos Gram negativos, y en las pruebas bioquímicas resultados para gelatinasa con
su respectivo tubo de control la cual fue positiva ya que la bacteria licuo la estructura de la
gelatina, en el medio Sim con la presencia de sulfuro, en Lia hubo una reacción acida por la
fermentación y finalmente en catalasa con la presencia de burbujas siendo esta también positiva;
esto coincide con las características de este microorganismo. Por ende se pudo afirmar que se
logró el aislamiento de Pseudomonas mallei a partir de la carne de caballo estudiada, la cual
demostraremos de forma detallada en el siguiente artículo.
Palabras claves: Pseudomonas mallei, muermo, aislamiento.

Abstract
In this study of bacteria was the isolation of Pseudomonas mallei from horsemeat, peculiar
glanders thereof for this beforehand characteristics, nutritional requirements and optimal
environmental conditions for growth were investigated. The pre-enrichment, staining and
biochemical tests where the results obtained were: a series of procedures in which we were
performed Growth suspect colonies (dark) in McConkey agar in staining Gram negative rods were
observed, and biochemical tests results in gelatinase with its respective control tube which was
positive bacteria as the liquefied gelatin structure, Sim medium in the presence of sulfur in acid Lia
was a reaction by fermentation and finally catalase in the presence of bubbles is also being
positive; this agrees with the features of this organism. Could therefore say that the isolation of
Pseudomonas mallei was achieved from horsemeat study, which will show in detail in the next
article.

Keywords: Pseudomonas mallei, glanders, isolation.

__________________________________

*,2,3,4
Ingeniería de alimentos, Estudiantes curso Microbiología general. Universidad de Córdoba. Berástegui
– Colombia.
* Dirección de residencia: calle 5ª- Cra 12 barrio santa maría, Cereté- Córdoba. Teléfono celular: 314 567
5709. Correo electrónico: batilano@correo.unicordoba.edu.co.
 INTRODICCIÓN

CLASIFICACIÓN CIENTÍFICA
Reino: Monera
Filo: Proteobacteria
Clase: Proteobacteria beta
Orden: Burkholderiales
Familia: Burkholderiaceae
Género: Burkholderia
Especie: B. mallei

Es un bacilo y a veces cocobacilo Gram negativo. Es el agente causal de la enfermedad

llamada muermo; el muermo es una enfermedad contagiosa fatal de los caballos, burros y mulas,
y es causada por esta bacteria,Se puede encontrar en carne de caballo.

Los organismos son principalmente extracelulares y con los extremos redondeados, de 2–5 μm de
largo y 0,3–0,8 μm de ancho y con inclusiones granulares de varios tamaños; a menudo se tiñen
irregularmente y no tienen cápsulas ni forman esporas. Mediante microscopía electrónica se ha
establecido la presencia de una cubierta similar a una cápsula. Esta cápsula está compuesta por
carbohidratos neutros y sirve para proteger a la célula frente a factores ambientales
desfavorables. A diferencia de otros organismos del grupo Burkholderia mallei no tiene flagelos y
por tanto no es móvil. Los organismos son difíciles de mostrar en secciones de tejido, donde
pueden presentar una apariencia globular. En los medios de cultivo varía su apariencia, que
depende de la edad del cultivo y el tipo de medio. En los cultivos viejos existe un pleomorfismo
claro. Forman filamentos ramificados en la superficie de los medios de cultivo. 1
Se caracterizan por ser:

 Bacilo Gram negativo

 Inmóvil
 Oxidasa y catalasa positivos
 Usualmente crecen en McConkey. Agar sangre
 Usualmente oxidadores de carbohidratos
Este microorganismo es bastante numeroso en los frotis de las lesiones frescas, aunque en las
lesiones viejas son escasos. Deberían teñirse con azul de metileno o con la tinción de Gram.2

1
CARLOS HERNANDEZ. Respuesta de la salud pública a las armas biológicas y químicas. Pág. 196
2
http://www.oie.int/esp/normes/mmanual/pdf_es/2.5.08_%20Muermo.pdf
Las características de cultivo de esta bacteria es de manera preferible intentar el aislamiento a
partir de lesiones no abiertas y sin contaminar. El organismo es aeróbico y, opcionalmente,
anaerobio solamente en presencia de nitrato, creciendo de forma óptima a 37°C. Crece bien
aunque lentamente en medios de cultivo ordinarios y se recomienda la incubación de los cultivos
durante 72 horas; el enriquecimiento con glicerol es particularmente útil. Después de unos pocos
días en agar con glicerol se observa un crecimiento confluente con un color ligeramente cremoso,
de aspecto liso, húmedo y viscoso. El cultivo se engrosa si la incubación es prolongada, y se
vuelve marrón oscuro y duro. También crece bien en agar–glicerol–patata y en caldo con glicerol,
en los que forma unas bolitas viscosas. En agar nutritivo, el crecimiento es mucho menos
exuberante, y, en gelatina, el crecimiento es pobre. En muestras que no se han obtenido bajo
condiciones estériles, el crecimiento de Pseudomona mallei es normalmente encubierto por el de
otras bacterias.

Pseudomona mallei fermenta consistentemente la glucosa y otros carbohidratos como la

arabinosa, fructosa, galactosa y manosa. Pseudomona mallei no produce indol, no hemoliza la
sangre de caballo y los cultivos no producen pigmentos difusibles. El microorganismo es
susceptible a numerosos desinfectantes: cloruro de benzalconio, iodo, cloruro de mercurio,
permanganato de potasio, 1% hipoclorito de sodio y etanol. Sin embargo es menos susceptible a
desinfectantes fenólicos, aunque se destruye a 55ºC durante 10 minutos o por la acción de
radiaciones ultravioleta durante 10 minutos. El microorganismo, muere en pocas semanas en las
secreciones y excreciones: sobrevive durante 20 dias en el agua, y persiste durante 6 semanas en
los establos.3

El muermo es una enfermedad contagiosa fatal de los caballos, burros y mulas, y es causada por
la infección con la bacteria Pseudomona mallei (la bacteria se ha clasificado previamente como
Pfeifferella, Loefflerella, Malleomyces o Actinobacillus). La enfermedad provoca nódulos y
ulceraciones en el tracto respiratorio superior y en los pulmones. También se presenta una forma
de la enfermedad que afecta a la piel y se conoce como “farcy”. El control del muermo requiere
ensayos en los casos clínicos sospechosos, el examen de los équidos aparentemente normales y
la eliminación de los animales positivos. Se transmite a los humanos, por lo que todo el material
infectado/contaminado o potencialmente infectado/contaminado debe manejarse en un laboratorio
que cumpla los requisitos para la contención de los patógenos.

El muermo ha sido erradicado de muchos países de manera legal, mediante la eliminación de los
animales infectados y restricciones en la importación. Persiste en algunos países asiáticos,
africanos y de América del Sur. Se puede considerar una enfermedad re-emergente y puede
importarse a áreas libres de muermo por équidos de compañía o de carreras.

3
www.epidemiologia.vet.ulpgc.es
 MATERIALES Y METODOS

Sitio experimental:
Este estudio se desarrolló en un laboratorio de microbiología en la Universidad de Córdoba sede
Berástegui, municipio de Ciénaga de Oro, departamento de Córdoba-Colombia, ubicada a 20
m.s.n.m, humedad relativa del 85,5% aproximadamente, una precipitación anual de 1200 mm,
temperatura promedio de 27 ° C en las coordenadas 8 ° 53’ latitud norte, 75° 35’ longitud oeste
con respecto al meridiano de Greenwich. (Institución Geográfica AgustínCodazzi).

- Materiales:
 vaso de precipitado tapa rosca (250 ml).
 100 ml. de agua de peptonasa al 1%
 3 matraz aforado de 100 ml.
 8 cajas de Petri
 Cristal violeta
 Lugol
 Alcohol Acetona
 Safranina
 1 portaobjeto
 1 microscopio

- Medios de Cultivos
 Agar sangre al 5%
 Agar Mac Conkey

- Pruebas bioquímicas

 Gelatinasa
- Medio Gelatina (2 tubos)

 Descarboxilasa
- Lia

 Movilidad
- Medio SIM

 Catalasa
- 1 Portaobjeto
- H2O2 (peróxido de hidrogeno)

Métodos:

Se realizaron las pruebas de manera que tuviéramos el conocimiento básico de cada una de ellas
teniendo en cuenta (cambio de color en el medio y sus respectivas reacciones), y en gelatinasa se
tomó un tubo de control para observar sus cambios, buscando así resultados más confiables.
  Enriquecimiento selectivo

Después de hacer las diluciones se sembró la solución en agar McConkey se introdujo en

jarra de Gaspack con el fin de crear ambiente de anaerobiosis y se incubó a 37 ºC durante
24 horas.

 Tinciones y pruebas bioquímicas

Para la realización de estas pruebas se utilizaron las colonias, se puede decir

“sospechosas” de Pseudomonas mallei (violetas u oscuro de forma alargadas y redondas)
que crecieron en agar McConkey. Se realizó tinción de Gram y las pruebas bioquímicas
para la confirmación de la presencia del microorganismo las cuales fueron Sim, Lia,
gelatinasa y catalasa.

RESULTADOS Y DISCUSION

Después de realizar todos los procedimientos mencionados anteriormente, los resultados

obtenidos en este aislamiento fueron los siguientes:

 Crecimiento en agar selectivo: En esta prueba se observaron colonias, “sospechosas”

de Pseudomonas mallei en agar McConkey, es decir colonias de color violetas u oscuras.
(Ver Figura # 1)

 Tinciones: Para la tinción de Gram se observaron bacilos Gram negativos, dichos

resultados son característicos del microorganismo, que, en el la presente investigación
pretendiamos a aislar.
(Ver figura # 2)

 Pruebas bioquímicas: para la determinación de la Pseudomona mallei se tuvieron en

cuenta las siguientes pruebas bioquímicas y estos fueron sus resultados

 Gelatinasa:
 CONCLUSIONES

Se confirmó la presencia de Pseudomonas mallei, en la carne de caballo estudiada en el

laboratorio, ya que se pudieron observar las características microscópicas de la bacteria
(bacilos Gram negativos), gracias a las tinciones realizadas.

Además de esto, con las pruebas bioquímicas (catalasa, gelatinasa y LIA) se pudo
confirmar que se trataba de la bacteria buscada pseudomonas mallei ya que todas
resultaron positivas.

A partir de lo observado durante los resultados del aislamento el grupo de trabajo

concluye que posiblemente se aisló la bacteria deseada (Pseudomonas mallei en carne
de caballo) por la características encontradas tanto en las pruebas bioquímicas como en
las tinciones y basándonos en la bibliografía investigada.
 ANEXOS

 Crecimiento en agar selectivo

Figura #1. Agar McConkey

 Tinción

Figura #2. Tinción de Gram

  Pruebas bioquímicas

Figura #3. Prueba Figura #4. Prueba

Gelatinasa. Descarboxilasa.

Medio Gelatina Medio LIA

Figura #5. Prueba Figura #6. Prueba

Motilidad. Catalasa
Medio SIM