Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional De Ciencias Biológicas

Prolongación Manuel Carpio y Plan de Ayala s/n, Miguel Hidalgo, Santo Tomás, 11350 Ciudad de México, CDMX

Efecto de la concentración de enzima y pH sobre la velocidad de la

hidrólisis de la sacarosa

Efecto de [E] sobre la velocidad de

reacción
-Objetivos.-
Paso 1.-
-Demostrar que la velocidad de la
reacción enzimática es directamente Cálculo de (μmoles) azúcar reductor/ 2
proporcional a la concentración. ml
1.- Sustituir en la ecuación de la recta de
- Analizar la importancia del pH del la curva tipo y = 0,1211x - 0,0356
medio sobre la velocidad de una reacción
Despeje:
enzimática y su efecto el carácter iónico
de la enzima y del sustrato. x=0,0356+y/0,1211
y= Absorbancia
Resultados.-
Sustitución:
Tabla 1.- Datos obtenidos sobre efecto de la
concentración enzima Testigo: Absorbancia 0

x=0,0356+0/0,1211
x= 0.293

P1: Absorbancia de 0.012

x=0,0356+0.012/0,1211

x= 0.393

P2: Absorbancia de 0.182

Tabla 2.- Datos obtenidos sobre el efecto de x=0,0356+0.182/0,1211

pH en la velocidad de reacción
x= 1.79

P3: Absorbancia de 0.262

x=0,0356+0.262/0,1211

x= 2.45

P4: Absorbancia de 0.514

Cálculos.- x=0,0356+0.514/0,1211
x= 4.53 - Realizar la sustitución para cada
tubo problema utilizando los
P5: Absorbancia de 0.622 valores correspondientes de
(μmoles) azúcar reductor/ 2 ml.
x=0,0356+0.622/0,1211
Paso 4.-
x= 5.43
Concentración de enzima (µg/ml)
Paso 2.-
Tubo P1:
Concentración de sustrato (M)
- 1 µg - 1ml
0.2M = 0.2 moles / 1L X - 0.10ml
- x= 1moles
Testigo= 0.5 ml
- Realizar la sustitución para cada tubo
- 0.2moles - 1000ml problema utilizando la cantidad en ml
- X - 0.50ml usado de enzima.
- x= 1x10-4moles

- 1x10-4moles - 2ml Efecto de pH sobre la velocidad de

- X - 1000ml reacción
- X=0.05M Realizar la sustitución como en los pasos
1, 2 y 3 de efecto de [E] sobre la
-Los valores son los mismos para todos
velocidad de reacción, utilizando los
los tubos
valores correspondientes presentados en
Paso 3.- la tabla (Tabla 2.- Efecto de pH en la
velocidad de reacción).
Velocidad (en unidades de invertasa)
Representación gráfica
[Azc Red]
𝑉𝑜 = Efecto de la [E] sobre la velocidad de
5 min 𝑋 2 𝑚𝑙 𝐴𝑧𝑅𝑒𝑑
reacción
Sustitución

Tubo testigo:

(μmoles) azúcar reductor/ 2 ml: 0.293

0.293[Azc Red]
𝑉𝑜 = = 0.029
5 min 𝑋 2 𝑚𝑙 𝐴𝑧𝑅𝑒𝑑

Tubo P1:

(μmoles) azúcar reductor/ 2 ml: 0.393

0.64[Azc Red]
𝑉𝑜 = = 0.039
5 min 𝑋 2 𝑚𝑙 𝐴𝑧𝑅𝑒𝑑
 Las enzimas son proteínas, por lo
tanto el pH tiene un efecto
importante sobre la velocidad de la
reacción.

La mayoría de las proteínas sólo es

activa dentro de un estrecho rango
de pH, en general de 5 a 9.

Efecto de pH sobre la velocidad de Como se observa la velocidad de

reacción reacción aumento conforme el
cambio de pH.

A cierto pH las cargas de residuos de

los aminoácidos que participan en el
sitio activo están en condiciones
óptimas para la actividad catalítica
sobre el sustrato correspondiente.

A ese pH la velocidad de reacción

será máxima; se le conoce como pH
óptimo de la enzima. En la práctica
nuestro pH óptimo fue de 6.5, este
valor de pH difiere con el esperado
pues anteriormente la enzima se
encontraba trabajando a un pH de
Discusión 4.5.

Efecto de [E] sobre la velocidad de En valores de pH demasiado ácidos

reacción o alcalinos, no solamente puede
estar modificado el sitio activo, sino
Se puede observar la relación
que la estructura terciaria de toda la
directamente proporcional que existe
molécula se encontrará alterada
entre la velocidad de la reacción y la
(puede llegar a la desnaturalización),
concentración de enzima, como se
y no habrá actividad enzimática,
obtuvo en nuestra gráfica. Esto
como ocurrió con nuestra enzima en
ocurre porque al aumentar la
un pH de 7.5, donde la velocidad de
concentración de enzima aumenta la
reacción disminuyó de forma drástica.
interacción enzima-sustrato y las
moléculas actuarán
independientemente en una solución
para transformar más sustrato en un Conclusiones
intervalo de tiempo.
- A pH ácidos la enzima invertasa
Efecto de pH sobre la velocidad de no tiene actividad.
reacción - El pH óptimo de la enzima fue de
6.5
- A pH de 7.5 la enzima se X= 27,000g = 27 Kg
desnaturalizó.

Bibliografía

Libro electrónico

- Peña Antonio, Arroyo Ángel,

Bioquímica, Limusa Noriega
Editores, 2da Edición, pp.199-
202, (2004).
- Christensen Halvor N., Palmer
Graham A., Cinética Enzimática,
Editorial Reverté, España, pp.
117-119, (1980).
- Voet Donald, Bioquímica, 3ra
Edición, Editorial Medica
Panamericana, México, pp.510,
(2016).

Preguntas extra.-

1.- ¿Cuántos tipos de isoformas

tiene la enzima?

Cuatro:

- Extracelular
- Intracelular
- Vacuolar
- Periplasmática

2.- Calcule las concentraciones

molares de sustratos y enzima
para el tubo 1. Considere el peso
molecular de la enzima de 270,000
daltones.

PM invertasa = 270,000 daltones

1 ml de enzima – 270,000 g = 270 Kg

Para el tubo 1.-

Volumen= 0.1 ml

- 1 ml de enzima – 270,000 g
0.1 ml - x