CURVA DE CALIBRACIÓN PARA EL SEGUIMIENTO

DE LA CONCENTRACIÓN DE AZUL DE
METILENO

Presentado Por:

Grupo 03
Andres Felipe Trochez Sanchez
Lina Julieth Ospina León
Joan Andres Sanchez Bejarano

Presentado A:
Andrea Del Pilar Villa Jamaica

Escuela de Ingeniería Química

Universidad del Valle-Sede Meléndez
12 de Marzo de 2018

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 TABLA DE CONTENIDO
Pág.
Resumen 2
Lista de figuras 3
Lista de tablas 3

CAPÍTULOS
1. INTRODUCCIÓN 4
2. TEORÍA 4
3. PROCEDIMIENTO 5
4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 6
5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES 8
PROBLEMA DE INGENIERÍA 11
NOMENCLATURA
12
REFERENCIAS 13

APÉNDICES
A. CÁLCULOS 9

2
 LISTA DE FIGURAS

Pág.
1. Curva de calibración 4
2. Curva de calibración concentración-absorbancia 7

LISTA DE TABLAS

1. Datos de concentración y absorbancia 6

2. Incertidumbre para los elementos de le ecuación de la recta 7

3
 1. INTRODUCCIÓN

Un método analítico usualmente utilizado para determinar la concentración de una sustancia

(analito) en una muestra desconocida, sobre todo en una disolución, es la curva de
calibración. Esta toma como fundamento una medida del analito que sea proporcional a su
concentración, de tal forma que al realizar una curva como se muestra en la Gráfica 1, se
pueda predecir de manera muy aproximada el comportamiento de la sustancia, y esto será
posible al obtener una ecuación de calibración a partir de la linealización de los datos.[1]

Gráfica 1. Curva de Calibración.

En esta práctica se usó como señal la absorbancia, que define la relación entre la intensidad
de luz incidente sobre una muestra y la transmitida por la misma, a una determinada longitud
de onda λ.

El objetivo principal de esta práctica fue adquirir conocimientos para la elaboración de una
curva de calibración partiendo de una serie de datos de absorbancia, de diferentes soluciones
variando la concentración de azul de metileno, obtenidos experimentalmente por medio de un
espectrofotómetro.

2. TEORÍA

4
La espectrofotometría se basa en la capacidad de las sustancias de absorber la luz, a una
longitud de onda (λ) determinada, en proporción directa a la cantidad de materia presente.
Mediante el espectrofotómetro se obtiene una medida del valor de la absorbancia de una
muestra a determinada longitud de onda. Este equipo presenta 5 componentes básicos:
- Una fuente de luz que puede ser de tungsteno, infrarroja o de luz ultravioleta,
dependiendo del espectro en que se trabaje.
- Un monocromador para la selección de la longitud de onda que incidirá sobre la
muestra
- Celda o cubeta para la muestra
- Detector para medir la intensidad de la luz transmitida o absorbida
- Sistema de lectura

Al incidir un haz de luz (​L​i​) de determinada longitud de onda (λ) sobre una muestra, parte de
esta luz es absorbida y la otra parte es reflejada o transmitida (L​f),
​ el cual puede presentarse de esta
manera

Figura 1. El paso del haz de luz sobre la muestra

La absorbancia de una solución se calcula mediante la ley de Beer y Lambert, que es

A=​εcl
Formula 1. Ley de Beer y Lambert

A: Absorbancia
ε: Coeficiente de extinción molar
c: Concentración de la muestra
l: Diámetro de la cubeta

Dado que ε es una constante para cada sustancia y l también es fijo, la absorbancia depende
directamente de la concentración molar[2].

3. PROCEDIMIENTO

Para llevar a cabo esta práctica de laboratorio se hizo uso de los siguientes pasos:

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 I. Se pesaron 50 mg de azul de metileno y se diluyó en un beaker con agua desionizada.
II. Se vertió el contenido en un balón aforado de 500 mL y se agregó agua hasta su aforo
para crear una solución madre de 200 ppm.
III. Se hicieron los cálculos respectivos para obtener, a partir de la solución madre,
soluciones de 50 mL con concentraciones: 20, 60, 100, 140 y 180 ppm: haciendo uso
de la fórmula c​1​v​1​=c​2​v​2 donde c​1​: 200 ppm, c​2​: concentración deseada, v​2​: 50 mL y v​1​:
volumen requerido de solución madre.
IV. Con lo anterior, se tomó el volumen v​1 de solución madre y se diluyó en balones
aforados de 50 mL hasta obtener soluciones requeridas.
V. Por medio de un espectrofotómetro se tomó solo una vez los datos de absorbancia
para cada solución, siendo el blanco el agua desionizada. (Se utilizó una longitud de
onda λ=665 nm)
VI. Con los datos obtenidos se realizó el ajuste lineal de la curva de calibración.

Para conocer de manera más detallada el funcionamiento del espectrofotómetro, véase en la

sección de ​Apéndice .

4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La curva de calibración obtenida de la práctica representa un modelo lineal en el que la

medida del analito que es proporcional a la concentración es la absorbancia.

A continuación se muestra, en la tabla 1, los datos obtenidos de absorbancia para cada

concentración. Se evidencia un aumento del valor de la absorbancia a mayores
concentraciones, esto se debe a que el azul de metileno absorbe energía proveniente de la
longitud de onda que intenta pasar por el analito, es decir que la concentración (azul de
metileno) es directamente proporcional a la absorbancia.

ABSORBANCIA (A) CONCENTRACIÓN (ppm)

0 0

0.191 20

0.716 60

1.259 100

1.663 140

6
 2.033 180

2.728 200

Tabla 1. Datos de concentración y absorbancia.

Los resultados de la práctica sugieren que tanto la Ley de Lambert como la de Beer son
aplicables al tratarse de un material homogéneo, una disolución y al obtener un ajuste lineal
en la curva de calibración.

La selección del valor de longitud de onda es un aspecto de suma importancia, debido a que
esta logra una mayor sensibilidad que permite medir la absorbancia en soluciones de baja
concentración. Siempre el valor de la longitud de onda se hace teniendo en cuenta la medida
que corresponda al máximo valor de absorbancia. La longitud de onda estándar para una
disolución de azul de metileno es de 670 nm, en nuestro caso usamos 665 nm porque así lo
estableció la guia. [3][4]

Gráfica 2. Curva de calibración concentración-absorbancia

La anterior Gráfica 2 muestra la absorbancia en función de la concentración y las

incertidumbres halladas por el método de mínimos cuadrados. El valor de absorbancia se
tomó como el promedio de los datos obtenidos experimentalmente.

Valor Incertidumbre

Pendiente 1.29x10​-2 ±1.0256x10​-3

Intercepto -7.8x10​-2 ±1.3631x10​-1

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 R​2 9.755x10​-1
Tabla 2. Incertidumbres para los elementos de la ecuación de la recta

Continuando con nuestra discusión, con respecto a la curva de calibración tras haber
linealizado y obtenido la ecuación que describe dicha curva, se procedió a hallar las
incertidumbres correspondientes al intercepto y a la pendiente. Se puede observar que la
incertidumbre de la pendiente es relativamente pequeña siendo esta de apenas ± 1.0256x10​-3
con respecto a la del intercepto que es ±1.3631x10​-1​. Sin embargo, como se puede apreciar en
la tabla 2, el valor de R​2 es muy próximo a 1, lo cual nos indica que nuestra curva de
calibración tuvo un comportamiento casi lineal, debido a que el porcentaje de error es muy
pequeño se puede aceptar la ecuación obtenida en la calibración.

Este pequeño porcentaje de error se debe a varios factores que ocurrieron durante la práctica
tales como, malas mediciones, la balanza analitica que utilizamos no se encontraba bien
calibrada, el espectrofotómetro que utilizamos no es 100% eficiente, por lo tanto nos marcará
un valor con cierto nivel de error, además las celdas cuando se utilizaron no se secaron
correctamente, entonces cuando agregamos una pequeña cantidad de azul de metileno de otra
composición, está altera en cierta medida la composición del que se encuentra en la celda y
como consecuencia aumentaría un poco su absorbancia, ...etc.

Respecto a la ecuación de la recta obtenida se puede decir que tiene la forma general:
A=mC+b; donde A es la absorbancia y C es la concentración (en el caso de una ecuación de
la recta común seria “Y” y “X” respectivamente).

En relación a la pendiente, ésta tiene un significado matemático siendo el producto entre la

absortividad de la muestra y el espesor de la celda utilizada en el espectrofotómetro. Lo
anterior sugiere que el valor de la pendiente se puede ver afectado por el procedimiento
durante la práctica y que por ende el intercepto, el cual depende de la pendiente , también lo
hará, esto puede explicar las incertidumbres encontradas[5].

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

El método de curva de calibración es un método muy eficaz a la hora de hacer el seguimiento

de la concentración de una sustancia o estudiar el comportamiento de un analito en las
condiciones empleadas en la práctica experimental.

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La absorbancia aumenta de manera directamente proporcional con respecto a la
concentración, lo que permite fácilmente conocer la cantidad de una sustancia presente en
una muestra, en relación a cierto valor de absorbancia.

Las desviaciones en los resultado de absorbancia se deben a factores relaciones con la

realización de la práctica, tales como la medición de los gramos de azul de metileno y la
preparación de las soluciones, produciendo errores en los datos, lo cual se aprecia en el valor
del coeficiente de determinación, R​2​.

APÉNDICE
CÁLCULOS.

● ¿Cuál es el principio del funcionamiento del espectrofotómetro?

Un espectrofotómetro es un instrumento que posee la capacidad de proyectar un haz de luz a

través de una muestra y en ella mide la cantidad de luz que es absorbida por esta. El
monocromador separa las longitudes de onda de la luz y enfoca cada una de ellas en el
fotodetector.

Figura 2. Funcionamiento de un espectrofotómetro.

Hoy en día existen dos tipos de espectrofotómetros: haz único: mide la intensidad luminosa
relativa del haz antes y después de insertar una muestra de ensayo; y haz doble: compara la
intensidad de luz entre dos trayectorias de luz, una es la muestra de referencia.

Un espectrofotómetro de doble haz realiza lecturas de comparación mucho más fáciles y asu
vez más estables. Pero una sola máquina de haz puede tener una gama más amplia de
frecuencias de luz.

Muchos espectrofotómetros antiguos deben calibrarse mediante un procedimiento conocido

como “reducción a cero”. La absorbancia de una sustancia de referencia se establece como un

9
valor base, por lo que las absorbancias de todas las demás sustancias registran con respecto a
la sustancia inicial “puesta a cero”.

● ¿De cuánto fue el ajuste que se obtuvo?

Obtuvimos un ajuste correspondiente a 0.9755

● Señale 5 posibles errores experimentales que tuvo o puede tener durante la

práctica y además, sugiera cómo eliminar los mismos.
Malas mediciones causadas por instrumentos mal calibrados o poco precisos, como la
balanza o las pipetas.
El espectrofotómetro que se utilizó durante la práctica no es el más preciso, pero su
porcentaje de error es aceptable para el objetivo del laboratorio, si se quisiese aumentar
precisión se debería utilizar un equipo más avanzado.
En el espectrofotómetro se utilizaron celdas de plástico las cuales tienen cierto grado de
absorción, además dichas celdas estaban algo rayadas y humedas, si se quiere aumentar la
precisión se debería trabajar con celdas de cuarzo.

● ¿Bajo qué criterios usted determinaría que una de las mediciones debe ser
eliminada en caso de que presente una desviación muy grande comparada con
los demás?

Un dato se puede ignorar cuando nuestro diseño experimental cuenta con una gran cantidad
de datos y estos asu vez son muy cercanos entre sí, por lo tanto su comportamiento sería muy
similar al de los demás, entonces si un dato no sigue el orden común de los otros, se podría
excluir del análisis con el fin de no alterar el resultado final.

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 PROBLEMA DE INGENIERÍA

En una empresa utiliza azul de metileno para dar color a las telas vinílicas utilizadas en
bolsos y zapatos. Hace unos meses se ha observado que las aguas resultantes del lavado de
las telas salen con una tonalidad azul. Se sabe que por normatividad estas no pueden verterse
al alcantarillado con esta característica, por esta razón es necesario que usted determine cuál
es la concentración de colorante en dichas aguas, teniendo en cuenta que:
- El agua únicamente contiene azul de metileno
- Las concentraciones que se utilizan en este proceso son menores a 200 ppm
- Se entrega del departamento de calidad los resultados de absorbancia de la lectura de
espectrofotometría de cuatro muestras obtenidas medidas a una longitud de onda de
665:

Concentración de Azul Absorbancia

de Metileno (ppm)

297.134109 3.75503

352.351163 4.46733

332.310078 4.2088

102.688372 1.24668
Tabla 3. Muestras obtenidas de las aguas residuales

Solución
El problema se soluciono haciendo una curva de calibración, teniendo en cuenta 6 muestras a
diferentes concentraciones, la cual la curva tiene la fórmula :

Absorbancia = 0.0129 * C oncentración − 0.078

Fórmula 2. Curva de calibración obtenida en la práctica

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Dado que necesitamos hallar la concentración a partir de valores de absorbancia, entonces
despejamos de la ecuación la concentración, quedando la siguiente ecuación:

Absorbancia+0.078
C oncentración = 0.0129
Fórmula 3. Curva de calibración en función de la Absorbancia

Con esta ecuación calculamos la concentración de cada una de las muestras.

NOMENCLATURA

Símbolo Definición Unidad

A Absorbancia -
c Concentración ppm
l Longitud atravesada por la luz en la muestra mm

Letras griegas
ε Absortividad 1/(ppm*mm)
λ Longitud de onda nm

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 REFERENCIAS

[1]http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CURVASDECALIBRACION_23498.pdf
Visitada el 15 de abril de 2017.

[2]Quesada M, S. Manual de experimentos de laboratorio para bioquímica (2007), San José,

Costa Rica. Editorial Universidad Estatal de Compostela. Páginas 9-10

[3]Harris D, C. Análisis químico cuantitativo (2007), Reverté, Barcelona. Página 414.

[4]Rubinos González. Utilización de lodos rojos de bauxita en la contención e inactivación

de residuos tóxicos y peligroso (2007), Universidad de Santiago de Compostela, Provincia
de La Coruña. Página 151.

[5]https://webcache.googleusercontent.com/search?q=cache:N5zEH5UYCpUJ:https://www.u
-cursos.cl/odontologia/2010/2/OD0903/1/material_docente/bajar%3Fid_material%3D566977
+&cd=5&hl=es&ct=clnk&gl=co. Visitada el 15 de abril de 2017

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