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En cualquier bioproceso, la esterilización de los medios de cultivo es necesaria para evitar la competencia por el
sustrato entre los microorganismos contaminantes y el microorganismo de interés, con el fin de maximizar el
rendimiento del producto y eliminar el riesgo de perder el lote de producción por causa de la contaminación.
Existen varios métodos de esterilización, entre los cuales se pueden mencionar el calor, la filtración, las
radiaciones de alta energía, las microondas y algunos agentes químicos. Generalmente la esterilización de un
medio de cultivo se efectúa por calor húmedo, en procesos en lote o en continuo. Como se muestra en la figura
5.1, cuando un medio de cultivo se esteriliza en lote, pueden diferenciarse tres etapas durante el proceso:
1. Calentamiento: Tiempo que tarda el total del líquido en alcanzar la temperatura de esterilización (A-B).
2. Mantenimiento: Tiempo que debe mantenerse la temperatura de esterilización (B-C).
3. Enfriamiento: Tiempo que tarda en enfriarse el medio desde la temperatura de esterilización hasta la de
fermentación (C-D).
𝑑N / 𝑑𝑡 = −𝑘𝑁 (5.1)
(5.2)
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LABORATORIO DE BIORREACTORES ELABORÓ: SALGADO ROMÁN J.M., RODRÍGUEZ SIERRA J. C.
ACTUALIZÓ: JIMÉNEZ CASTILLO R I., MARÍA LOURDES MEJÍA FARFÁN.
La ecuación 5.2 indica que si se somete una suspensión de células o esporas viables a un proceso de
esterilización a temperatura constante, al graficar Ln (N/N0) contra el tiempo, la pendiente de la gráfica será el
valor de la constante a dicha temperatura, como se muestra en la figura 5.2.
Los estudios han demostrado que el valor de k es una función de la temperatura, esta funcionalidad tiene la
forma de la ecuación de Arrhenius:
(5.3)
Dónde: A = Constante de Arrhenius para la velocidad de muerte térmica [=] min-1, EA = Energía de activación
[=] cal/mol, R = Constante de los gases [=] 1.9872 cal/(mol K); y T = Temperatura absoluta [=]K.
Los valores de EA y A de la ecuación 5.3, son función, entre otras cosas, de la naturaleza del microorganismo y del
medio líquido en que se encuentren durante el proceso de esterilización.
La muerte térmica de los microorganismos ocurre en cada una de las etapas en que está constituido el ciclo de
esterilización, el cual se diseña para reducir la viabilidad de las esporas originalmente presentes en un determinado
material, hasta un nivel aceptable. Con base en lo anterior, se define un criterio de diseño como:
(5.4)
El criterio de diseño representa, además de la medida del grado de destrucción, la medida de trabajo que deberá
realizarse. Si diferentes tamaños de lotes fueran sometidos a esterilización, manteniendo el valor del criterio de
diseño, se asegura que los distintos lotes reciban el mismo tratamiento térmico. Por las consideraciones anteriores,
el valor del criterio de diseño ( ) se elige para obtener una baja "probabilidad" de sobrevivencia de las esporas.
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Puesto que un ciclo de esterilización se compone de tres partes, el criterio total de diseño estará constituido por:
(5.5)
donde: Ɩπtot= criterio de diseño del ciclo de esterilización, = criterio de diseño de la etapa de calentamiento,
m = criterio de diseño de la etapa de mantenimiento de temperatura y = criterio de diseño de la etapa de
enfriamiento.
De tal manera que al realizar integraciones de cada etapa del ciclo se obtiene:
(5.6)
(5.7)
(5.8)
Para obtenerse la solución analítica de las ecuaciones deben sustituirse en ellas perfiles temperatura-tiempo para
diferentes formas de calentamiento de medios contenidos en biorreactores. Un proceso de esterilización también
puede calcularse utilizando un método gráfico o bien, mediante el método de Richards.
OBJETIVOS.
El alumno aplicará procedimientos para la esterilización de medios de cultivo.
El alumno diseñará un filtro de aire empacado.
El alumno aplicará procedimientos para la esterilización de filtros de aire empacados.
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PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Importante: Todo el procedimiento experimental se realizará bajo la supervisión y asistencia de los
profesores.
RESULTADOS Y DISCUSIÓN.
1. Realice las tablas necesarias para cada prueba, registrando fecha, hora, temperatura de incubación, µl
sembrados, dilución, lectura, resultados en UFC/mL.
2. Calcule la muerte térmica de los microorganismos en medio de cultivo preparado.
3. Determine esterilidad o contaminación en filtro de aire.
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OBSERVACIONES
REFERENCIAS.
1. Aiba, S. y Humprey A.E. Biochemical Engineering. Academic Press. EUA. 1973, 434 págs.
2. Atkinson, B. Reactores Bioquímicos. Reverté. Barcelona. 1986, 296 págs.
3. Atkinson, B. y Mavituha, F. Biochemical Engineering and Biotechnology Handbook. M. Stockton Press.
Nueva York, EUA. 1991, 1271 págs.
4. Demain, A. L. Manual of Industrial Microbiology and Biotechnology. ASM Press. EUA. 1999, 830 págs.
5. Doran, P. M. Bioprocess Engineering Principles. Academic Press. EUA. 1995, 439 págs.
6. Stanbury, P.F. et. al. Principles of Fermentation Technology. Butterworth-Heinemann. EUA. 1999, 376
págs.
7. Vogel, H.C. y Todaro, C. Fermentation and Biochemical Engineering Handbook: Principles, Process Design,
and Equipment. Noyes Publications. 1996, 799 págs.