Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas

Departamento de Bioquímica

Métodos de Análisis

Práctica:

VERIFICACIÓN DEL FUNCIONAMIENTO DE UN

ESPECTROFOTÓMETRO.

Fecha de entrega: 7 de Marzo de 2018.

Profesor: Macías Martínez Victor Manuel

Introducción:

Transmitancia:
La transmitancia T de una solución es la fracción de la radiación incidente transmitida por
la solución:

𝐼
𝑇=
𝐼0

La transmitancia se expresa a menudo como porcentaje:

𝐼
%𝑇 = 𝑥100
𝐼0

Absorbancia:

La absorbancia A de una solución se define mediante la ecuación:

𝐼0
𝐴 = −𝑙𝑜𝑔𝑇 = 𝑙𝑜𝑔
𝐼

La mayor parte de los trabajos analíticos se realizan con soluciones de manera que vamos
a desarrollar la relación que existe entre la concentración de la solución y su capacidad de
absorber radicación.

Objetivo:
Conocer y analizar el funcionamiento correcto de un espectrofotómetro.

DATOS EXPERIMENTALES E INFORME.

A) EXACTITUD DE LA ESCALA DE LONGITUD DE ONDA:

1. MÉTODOD DEL FILTRO DE TIERRAS RARAS (DIDIMIO)

TABLA 1. ESPECTRO DE TRANSMISIÓN DEL FILTRO DE DIDIMIO.

Longitud de onda (nm) %T
400 43 Máximos de
410 53 transmisión.

Mínimos de
transmisión
 420 55
430 48
440 45
450 47
460 46
470 43
480 48
490 58
500 59
510 39
520 27
530 30
540 51
550 68
560 58
570 30
580 70
590 4

ESPECTRO DE TRANSMICIÓN DEL DIDIMIO

80

70

60

50
%T

40

30

20

10

0
350 400 450 500 550 600 650
LONGITUD DE ONDA (nm)

Fig1. Espectro de Transmisión del filtro de didimio.

¿Coincidieron los máximos y mínimos con las longitudes de onda informadas por el
fabricante? ¿En qué longitudes de onda no fue así?
 Coincidieron la mayoría de los máximos y mínimos de longitud de onda del espectro
teórico, excepto en las longitudes de onda: 440, 450, 500, 570 y 580 nm.

2. MÉTODO DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR (𝑵𝒊𝑺𝑶𝟒 . 𝟔𝑯𝟐 𝑶 𝑨𝒍 𝟐𝟎% )

TABLA 2. ESPECTRO DE TRANSMISIÓN DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR (𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2 𝑂 𝐴𝑙 20% )

Longitud de onda (nm) %T
380 5 MAXIMO DE
390 5 TRANSMISIÓN
400 4
410 5
420 7
MINIMO DE
430 16 TRANSMISIÓN
440 31
450 42
460 53
470 65
480 78
490 85
500 88
510 88
520 85
530 81
540 76
550 73
560 66
570 60
580 50
590 42

ESPECTRO DE TRANSMITANCIA DE LA SOLUCIÓN ESTÁNDAR

100

90

80

70

60
%T

50
 FIG 2. Espectro de transmitancia de la solución estándar (𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2 𝑂 𝐴𝑙 20% )

Verificar la longitud de onda en la que se obtuvo el valor máximo de %T

La longitud máxima fue 500nm.

¿Cómo es la exactitud de la escala de longitud de onda del espectrofotómetro a esta

longitud de onda?

La exactitud fotométrica del espectrofotómetro es muy buena debido a que nos dio el
mismo valor de %T a la misma longitud de onda, y comparándola con el espectro de
transmitancia teórico de la solución de (𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2 𝑂 𝐴𝑙 20%) resulta el mismo valor a la
misma longitud de onda obtenido.

B) PROPORCIONALIDAD FOTOMÉTRICA.

TABLA 3. PROPORCIONALIDAD ENTRE A Y λ PARA EL 𝑁𝑖𝑆𝑂4. 6𝐻2 𝑂 𝐴𝑙 20%.

Longitud de onda (nm) Absorbancia

530 0.091
540 0.119
550 0.136
560 0.180
570 0.221
 Gráfico de proporcionalidad entre A y λ para la solución estándar
0.25

0.2

y = 0.0032x - 1.6161
R² = 0.9742
0.15
Absorbancia

0.1

0.05

0
525 530 535 540 545 550 555 560 565 570 575
Longitud de onda (nm)

Fig 3. Gráfico de PROPORCIONALIDAD ENTRE A Y λ PARA EL 𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2 𝑂 𝐴𝑙 20%.

Tabla 4. Variables de la ecuación de la recta obtenidas

Ecuación de la recta Y= 0.0032x-1.6161
pendiente 0.0032
Ordenada al origen -1.6161
Coeficiente de correlación 0.9870

¿Qué se puede concluir respecto a la proporcionalidad fotométrica en ese intervalo de

longitudes de onda?

Que hay buena proporcionalidad fotométrica debido a que no existen variaciones tan
dispersas entre las absorbancias calculadas y las proporcionadas en el apéndice IV.

¿Qué relación existe entre la absorbancia y la longitud de onda en este intervalo de

longitudes de onda?
Hay un intervalo dinámico lineal debido a que las absorbancias obtenidas no varían
respecto de las teóricas lo que nos dice que esa absorbancia corresponde a la longitud de
onda seleccionada.

C) Luz dispersa
Resultados en la tabla
¿Qué puede concluir a ese respecto en el instrumento que evaluó?

No hay luz dispersa presente debido a que las lecturas no sobrepasan el 3% permitido.

D) Ancho de banda

Tabla 5. Ancho de banda, dilución estándar de 𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2 𝑂 𝐴𝑙 20%.

Longitud de onda (nm) %T
500 88

El ancho de banda del espectrofotómetro se encuentra en buen estado no existe

interferencia por presencia de polvo que haga que disminuya, ya que el valor obtenido de
%T fue de 88 y el teórico proporcionado es de 87% mientras que el obtenido es de 88%
entra dentro del 3% permisible.

E) EXACTITUD FOTOMÉTRICA

Tabla 6. METODO DE LOS FILTROS DE TRANSMISIÓN

Longitud de onda (nm) %T

530 (Filtro de 405-600) 86

Existe exactitud fotométrica debido a que el valor obtenido está dentro del 5% de
aceptación el valor obtenido fue de 86% mientras que el esperado era de 84%.
Si la longitud de onda está mal calibrada la exactitud fotométrica se pierde debido a que
nos arrojaría datos que quizá estén por debajo o arriba del 5% de Transmitancia permitido.

Tabla 7. METODO DE LA SOLUCION ESTANDAR DE 𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2 𝑂 𝐴𝑙 20%.

Longitud de onda (nm) ABSORBANCIA
400 1.4
500 0.05

El espectrofotómetro tiene exactitud fotométrica debido a que los valores obtenidos a 400
y 500 nm se encuentran dentro del 5% de aceptación los valores esperados eran de 1.50 y
0.06 para 400 y 500 nm respectivamente.
F) INTERVALO DINÁMICO LINAL DE CONCENTRACIÓN.

Tabla 8. INTERVALO DINAMICO LINEAL DE LA CONCENTRACIÓN.

TUBO Concentración de 𝐴400

𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2𝑂 𝐴𝑙 20%. (M)

1 1´ 0 0 0
2 2´ 0.0095 0.04 0.04
3 3´ 0.0285 0.11 0.1
4 4´ 0.0665 0.23 0.22
5 5´ 0.1045 0.35 0.43
6 6´ 0.1425 0.49 0.45
7 7´ 0.152 0.51 0.48
8 8´ 0.171 0.58 0.54
9 9´ 0.1805 0.54 0.51
10 10´ 0.19 0.61 0.61

Curva de calibración de la solución estándar

0.7
y = 3.1078x + 0.0172
R² = 0.9818
0.6

0.5

0.4
A 400

0.3

0.2

0.1

0
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16 0.18 0.2
Concentración de NiSO4

Fig 4. Gráfico del INTERVALO DINAMICO LINEAL DE LA CONCENTRACIÓN.

 Tabla 9. Variables de la ecuación de la recta obtenidas
Ecuación de la recta Y= 3.1078x+0.0172
pendiente 3.1078
Ordenada al origen 0.0172
Coeficiente de correlación 0.990

El intervalo dinámico a lo largo de las concentraciones es lineal ya que se obtuvo un

coeficiente de correlación de 0.990 lo cual nos indica que el espectrofotómetro está en
buenas condiciones respecto de su fuente de radiación, el monocromador el detector o bien
la presencia de luz dispersa. Que nos indicaría la falla de estas partes del espectrofotómetro
si el intervalo dinámico disminuye.
Preguntas extra:

Preguntas extra

Señale dos causas que originen:

a) Luz extraña

Abertura de la compuerta para muestra.

Filtración de luz al interior de espectrofotómetro por algún sitio no detectado.

b) Cambio en el ancho de banda

Baja intensidad de la luz de la lámpara por su deterioro.

Mal estado del mecanismo de selección de ancho de banda.

c) Alteración de la respuesta relativa o rendimiento instrumental

Muestra muy pequeña y presencia del efecto menisco

Variaciones de voltaje.

Discusión:

La discusión se fue haciendo conforme se resolvieron las preguntas del manual de Métodos de Análisis. Ya
que se fueron explicando los resultados obtenidos en cada punto desarrollado.Conclusión:

Parámetro estudiado Valores de Valores Conclusión

Referencia experimentales
Exactitud de la escala de
longitud de onda

1. Filtro de didimio
Máximos (λ, nm)
Mínimos (λ, nm)
Existe exactitud fotométrica
420,490,550 420,450,500,550,580 en el aparato ya que
400,470,520,600 400,440,470,520,570, coinciden los máx. Y min. De
590 cada uno de los filtros.
 2. Solución de
𝑵𝒊𝑺𝑶𝟒 . 𝟔𝑯𝟐𝑶 𝑨𝒍 𝟐𝟎%.
500
Máximos (λ, nm) 380,600 500
Mínimos (λ, nm) 380,600

Proporcionalidad Hay proporcionalidad

fotométrica Y=0.0032x-1.5779, Y= 0.0032x-1.6161 fotométrica por la linealidad
Datos de Regresión de de la gráfica obtenida
530 a 570 nm. r= 0.989 r= 0.9870
Luz dispersa

%T a 400nm (solución de 5 4
𝑁𝑖𝑆𝑂4 . 6𝐻2𝑂 𝐴𝑙 20%.) No hay luz dispersa presente
en el espectrofotómetro
%T a 450nm 0 0

%T a 500nm 0 0

Ancho de banda
% T a 520 nm 87.0%T 86% T El ancho de banda no
presenta alteraciones
Exactitud fotométrica

1. Método del vidrio

neutro 84% T 86%
%T a 530 nm

2. Método de la solución Existe Exactitud fotométrica

de 𝑵𝒊𝑺𝑶𝟒 . 𝟔𝑯𝟐 𝑶 𝑨𝒍 𝟐𝟎%. En el espectrofotómetro
analizado.
Absorbancia a 400nm 1.50 1.4

Absorbancia a 500nm 0.06 0.05

Intervalo dinámico lineal

de concentración Existe intervalo lineal de
concentración debido a la
Datos de regresión lineal Y= 4.1339x+0.01 Y= 3.1078x+0.0172 linealidad mostrada en la
r=0.999 R=0.990 curva de calibración
Intervalo de obtenida.
concentración 0.0095-0.19M 0.0095-0.19M

Bibliografía:

1. Skoog. Principios de Análisis Instrumental. Ed. Mac Graw Hill. 2002. Pp. 182,201.