Práctica N° 7: Determinación de Lípidos Totales

Objetivo:
a) Familiarizar al alumno con esta técnica y ver su posible adaptación en otro tipo de
muestras biológicas.

Teoría.-
Los lípidos en el torrente sanguíneo pueden encontrarse ya sea libre o ligado a las
proteínas que los transportan. En general se encuentran triacilgliceroles, fosfolípidos,
colesterol y ácidos grasos no esterificados.
El método de la vainillina, se fundamenta en que el suero sanguíneo es calentado con
ácido sulfúrico concentrado y enseguida tratado con reactivo ácido fosfórico - vainillina. En
la reacción sulfo-fosfo-vainillina se produce una coloración rosa que puede ser medida en el
espectrofotómetro a 530 nm. La intensidad de esta coloración es directamente proporcional a
la concentración de lípidos presentes en la muestra, siguiendo la ley de Beer.

Materiales y Reactivos

1. Tubos de prueba 7. Muestra biológica: suero, plasma

2. Pipetas de 0.1, 2.0, 5.0 mL o tejido
3. Ácido sulfúrico concentrado 8. Tubos y pipetas
4. Vainillina Purísima al 0.6% en 9. Espectrofotómetro
solución acuosa 10. Baño de maría a 37°C
5. Solución de vainillina al 10% en 11. Baño de agua hirviente a 100°C
ácido ortofosfórico al 85%
6. Estándar de lípidos 10 g/L

Procedimiento

Reactivos Est 1 Est 2 Est 3 Est 4 Est 5 Muestra

Estándar (µL) 10 15 20 25 30 ---
Muestra (µL) --- --- --- --- --- 20
Ácido sulfúrico (mL) 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00

♦Agitar para homogeneizar. Coloque en baño maría hirviente durante 10 minutos. Enfríe.
♦Luego en tres tubos de prueba colocar las siguientes cantidades de la mezcla anterior.

Reactivos Blanco Est 1 Est 2 Est 3 Est 4 Est 5 Muestra

Ácido Sulfúrico (µL) 100 --- --- --- --- --- ---
Mezcla de estándar (µL) --- 100 100 100 100 100 ---
Mezcla de Muestra (µL) --- --- --- --- --- --- 100
Reactivo Vainillin-fosfórico (mL) 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50 2.50

♦Mezclar y dejar en reposo durante 10 minutos.

♦Leer en espectrofotómetro a 530 nm (500 - 550 nm)
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Cálculos:
Lípidos Totales (g/L) = A m x C st (g/L)
A st
Si la muestra tiene alto contenido de lípidos utilizar 0.05 mL (50 ul) de la muestra.
Valores Normales: Lípidos totales en suero 4 a 8 g/L
Realice los cálculos respectivos para determinar:
Tubo Abs. C (g/L)
1) El factor de calibración:
Blanco
…………………………………………………………............
Est 1 …………………………………………………………............
Est 2 …………………………………………………………............
Est 3 …………………………………………………………............
Est 4 …………………………………………………………............
Est 5 …………………………………………………………............
Muestra …………………………………………………………............
…………………………………………………………............
2) El coeficiente de absorción:
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
3) La concentración de su muestra.
a) Empleando el factor de calibración:
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
b) Empleando el coeficiente de absorción:
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
c) Empleando la fórmula:
…………………………………………………………………………………………….....
…………………………………………………………………………………………….....
d) Hacer un esquema de la clasificación de lípidos y señalar su ubicación en células y
tejidos
…………………………………………………………………………………………...
…………………………………………………………………………………………...

Bibliografía

1. Hiai S., H. Oura y T. Nakajima (1976) Color reaction of some sapogenins and
saponins with vanillin and sulfuric acid. Planta Médica, 29(2): 116-119.

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