Universidad Autónoma de Chiriquí

Facultad de Ciencias Naturales y Exactas

Escuela de Tecnología Médica
Lic. Tecnología Médica

Informe 5 y 6
Microbiología General

Tema: Preparación de Medios de Cultivo y Control de organismos por

agentes físicos y químicos

Estudiante: Miguel A. Moreno Pittí 1-743-1297

Profesora: Tamara Romero Ríos

1º Semestre

2018
 Marco Teórico
Para determinar la clase de germen que en un momento dado afecta el organismo
humano, animal, o una contaminación alimentaria; existen sistemas de aislamiento
utilizando sustancias naturales o artificiales para su nutrición y desarrollo llamado
medios de cultivo. No solo sirven para el diagnóstico de un microorganismo, sino
también en investigación, transporte y conservación de los gérmenes.
Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el
desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de
cultivo puede ser inoculado (es decir, se le añaden organismos) y a continuación
incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. El crecimiento
de los microorganismos es el cultivo. Un cultivo axénico o puro contiene un único
tipo de microorganismos. Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier
microorganismo contaminante.
Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y
presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad.
Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento
necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
Los medios de cultivo contienen como mínimo: carbono, nitrógeno, azufre, fósforo
y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras
sustancias inductoras del crecimiento. También se añaden colorantes que actúan
como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como
inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras.
El Agar es el principal agente solidificante utilizado en medios bacteriológicos. Se
disuelve completamente a 100°C y se solidifica al enfriarse a 40°C.
Existen ciertas sustancias químicas que influyen negativamente sobre las bacterias,
pudiendo ejercer dos tipos de efectos diferentes:
 bacteriostáticos: cuando impiden el crecimiento bacteriano;
 bactericidas: cuando destruyen (matan) las bacterias.
En general, si no sólo nos referimos a las bacterias, sino a cualquier tipo de
microorganismos, hablamos respectivamente de agentes microbiostáticos y
microbicidas. Ahora bien, para una misma sustancia química, la línea de
demarcación entre un efecto microbiostático y otro microbicida depende muchas
veces de la concentración de dicha sustancia y del tiempo durante el que actúa.
¿Cómo podemos saber que un microorganismo está “muerto”? El único criterio
válido es la pérdida irreversible de la capacidad de división celular, es decir, de la
pérdida de viabilidad, y se suele comprobar empleando técnicas con placas de Petri
(es decir, confirmando que no crecen en medios sólidos adecuados).
 Agentes esterilizantes son aquellos que producen la inactivación total de
todas las formas de vida microbiana (o sea, su “muerte” o pérdida irreversible
de su viabilidad).
 Agentes desinfectantes (o germicidas) son agentes (sobre todo químicos)
antimicrobianos capaces de matar los microorganismos patógenos
(infecciosos) de un material. Pueden (y en muchos casos suelen) presentar
efectos tóxicos sobre tejidos vivos, por lo que se suelen emplear sólo sobre
materiales inertes.
 Agentes antisépticos son sustancias químicas antimicrobianas que se
oponen a la sepsis o putrefacción de materiales vivos. Se trata de
desinfectantes con baja actividad tóxica hacia los tejidos vivos donde se
aplican.
 Quimioterápicos son compuestos químicos con actividad microbicida o
microbiostática, con una toxicidad suficientemente baja como para permitir
su administración a un organismo superior, en cuyos fluidos corporales y
tejidos permanece estable un cierto tiempo a concentraciones tales que los
hace eficaces como antimicrobianos dentro del organismo.
Todos los días usamos agentes químicos para controlar el crecimiento
microbiano: detergentes y jabones para el cuerpo y la ropa, cloración de las
aguas potables, antisépticos para la piel y el tratamiento de heridas,
desinfectantes para tratar superficies en la industria y en los laboratorios,
quimioterápicos y antibióticos para tratar enfermedades bacterianas, etc.

Procedimiento
Preparación de medios de Cultivo
1. Leer cuidadosamente las instrucciones de preparación del medio de cultivo.
2. Pesar la cantidad exacta del medio deshidratado o las porciones correctas
de cada uno de los ingredientes.
Cerrar inmediatamente el frasco de medio de cultivo.
3. Disolver la porción pesada de acuerdo con las indicaciones del fabricante.
Si es necesario calentar se debe tener cuidado de no sobrecalentar.
4. Esterilizar a 121ºC a 1 atm.
5. Distribuir el medio de cultivo de acuerdo a las indicaciones señaladas por el
profesor.
6. Identificar el lote de medio de cultivo preparado indicando su nombre,
distribución y fecha de preparación.
 7. Espere enfriar y guardar en refrigeración de 4-8ºC.

Control de microorganismos por agentes físicos y químicos

Efectos Físicos
1. Divida el reverso de un plato con agar nutritivo en cinco partes, con un
marcador.
2. A partir de un cultivo E. Coli en caldo nutritivo, tome una asada y siembre
por estría cerrada una división de la placa de agar nutritivo. Marque el
reverso con una clave.
3. Coloque el tubo en un baño María a 60ºC y caliente. Tome una asada a
intervalos de 10 minutos y siembre cada vez en uno de los sectores de la
placa de agar. El tiempo total de calentamiento será de 40 minutos.
4. Determine el punto térmico mortal en E. Coli.
5. Otro grupo de estudiantes debe trabajar igualmente con una bacteria
esporulada como Bacillus subtilis (cultivo de 72 horas), para determinar el
tiempo térmico mortal.
6. Incube todas las placas sembradas.

Influencia del pH
Prepare dos series de tubos con caldo nutritivo y con diferentes pH (3.0,
5.0, 7.0 y 9.0).
1. Deje un tubo control del caldo normal sin sembrar.
2. Inocule una serie de diferentes pH, con 0.1 ml de Escherichia coli y otra
serie con la levadura. Deje un tubo control sin sembrar.
3. Incube la bacteria a 37ºC y la levadura a 28ºC.
4. Siembre cada uno de ellos en platos respectivamente para corroborar el
crecimiento bacteriano.

Efectos Químicos
I. Actividad bacteriostática o bactericida de algunos compuestos químicos
1. Siembre la superficie de una placa totalmente, por medio de un hisopo
estéril impregnado de una suspensión bacteriana de S. aureus. Haga lo
mismo en otra caja con E. coli. Cuide que no quede un espacio sin sembrar.
2. Distribuya varios círculos de papel impregnados con antisépticos,
limpiadores comerciales y domésticos, colorantes, desinfectantes, jabones,
antibióticos, etc. Aproximadamente cuatro círculos cerca de la orilla de la
 placa y uno en el centro. Deben ser los mismos para las dos baterías. En el
caso de antibióticos, los círculos impregnados se obtienen comercialmente.
3. Incube a 37ºC por 24 horas, mida el radio de inhibición alrededor de cada
círculo de papel para cada compuesto y compare entre las dos bacterias
probadas. Determine si hay diferencias en el efecto de cada compuesto
para las dos bacterias.

II. Efectividad del lavado de manos con detergente

1. Un primer estudiante se vacía unas gotas de suspensión de suelo en la
palma de la mano derecha y hace que se extiendan en toda la superficie de
la palma (1g de tierra fresca obtenida por debajo de la superficie del suelo,
en 9 ml de agua estéril).
2. Un segundo estudiante le saluda de mano al primer estudiante. Un tercer
estudiante le saluda al segundo y un cuarto al tercero (todos la mano
derecha).
3. Con un hisopo estéril humedecido en solución salina fisiológica (s.s.f.)
estéril se frota la mitad de la palma de la mano usada en el saludo y se
descarga el inóculo en la mitad de una placa de agar nutritivo. Se repite la
operación con el segundo estudiante y se siembra en la mitad de otra placa
nueva de agar nutritivo, y así sucesivamente con los otros estudiantes.
4. Todos los estudiantes deberán lavarse la mano inoculada, con detergente y
se enjuaguen con agua estéril. Enseguida se repite el muestreo de la
misma mano con un hisopo estéril (no requiere humedecerse), y se siembra
la mitad de la placa que quedó sin sembrar, sin tocar para nada la parte
previamente sembrada.
5. Incube todas las placas a temperatura ambiente por 48 horas. Compare los
resultados de las siembras de manos sin lavar y manos lavadas y explique.
Note si hubo diferencias en la cantidad de bacterias desarrolladas en cada
caso.
6. Otros estudiantes pueden modificar el experimento, lavando la mano sucia,
con jabón bactericida o jabón antiséptico, u otros desinfectantes.
 Resultados
Preparación de medios de cultivo

Agar Sangre

Agar Müller-Hinton
 Agar xilosa lisina desoxicolato

Efectos físicos sobre los microorganismos

Bacillus

E. Coli

Influencia del Ph
Ph 5

Ph7

Ph9
Ph 3
Agentes Químicos

Bacteria Clorox Mistolin Fabuloso ATB Gel

Antibacterial
Gram Si Si Si No No
Positiva
Gram Si No No Si No
Negativa

Efectividad del lavado de manos con detergente

 Bacilos

Estafilococos

Sucias

hongo

estafilococo

Limpio

Discusión:
1) Preparación de medios de Cultivo
En la preparación de cultivo
  La preparación de cultivos para el estudio de microorganismos tiene
una elaboración muy sencilla siempre y cuando se manejen con el
debido cuidado tanto para lograr la consistencia esperada como para
evitar la contaminación del mismo por agentes externos como es el
hablar sobre el o mantenerlo expuesto al aire mucho tiempo, aunque
lo mismo está sujeto a los disantos tipos de agares o medios a ser
utilizados ya que no en todos se permite el desarrollo de todos los
microorganismos.
 Durante el proceso de elaboración de medios de cultivos se deben
de plantear las distintas necesidades o que microorganismo
deseamos cultivar, ya que para cada uno existe un distinto método y
materiales, además de las maneras de conservación o incubación de
los mismos, por ejemplo, si son termófilas o mesófilas, aerobias o
anaerobias…etc.

2) Control de organismos por agentes físicos y químicos

El pH en un medio afecta directamente a un microrganismo y a enzimas e influye
en la solubilidad de muchas moléculas que de alguna manera indirecta ejercen
alguna influencia sobre el microorganismo. En esta prueba se identifico que los
microorganismos crecieron mas en el pH 7, debido a que es un ph neutro e ideal.
Las bacterias gram positivas o negativas aun cuando poseen ciertas similitudes
para su eliminación con procesos físicos como es el calor, los agentes químicos
actúan de maneras diferentes en cada uno teniendo en común una sustancia de
limpieza muy corriente en todos los hogares como el hipoclorito de sodio (cloro)
destruyen en forma permanente las células de las bacterias, o parte de ellas, de
modo que estas no pueden volver a reproducirse aun después de que se ha
eliminado el bactericida. Esta sustancia actúa oxidando las enzimas y otros
materiales del citoplasma de las células.
Luego de lavarse las manos se observaron aun bacterias esto se debe a que solo
el agua y el jabón corriente no es eficaz a la hora de eliminar la cantidad de
microorganismos presentes en el suelo.

Conclusiones:
 Hay que ser minuciosos en la composición de los caldos nutritivos porque el
incorrecto uso de ellos puede llevar al fracaso de nuestra experiencia de
manipular microorganismos. Hemos aprendido a reconocer un caldo a
 diferencia de un agar. El caldo es para muestras liquidas y el agar para
muestras sólidas. Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales
en el laboratorio de microbiología pues sirven para identificar las bacterias
causantes de las enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que son
sensibles esas bacterias. La mayoría de las bacterias se desarrolla en un
medio de cultivo básico que contiene agua extracto de carne y pepsina. Un
método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio
líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Hemos aprendido a
reconocer y clasificar medios de cultivo por su origen animal, vegetal y
mineral.
 Debido a su pequeño tamaño y a su estilo de vida individual, las células
procarióticas sufren los cambios ambientales de un modo mucho más directo
e inmediato que las células de los organismos pluricelulares. Esto se
aprovecha a la hora de su eliminación por medio de agentes físicos.
 Las sustancias quimicas también pueden ser utlizadas para el control de los
microorganismos ya sea por medio de sustancias que iniben su crecimiento
y reproducción por ende como el agua oxigenada, así como métodos para la
destrucción de las mismas como en el caso del clorox.
 Manejar las técnicas de control es necesario para evitar riesgos de infección
y tener un control a la hora del estudio de microorganismos

Cuestionario
Defina: esterilización, desinfección, antiséptico, bacteriostático, bactericida,
higienizante, terapéutico.
Esterilización: Proceso mediante el cual son destruidas o eliminadas todas las
formas de vida microscópicas de un objeto o hábitat.
Desinfección: Se define como la destrucción, inhibición o eliminación de
microorganismos de objetos inanimados que pueden causar enfermedad, esto se
lleva a cabo principalmente con agentes químicos llamados desinfectantes
(esterilizan).
Antiséptico: Se define como el control de microorganismos en tejidos vivos con
agentes químicos para prevenir una infección o sepsis, esto se lleva a cabo con
los antisépticos que son agentes químicos que destruyen o inhiben el crecimiento
de agentes patógenos.
Bacteriostático: Agente que inhibe el desarrollo de las bacterias y se basa en los
mecanismos de defensa del huésped para la erradicación final de la infección.
Bactericida: Agente que actúa destruyendo las bacterias.
Higienizante: Sustancia que destruye gérmenes; sustancia que evita la
diseminación de gérmenes; que sirve para la desinfección.
Terapéutico: Vinculado a la rama de la medicina que se encarga de la difusión de
las pautas y del suministro de remedios para tratar problemas de salud.
Bibliografía
http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm
http://www.ecologia.unam.mx/laboratorios/evolucionmolecular/images/file/ClasePr
ocariontes/Alejandra/Pr%C3%A1ctica%204%20%20Medios%20de%20cultivo.pdf
Murray, P.; Rosenthal, K.; Kobayashi, G. y M. Pfaller. 2002. Microbiología Médica.
4ta. Edición. Editorial Elsevier Science. Barcelona – España.
Vignoli, Rafael; Esterilización y desinfección, 2009. Disponible en:
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%2027.pdf