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Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría

Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-01 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 16 ENERO

Código: CAL-01 Nivel de Revisión: 03 Fecha: 16 ENERO de 2012 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 1 de 5

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de identificación de los Procesos necesarios para el sistema de gestión de la calidad

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Guillermo Escamilla Guerrero

M. Leticia Medina Macias

Dinora V. Aguilar Escobar

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Firma:

Firma:

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Fecha:

Fecha:

16 enero 2012

16 enero 2012

16 enero 2012

CAL-02-B

Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría

Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 Página 1 de 32

de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 Página 1 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

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Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 2 de 32

26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 2 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

CAMBIO

REVISIÓN

FECHA

Ninguno

0

26/08/03

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 3 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

DESCRIPCION DEL PROCESO

Una vez que al donador se le toma la muestra (Ver procedimiento CAL-43) se procede a caracterizarlo inmunohematológicamente abarcando los siguientes estudios:

1. Grupo sanguíneo (Sistema ABO)

2. Subgrupo sanguíneo (Sistema A)

3. Grupo sanguíneo (Sistema Rho)

4. Determinación del Du

5. Fenotipo Rho (EeCc)

6. Rastreo de Anticuerpos irregulares fuera de Sistema ABO (semipanel o panel completo)

7. Hemolisinas

8. Chequeo de grupo sanguíneo (Sistema ABO & Rho)

Los métodos para realizar estos ensayos (a excepción de las Hemolisinas)

son:

Método semiautomático

Tubode las Hemolisinas) son:  Método semiautomático Gel  Método automático Gel Las pruebas de

Gelde las Hemolisinas) son:  Método semiautomático Tubo  Método automático Gel Las pruebas de aglutinación

Método automático

GelMétodo semiautomático Tubo Gel  Método automático Las pruebas de aglutinación establecen:  HEMOLISIS:

Las pruebas de aglutinación establecen:

HEMOLISIS: Indica una reacción positiva para la unión Antígeno anticuerpo.

AGLUTINACION: la presencia del par Antígeno y/o Anticuerpo complementarios relevante.

NO AGLUTINACIÓN la ausencia de cualquiera de ellos.

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 4 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

INTERPRETACION Y PONDERACIÓN DE LAS AGLUTINACIONES

DESCRIPCION

GRADO

PONDERACION

Hemolísis total

Ht

 

Botón completo, sobrenadante claro

4+

12

Botón grande con algunos agregados, fondo claro

3+

10

Botón fragmentado en varios grumos grandes, fondo

2+

8

turbio

Botón fragmentados en numerosos grumos regulares,

1+

5

fondo turbio

Botón fragmentado múltiples grumos pequeños, fondo

+/-

1

muy turbio

Aglutinación no visible

negativo

0

1.- DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

La prueba consiste de dos etapas:

Prueba directa o celular: eritrocitos estudiados desafiados contra antisueros comerciales de especificidad conocida

Prueba inversa o sérica: suero estudiado desafiado contra eritrocitos de fenotipo conocidos

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Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 5 de 32

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerposde Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página

PRUEBA DIRECTA

en tubo

Se realiza la centrifugación del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete

eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separación del concentrado eritrocitario y el plasma, este último se

transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador).

eritrocitario y el plasma, este último se transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y #
a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador). Se identifica otro tubo y se
Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador
Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador

Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml aproximadamente de

solución que contiene solución salina y solución de pHix + dos gotas de concentrado eritrocitario

solución que contiene solución salina y solución de pHix + dos gotas de concentrado eritrocitario del donador

(concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%)

(concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%)
de pHix + dos gotas de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre el
de pHix + dos gotas de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre el
(concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%) Se realiza la prueba directa y la prueba inversa

Se realiza la prueba directa y la prueba inversa

 
Se realiza la prueba directa y la prueba inversa  
Se realiza la prueba directa y la prueba inversa   Para la prueba directa se requiere

Para la prueba directa se requiere lo siguiente:

Para la prueba directa se requiere lo siguiente:  
 
y la prueba inversa   Para la prueba directa se requiere lo siguiente:   Se identifican

Se identifican 4 tubos

 
Se identifican 4 tubos  
lo siguiente:   Se identifican 4 tubos   TUBO 2 Agregar una gota de reactivo Anti-B
TUBO 2 Agregar una gota de reactivo Anti-B (suero de color amarillo)
TUBO 2
Agregar una gota de
reactivo Anti-B
(suero de color
amarillo)
TUBO 3 Agregar una gota de reactivo Anti-AB (suero incoloro)
TUBO 3
Agregar una gota de
reactivo Anti-AB
(suero incoloro)
TUBO T Agregar 2 gotas del plasma o suero del donador
TUBO T
Agregar 2 gotas del
plasma o suero del
donador
TUBO 1 Agregar una gota de reactivo Anti-A (suero de color azul)
TUBO 1
Agregar una gota
de reactivo Anti-A
(suero de color
azul)
Agregar una gota de reactivo Anti-A (suero de color azul) Adicionar una gota de la suspensión

Adicionar una gota de la suspensión de eritrocitos del donador

Adicionar una gota de la suspensión de eritrocitos del donador
Adicionar una gota de la suspensión de eritrocitos del donador
Adicionar una gota de la suspensión de eritrocitos del donador
una gota de la suspensión de eritrocitos del donador Se introducen en la centrifuga durante 30

Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga a 3500RPM

Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga a
Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga a
Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga a
Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga a
Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga a
Las rpm estan establecidas en la centriifuga a 3500RPM Se realiza un ligera agitación para resuspender

Se realiza un ligera agitación para resuspender los eritrocitos y se hace la lectura macroscópica para observar si existe o no

aglutinación

agitación para resuspender los eritrocitos y se hace la lectura macroscópica para observar si existe o
lectura macroscópica para observar si existe o no aglutinación Registrar resultados en el formato F-A-14-26 CAL-02-B

Registrar resultados en el formato F-A-14-26

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 6 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

PRUEBA INVERSA en tubo Marcar 4 tubos con las letras A1, A2, B y O
PRUEBA INVERSA
en tubo
Marcar 4 tubos con las letras A1, A2, B y O
Células de fenotipo conocido preparadas a una concentración del 2-5%
TUBO A1
TUBO A2
TUBO B
TUBO O
Agregar una gota de
Agregar una gota de
Agregar una gota de
Agregar una gota de
celulas A1+ 2gotas del
celulas A2 + 2gotas del
celulas B + 2gotas del
celulas O + 2gotas del
plasma del donador
plasma del donador
plasma del donador
plasma del donador
Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga.
Se realiza un ligera agitación para desprender el botón de celulas
Se realiza la lectura macroscópica para aglutinación
Registrar resultados en el formato F-A-14-26

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 7 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

Formato F-A-14-26 que es llenado por el personal de área de donadores:

de Grupos sanguíneos y Anticuerpos Formato F-A-14-26 que es llenado por el personal de área de

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Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 8 de 32

26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 8 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

Tabla 1 Prueba Directa

GRUPO SANGUINEO

ANTIGENOS PRESENTES EN LOS ERITROCITOS

ANTICUERPOS PRESENTES EN SUERO O PLASMA

 

A

 

A

Anti - B

 
 

B

 

B

Anti - A

 
 

AB

 

A y B

 

-

- -

- -

 

O

 

ni A ni B

 

Anti A

&

Anti -

B

 

INTERPRETACION

 
   

Prueba DIRECTA

   

Prueba INVERSA

 

GRUPO

 

Tubo con Antisuero

   

Tubo con céluas:

 

Anti-A

Anti-B

Anti-AB

Testigo

A1

A2

 

B

O

A

POST

NEGT

POST

NEGT

NEGT

NEGAT

 

POST

NEGAT

B

NEGT

POST

POST

NEGT

POST

POST

 

NEGT

NEGT

AB

POST

POST

POST

NEGT

NEGT

NEGT

 

NEGT

NEGT

O

NEGT

NEGT

NEGT

NEGT

POST

POST

 

POST

NEGT

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 9 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

De forma Manual:

GRUPO SANGUIENO SABO EN GEL

Se realiza la centrifugación del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separación del concentrado eritrocitario y el plasma, este último se transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador). Y se puede introducir al equipo WADiana o realizarlo de forma manual.

Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 1.0 ml de solución de DianaSol 1

con 25

l de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%)

de DianaSol 1 con 25 l de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre
(concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%) Se realiza la prueba directa y la prueba inversa

Se realiza la prueba directa y la prueba inversa

el 2-3%) Se realiza la prueba directa y la prueba inversa Empleo de tira del DianaGel

Empleo de tira del DianaGel Donors/Donantes

ver imagen

INVERSA MICROTUBOS DIRECTA 7 y 8 MICROTUBOS colocar 50 l de eritrocitos 1, 2, 3,
INVERSA
MICROTUBOS
DIRECTA
7 y 8
MICROTUBOS
colocar 50
l de eritrocitos
1, 2, 3, 4, 5, y 6
reactivos (Serigrup Diana A1 y B)
colocar 25
l de solución de
con 50
l del suero o plasma del
eritrocitos del donante
donador

Centrifugar en DianaFuge

(ver imagen)

Centrifugar en DianaFuge (ver imagen)
del donante donador Centrifugar en DianaFuge (ver imagen) Leer La lectura puede ser visual o en

Leer

La lectura puede ser visual o en el DianaScanner (equipo WADiana)

(ver imagen)

Leer La lectura puede ser visual o en el DianaScanner (equipo WADiana) (ver imagen)
visual o en el DianaScanner (equipo WADiana) (ver imagen) Interpretación (Acorde a la imagen presentada) Registrar

Interpretación

(Acorde a la imagen presentada)

Interpretación (Acorde a la imagen presentada)
imagen) Interpretación (Acorde a la imagen presentada) Registrar resultados en el formato F-A-14-26 o mandar

Registrar resultados en el formato F-A-14-26

o mandar impresión

CAL-02-B

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 10 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

A1 B # donador: Fecha: Iniciales y clave de quien realizó:
A1
B
# donador:
Fecha:
Iniciales y clave de quien realizó:

CAL-02-B

S.ABO S.Rho
S.ABO
S.Rho
AT INVERSA
AT
INVERSA

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Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 11 de 32

26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 11 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

2. SUBGRUPOS SANGUINEOS (SISTEMA ABO)

Para realizar la prueba de Lectina A1 y H se requiere lo siguiente: Marcar 1
Para realizar la prueba de Lectina A1 y H se requiere lo siguiente:
Marcar 1 tubo con la letra A1 (Anti-A1) y otro con la letra H (Anti- H)
TUBO A1
TUBO H
Agregar 1 gota del reactivo Anti-A1 Lectina
Agregar 1 gota del reactivo Anti-H
Agregar una gota de la suspensión de eritrocitos del donador
Se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga.
Se realiza la lectura macroscópica para aglutinación y se interpretan los resultados
Registrar resultados en el formato F-A-14-26

abla # 2 Subgrupo SABO

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

3.- DETERMINACION DEL FACTOR Rh

GRUPO SANGUIENO Rho

en tubo

Se realiza la centrifugación del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del
Se realiza la centrifugación del tubo de muestra (etiquetado con el nombre y # del donador) para separar el Paquete
eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separación del concentrado eritrocitario y el plasma, este último se
transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador).
Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 2.5 a 3.0 ml de solución salina con
amortiguador de Phix con dos gotas de concentrado eritrocitario del donador
(concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-5%)
Marcar un tubo con la letra Rh (anti D) y otro con la letra C (control)
TUBO D
TUBO C
agregar una gota del
Agregar una gota del reactivo
antisuero comercial
Control Rh ó
Anti - D
ALB 22%
Agregar una gota de suspensión al 2-5% de eritrocitos del donador
Centrifugar 45 segundos/3500RPM
Leer resuspendiendo con movimiento suave el botón. Interpretación acorde a la aglutinación presente
NO AGLUTINACION
AGLUTINACION
Rh neg (D-)
Rh post (D+)
Registrar resultados en el formato F-A-14-26

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Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 13 de 32

26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 13 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

4. Determinación del Du

SI la prueba Anti-D es NEGATIVA

SI la prueba Anti-D es NEGATIVA

SI la prueba Anti-D es NEGATIVA
SI la prueba Anti-D es NEGATIVA
SI la prueba Anti-D es NEGATIVA
SI la prueba Anti-D es NEGATIVA
4. Determinación del Du SI la prueba Anti-D es NEGATIVA Los tubos marcados con D y

Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos a 37 C

Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos
Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos
Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos
Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos
Los tubos marcados con D y C (provenientes de la Prueba RH) se incuban 15-30 minutos
Centrifugar e Interpretar Positiva Negativa Se lavan las celulas 3 veces con salina fisiologica. Se
Centrifugar e Interpretar
Positiva
Negativa
Se lavan las celulas 3 veces con salina fisiologica.
Se decanta la salina por completo en la última lavada
El resultado se considera Rh+ ( D+) Agregar una gota de suero de Coombs poliespecífico
El resultado
se considera
Rh+ ( D+)
Agregar una gota de suero de Coombs poliespecífico (anti IgG-C3d)
El resultado
Centrifugar e interpretar
se considera
Rh- y Du+
( para fines de
Positiva
transfusión se
considera :
donadores Rh+
Negativa
receptores Rh-
Rh - (D-)
Registrar resultados en el formato F-A-14-26

La determinación del grupo ABO en la tarjeta de Gel conlleva la determinación del anti D y el DuRh- Rh - (D-) Registrar resultados en el formato F-A-14-26 Los resultados de Rh negativo en

Los resultados de Rh negativo en gel se confirman con el Anti D Totem (anticuerpo policlonal dirigido contra las 6 fracciones del Antígeno D: I – VI) VI)

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 14 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

5. FENOTIPO Rho (EeCc) :

Marcar la tarjeta con el número del donador que le corresponde

Marcar la tarjeta con el número del donador que le corresponde
la tarjeta con el número del donador que le corresponde Hacer un suspensión de los eritrocitos

Hacer un suspensión de los eritrocitos 2-3% (1ml de Diana-1 + 25

l de muestra)

Hacer un suspensión de los eritrocitos 2-3% (1ml de Diana-1 + 25 l de muestra)
de los eritrocitos 2-3% (1ml de Diana-1 + 25 l de muestra) Añadir 25 microlitros de

Añadir 25 microlitros de la suspensión de eritrocitos 2-3% en los microtubos que indican C, c, E, e

(Ver imagen)

Añadir 25 microlitros de la suspensión de eritrocitos 2-3% en los microtubos que indican C, c,
2-3% en los microtubos que indican C, c, E, e (Ver imagen) Centrifugar en DianaFuge y

Centrifugar en DianaFuge y leer manual (Tabla 3A, 3B, 3C)

Centrifugar en DianaFuge y leer manual (Tabla 3A, 3B, 3C)
Centrifugar en DianaFuge y leer manual (Tabla 3A, 3B, 3C) Registrar los resultados en el formato

Registrar los resultados en el formato F-A-14-23

Interpretación de fenotipo Rh

Registro del donador Fecha: Registro del donador Fecha: Iniciales y clave de quien realizó Iniciales
Registro del donador
Fecha:
Registro del donador
Fecha:
Iniciales y clave de quien
realizó
Iniciales y clave de quien
realizó

CAL-02-B

Fecha: Iniciales y clave de quien realizó Iniciales y clave de quien realizó CAL-02-B Fenotipo: CcE

Fenotipo: CcE

Fenotipo: CEe

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 15 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

FORMATO F- A 14 23

de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos FORMATO F- A – 14

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 16 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

Tabla 3B

Fenotipo Rh

 

REACCION SEROLOGICA ANTI

   

FENOTIPOS

GENOTIPO

D

C

 

c E

e

WIENER

FISHER

DCe/dce

+

+

 

+ -

+

 

R1r

DCcee

DCe/DCe

+

+

 

- -

+

R1R1

DCCee

DcE/dce

+

-

 

+ +

+

 

R2r

DccEe

DcE/DcE

+

-

 

+ +

-

R2R2

DccEE

DCe/DcE

+

+

 

+ +

+

R1R2

DCcEe

dce/dce

-

-

 

+ -

+

 

rr

ddccee

Dce/dce

+

-

 

+ -

+

 

R0r

Dccee

dCe/dce

-

+

 

+ -

+

 

r'r

ddccee

dCe/dCe

-

+

 

- -

+

 

r'r'

ddccee

dcE/dce

-

-

 

+ +

+

 

r" r

ddccee

dce/dcE

-

-

 

+ +

-

r" r "

ddccEE

dCe/dcE

-

++

 

+ +

+

 

r' r"

ddCcEe

DCe/DCE

+

+

 

- +

+

R1RZ

DCCEe

DcE/DCE

+

+

 

+ +

-

R2RZ

DCcEE

DCE/DCE

+

+

 

- +

-

RZRZ

DCCEE

dCE/dCe

-

+

 

- +

+

r

y y'

ddCCEe

dCE/dcE

-

+

 

+ +

-

r

y r"

ddCcEE

dCE/dCE

-

+

 

- +

-

r y r y

ddCCEE

CAL-02-B

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 17 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

Tabla 3C

Fenotipo Rh

ANTI-

   

FENOTIPO

GENOTIPO PROBABLE

C E

D c

 

e

WIENER

FISHER- RACE

WIENER

FISHER- RACE

+ -

+ +

 

+

Rh1rh

DCe

R1r

DC/dce

+ -

+ -

 

+

Rh1Rh1

DCe

R1R1

DC/dce

- -

- +

 

+

rhrh

ce

rr

Dce/dce

+ +

+ +

 

+

Rh1Rh2

DCcEe

R1R2

DC/DcE

+ +

- +

 

+

Rh2rh

DcEe

R2r

DcE/dce

+ +

- +

 

-

Rh2Rh2

DcE

R2R2

Dce/DcE

+ +

- -

 

+

Rh rh

Dce

Ror

Dce/dce

+ -

- +

 

+

rh´rh

Cce

r´r

dC/dce

- +

- +

 

+

rh´rh

cEe

r"r

dce/dce

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Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría

Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 18 de 32

26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 18 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

6.- DETERMINACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES FUERA DEL SISTEMA ABO (SEMIPANEL O PANEL COMPLETO)

A todas las mujeres, personas politransfundidas y personas Rh negativos se les realiza la siguiente prueba:

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Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 19 de 32

26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 19 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES FUERA DE SISTEMA ABO, EMPLEANDO PANEL TRIO

Se marcan los tubos con # del 1 al 3 con su respectivo duplicado y un tubo más con una T (testigo) y con su duplicado

Se marcan los tubos con # del 1 al 3 con su respectivo duplicado y un
y un tubo más con una T (testigo) y con su duplicado En cada tubo se

En cada tubo se coloca:

En cada tubo se coloca:
una T (testigo) y con su duplicado En cada tubo se coloca: TUBO 2 1 gota
una T (testigo) y con su duplicado En cada tubo se coloca: TUBO 2 1 gota
una T (testigo) y con su duplicado En cada tubo se coloca: TUBO 2 1 gota
una T (testigo) y con su duplicado En cada tubo se coloca: TUBO 2 1 gota
una T (testigo) y con su duplicado En cada tubo se coloca: TUBO 2 1 gota

TUBO 2

1 gota de Gamma Trio #2 + 2

gota de suero del donador

TUBO 2’

1 gota de Gamma Trio #2 + 2

gota de suero del donador

TUBO 3

1 gota de Gamma Trio #3 + 2

gota de suero del donador

TUBO 3’

1 gota de Gamma Trio #3 + 2

gota de suero del donador

1 gota de Gamma Trio #3 + 2 gota de suero del donador TUBO 1 1

TUBO 1

1 gota de Gamma Trio #1 + 2

gotas de suero del donador

TUBO 1’

1 gota de Gamma Trio #1 + 2

gotas de suero del donador

TUBO T

1 gota De suspensión de

eritrocitos del donador + 2

gota de suero del donador

TUBO T’

1 gota De suspensión de

eritrocitos del donador + 2

gota de suero del donador

de eritrocitos del donador + 2 gota de suero del donador Se realiza una ligera agitación

Se realiza una ligera agitación a cada uno de los tubos y se introducen en la centrifuga durante 30 segundos.

Las rpm estan establecidas en la centriifuga.

cada uno de los tubos y se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm
30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Se realiza la lectura macroscópica en salina

Se realiza la lectura macroscópica en salina rapida y reportar si existe aglutinación (Ver tabla 3A)

rapida y reportar si existe aglutinación (Ver tabla 3A) Registrar resultados en el formato F-A-14-23 Los

Registrar resultados en el formato F-A-14-23

Registrar resultados en el formato F-A-14-23
Registrar resultados en el formato F-A-14-23
Registrar resultados en el formato F-A-14-23
Registrar resultados en el formato F-A-14-23
Registrar resultados en el formato F-A-14-23
(Ver tabla 3A) Registrar resultados en el formato F-A-14-23 Los tubos # 1’, 2’, 3’ y
(Ver tabla 3A) Registrar resultados en el formato F-A-14-23 Los tubos # 1’, 2’, 3’ y
(Ver tabla 3A) Registrar resultados en el formato F-A-14-23 Los tubos # 1’, 2’, 3’ y
(Ver tabla 3A) Registrar resultados en el formato F-A-14-23 Los tubos # 1’, 2’, 3’ y
Los tubos # 1’, 2’, 3’ y T” se incuban a 37 C durante 30-60
Los tubos # 1’, 2’, 3’ y T” se incuban a 37 C durante
30-60 minutos
Los tubos #1, 2, 3 y T se incuban 22 C durante 60 minutos
Centrifugar 30 seg. Antes de realizar la lectura macroscópica
Se realiza la lectura macroscópica en frio para observar
para observar aglutinación
aglutinación (Ver tabla 4) y se desechan las muestras
NEGATIVO
Registrar
Registrar resultados como Salina a 37 C
resultados como
en el formato F-A-14-23
Salina a 22 C
en el formato
F-A-14-23
Se lava con solución salina con pHix y se centrifuga durante
1minuto se realiza este procedimiento 3 veces (al decantar
tener cuidado con el botón) en el último lavado decantar la
salina por completo
POSITIVO
Agregar 1 gota de Anti-IgG-C3d
Se realiza el panel
completo con las
Mezcle ligeramente, centrifuge y leer
diluciones de los
eritrocitos del IMSS
Ademas de
del Banco Central
de Sangre del
POSITIVO
Centro Medico
Registar
Nacional Siglo XXI
resultados como
Salina Coombs y/
o CAGH en el
NEGATIVO
formato
F-A-14-23
Se realiza la Prueba confirmatoria o CAGH (adición de células
sensibilizadas con anti D)

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Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 20 de 32

26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 20 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

Y la siguiente reacción en tarjeta:

Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente:

Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente:
Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente:
Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente:
Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente:
Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente:
en tarjeta en técnica liss-gel se requiere lo siguiente: Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del #

Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 3 y un T( testigo) Las células se preparan empleando 10

l de eritrocitos con 1

ml de solución Diana 2

ml de solución Diana 2
MICROTUBO 1 Anadir 50 l de Gamma Trio 1
MICROTUBO 1
Anadir 50
l de
Gamma Trio 1
solución Diana 2 MICROTUBO 1 Anadir 50 l de Gamma Trio 1 MICROTUBO 2 Anadir 50
MICROTUBO 2 Anadir 50 l de Gamma Trio 2
MICROTUBO 2
Anadir 50
l de
Gamma Trio 2
MICROTUBO 3 Anadir 50 l de Gamma Trio 3
MICROTUBO 3
Anadir 50
l de
Gamma Trio 3
MICROTUBO T Anadir 50 l de eritrocitos del donador
MICROTUBO T
Anadir 50
l de
eritrocitos del donador
Trio 3 MICROTUBO T Anadir 50 l de eritrocitos del donador MICROTUBO 1, 2, 3 y
Trio 3 MICROTUBO T Anadir 50 l de eritrocitos del donador MICROTUBO 1, 2, 3 y

MICROTUBO 1, 2, 3 y T

Anadir 25

l de plasma del donador

MICROTUBO 1, 2, 3 y T Anadir 25 l de plasma del donador Incubar en Diana

Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C

Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C
del donador Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C Centrifugar en Diana fuge y

Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4)

Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4)
15min a 37 C Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4) Registrar resultados en el

Registrar resultados en el formato F-A-14-23

Si es positivo se debe realizar el panel completo (10 -11 células del panel siglo XXI o comercial)

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerposde Pediatría Código: CAL-25 Nivel de Revisión: 0 Fecha: 26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página

Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta con técnica LISS-gel se requiere lo siguiente: Marcar
Para el rastreo de Anticuerpos en tarjeta con técnica LISS-gel se requiere lo siguiente:
Marcar la tarjeta DianaGel Coombs del # 1 al 10 u 11 y un T( autotestigo)
10
l EN CADA UNO DE LOS MICROTUBOS DE CADA UNA DE LAS CELULAS Y DEL TESTIGO
Realizar una suspensión con 10
l de eritrocitos con 1 ml de DIANA 2 y adicionar a todos los microtubos 50microlitros
CEL
CEL
CEL 1
CEL 2
CEL 3
CEL 4
CEL 5
CEL 6
CEL 7
CEL 8
CEL 9
AT
10
11
MICROTUBO 1 al AutoTestigo
Anadir 25
l de suero del donador
Incubar en Diana incubador durante 15min a 37 C
Centrifugar en Diana fuge y leer (Tabla 4)
Registrar resultados en el formato F-A-14-23
La interpretación se realiza contra la CARTA PANEL

Tabla 4 Detección de Anticuerpos con reactivo Gamma TRIO 1, 2 y 3

Escanear imagen de carta panel del:

CARTA PANEL DEL TRIO

CARTA PANEL DE SIGLO XXI

CARTA PANEL DE PANEL DIANA

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 22 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

7. HEMOLISINAS A las personas con grupo O se les realiza la siguiente prueba:

Para realizar la prueba de Hemolisinas se requieren los tubos con células A1, A2, B y O de la prueba inversa y de el tubo

AutoTestigo de la prueba directa

se requieren los tubos con células A1, A2, B y O de la prueba inversa y
inversa y de el tubo AutoTestigo de la prueba directa Todos los tubos se incuban a

Todos los tubos se incuban a 37 C/1hora y se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan establecidas

en la centriifuga.

incuban a 37 C/1hora y se introducen en la centrifuga durante 30 segundos. Las rpm estan
30 segundos. Las rpm estan establecidas en la centriifuga. Se realiza la lectura macroscópica para observar

Se realiza la lectura macroscópica para observar si existe o no hemolisis

Se realiza la lectura macroscópica para observar si existe o no hemolisis
Se realiza la lectura macroscópica para observar si existe o no hemolisis
Se realiza la lectura macroscópica para observar si existe o no hemolisis
Se realiza la lectura macroscópica para observar si existe o no hemolisis
Se realiza la lectura macroscópica para observar si existe o no hemolisis
lectura macroscópica para observar si existe o no hemolisis La Prueba es negativa cuando el líquido

La Prueba es negativa cuando el líquido sobrenadante es de color claro y positiva cuando es de color rojizo

Registrar resultados en el formato F-A-14-23

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 23 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

8.- Chequeo de Grupo sanguíneo (Sistema ABO & Rho)

CONFIRMACION DEL GRUPO

SANGUIENO SABO EN GEL

Se realiza la centrifugación del tubo PILOTO que se toma directamente de la bolsa de concentrado eritrocitario (etiquetado

con el nombre y # del donador) para separar el Paquete eritrocitario y el plasma o suero. Una vez que se tiene la separación

del concentrado eritrocitario y el plasma, este último se transfiere a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador).

a un tubo previamente etiquetado (nombre y # del donador). Se identifica otro tubo y se

Se identifica otro tubo y se prepara en él la suspensión de eritrocitos del donador tomando 1.0 ml de solución de DianaSol 1

con 25

l de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%)

de DianaSol 1 con 25 l de concentrado eritrocitario del donador (concentración de eritrocitos aproximada: entre
(concentración de eritrocitos aproximada: entre el 2-3%) Se realiza una prueba directa Empleo de tira del

Se realiza una prueba directa

Se realiza una prueba directa
Se realiza una prueba directa
Se realiza una prueba directa
aproximada: entre el 2-3%) Se realiza una prueba directa Empleo de tira del DianaGel Confirm (ver

Empleo de tira del DianaGel Confirm

(ver imagen)

Empleo de tira del DianaGel Confirm (ver imagen)
directa Empleo de tira del DianaGel Confirm (ver imagen) MICROTUBOS con 50 Ctrl colocar 50 l
directa Empleo de tira del DianaGel Confirm (ver imagen) MICROTUBOS con 50 Ctrl colocar 50 l
directa Empleo de tira del DianaGel Confirm (ver imagen) MICROTUBOS con 50 Ctrl colocar 50 l

MICROTUBOS

con 50

Ctrl

colocar 50

l

l del suero o plasma del

donador

MICROTUBOS con 50 Ctrl colocar 50 l l del suero o plasma del donador

DIRECTA

MICROTUBTOS

A, B, D, Ctrl

colocar 25

l de solución de

DIRECTA MICROTUBTOS A, B, D, Ctrl colocar 25 l de solución de eritrocitos del donante

eritrocitos del donante

colocar 25 l de solución de eritrocitos del donante Centrifugar en DianaFuge (ver imagen) Leer La
colocar 25 l de solución de eritrocitos del donante Centrifugar en DianaFuge (ver imagen) Leer La

Centrifugar en DianaFuge

(ver imagen)

Centrifugar en DianaFuge (ver imagen)
del donante Centrifugar en DianaFuge (ver imagen) Leer La lectura puede ser visual (ver imagen)

Leer

La lectura puede ser visual

(ver imagen)

Leer La lectura puede ser visual (ver imagen)
imagen) Leer La lectura puede ser visual (ver imagen) Interpretación (Acorde a la imagen presentada) Registrar

Interpretación

(Acorde a la imagen presentada)

Interpretación (Acorde a la imagen presentada)
imagen) Interpretación (Acorde a la imagen presentada) Registrar resultados en la libreta de RECHEQUEO DE GRUPOS

Registrar resultados en la libreta de RECHEQUEO DE GRUPOS CAL-25-A

y pegar la impresión

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 24 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

Registro del donador Fecha: Registro del donador Fecha: Iniciales y clave de quien realizó Iniciales
Registro del donador
Fecha:
Registro del donador
Fecha:
Iniciales y clave de quien
realizó
Iniciales y clave de quien
realizó

Libreta RECHEQUEO DE GRUPOS CAL-25-A

 

FECHA DE

   

GRUPO

     

# REGISTRO

REALIZACION

 

IMAGEN

DETECTADO

GPO REPORTADO

DISCREPANCIAS

REPORTA

   

A

B

D

Ctrl

       

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 25 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

El formato F-A-14-26 se muestra a continuación:

PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos El formato F-A-14-26 se muestra a continuación: CAL-02-B

CAL-02-B

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 26 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

El formato F-A-14-26 se llena de la siguiente manera:

Anti-A:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

Anti-B:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

Anti-AB:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

Auto (Testigo):

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

GR A1:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

GR A2:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

GR B:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

GR O:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

Lec. A1:

Esta prueba se realiza solo en personas de grupo sanguíneo A. Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

Ant. H:

Esta prueba se realiza solo en personas de grupo sanguíneo A. Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

Rh Anti-D:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A).

CAL-02-B

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 27 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

T Auto:

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A)

Resultados

Grupo:

Escribir la letra del grupo donador.

El formato F-A-14-23 muestra a continuación:

Resultados Grupo: Escribir la letra del grupo donador. El formato F-A-14-23 muestra a continuación: CAL-02-B

CAL-02-B

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 28 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

El formato F-A-14-23 se llena de la siguiente manera:

Fecha:

Día, mes y año en que se esta realizando el análisis de la muestra.

Registro:

Se escribe el análisis que se esta realizando en este caso es Anticuerpos irregulares.

# del donador:

# que le corresponde al donador según la bitácora de ingresos y egresos.

22

C:

Temperatura a la que se realizo la prueba.

37

C:

Temperatura a la que se realizo la prueba.

1:

# de microtubo que se esta analizando.

.

Se anota + si es positivo o si es negativo y

2:

el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A)

.

# de microtubo que se esta analizando. Se anota + si es positivo o si es negativo y

.

el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A)

3:

# de microtubo que se esta analizando.

.

Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A)

T:

Testigo de la prueba. Se anota + si es positivo o si es negativo y el número que le corresponde del 1 al 4 (Según lo indique la tabla 3A)

Conclusiones:

CAL-02-B

Escribir

las

observaciones

resultados obtenidos.

de

los

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26 de Agosto 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 29 de 32 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Grupos sanguíneos y Anticuerpos

Soluciones requeridas

La solución salina y pHix se compone de 1lt de solución salina isotónica y 10 ml de la solución pHix.

La suspensión de eritrocitos se prepara con 2.5 3.0 ml aproximadamente de solución salina isotónica y pHix más 2 gotas de eritrocitos del donador.

La solución Diana-1 es una solución salina para suspensiones de hematíes para técnicas en gel, se utiliza para la determinación de grupos sanguíneos, pruebas cruzadas y autocontrol , se debe conservar a 18-25 C.

La solución Diana-2 Es una solución de baja fuerza iónica para suspensión de hematíes que facilita la unión de anticuerpo a los hematíes por reducirse la densidad de la nube de cationes alrededor de los mismos, favoreciendo la sensibilización , se conserva a 2-8 C.

REGISTROS

El Formato F-A-14-26 se debe almacenar 1año.

El Formato F-A-14-23 se debe almacenar 1año.

LISTA DE DISTRIBUCION

Laboratorista:

Suplente:

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 30 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

Elaborado por:

Revisado por:

Aprobado por:

Nombre:

Nombre:

Nombre:

Firma:

Firma:

Firma:

Fecha:

Fecha:

Fecha:

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 31 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

CAMBIO

REVISIÓN

FECHA

Ninguno

0

26/08/03

.

CAL-02-B

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 32 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

DESCRIPCION DEL PROCESO

En este procedimiento de Serología se pueden encontrar pruebas de Rutina, Confirmatorias, seguimiento y para pacientes dentro del protocolo de Transplante de medula ósea.

Dentro de las pruebas encuentran:

que se realizan de rutina y/o

tamizaje en el laboratorio se

PRUEBAS DE TAMIZAJE

ENSAYO PARA DETECCION DE:

PRUEBA DE RUTINA

Anticuerpos contra Chagas

ELISA

Anticuerpos contra Chagas

HAI

Antígeno de Superficie de Hepatitis B

ELISA

Anticuerpos contra HCV

ELISA

Anticuerpos contra HIV 1+2

ELISA

Anticuerpos contra Sífilis

VDRL o RPR

Anticuerpos contra Brucela

Antígeno Rosa de bengala

En caso de salir reactivo la prueba de tamizaje, se procede con la realización de la prueba confirmatoria o suplementaria:

PRUEBAS CONFIRMATORIAS

MARCADOR

 

CONFIRMATORIA

CHAGAS

HAI 2

- MERCAPTO ETANOL

- MERCAPTO ETANOL

HBV

 

NEUTRALIZACIÓN

HCV

INMUNOBLOT RIBA HCV

HIV

WESTERN BLOT HIV-1

HIV

WESTERN BLOT HIV-2

SIFILIS

 

TP-PA ELISA

SIFILIS

 

TP-PA HAI

BRUCELA

 

ANTIGENO BLANCO

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 33 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

PPRROOPPUUEESSTTAA DDEE UUNN AALLGGOORRIITTMMOO DDEE TTRRAABBAAJJOO EENN BBAANNCCOO DDEE SSAANNGGRREE

LIBERACION Negativo Y ASIGNACION
LIBERACION
Negativo
Y
ASIGNACION
Reactivo DESTINO FINAL DEL PRODUCTO 11 eerr CCOORRRRIIDDAA DDEE MMUUEESSTTRRAASS PPAARRAA MMAARRCCAADDOORREESS
Reactivo
DESTINO
FINAL DEL
PRODUCTO
11 eerr CCOORRRRIIDDAA DDEE MMUUEESSTTRRAASS
PPAARRAA MMAARRCCAADDOORREESS
SSEERROOLLOOGGIICCOOSS

22 aa ccoorrrriiddaa ((ttuubboo yy ppiilloottoo))

Negativo

RREEPPOORRTTEE AA

DDOONNAADDOORR

Reactivo Negativo PPRRUUEEBBAA CCOONNFFIIRRMMAATTOORRIIAA
Reactivo
Negativo
PPRRUUEEBBAA
CCOONNFFIIRRMMAATTOORRIIAA
Reactivo
Reactivo

SSoolliicciittaarr 22aa mmuueessttrraa SSee ccoorrrree EELLIISSAA ((11eerr && 22aa MMUUEESSTTRRAA))

S A A ( ( 1 1 e e r r & & 2 2 a
S A A ( ( 1 1 e e r r & & 2 2 a

NEGATIVO

INDETERMINADO

POSITIVO

S A A ( ( 1 1 e e r r & & 2 2 a
S A A ( ( 1 1 e e r r & & 2 2 a
S A A ( ( 1 1 e e r r & & 2 2 a

CAL-02-B

Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría

Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de

Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 34 de 97

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ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS (ELISA)

La enfermedad de Chagas es una infección provocada por un parásito llamado Tripanosoma cruzi. El diagnostico para esta enfermedad depende de la fase en que se encuentra la cual puede ir de una fase aguda a una fase crónica. Para el diagnostico de la fase crónica se utiliza entre otros métodos el de ELISA y para la fase aguda el HAI que serán los métodos que se explicaran en este procedimiento.

El método de Ensayo inmunoenzimàtico (ELISA) para la determinación de anticuerpos contra el Tripanosoma cruzi se fundamenta en que la muestra del donador o paciente se diluye en el soporte en el que se encuentra inmovilizado el antígeno, si contiene anticuerpos específicos contra Tripanososma cruzi, se formara un complejo que se mantiene unido al soporte. La fracción que no se une se desecha por medio de lavados. Se agrega anticuerpos anti inmunoglobulina humana conjugados con peroxidasa, si se produjo la reacción en la primera etapa del proceso, se unirá el conjugado. Se realiza un segundo lavado para eliminar en anticuerpo conjugado que no se une. Se agrega el sustrato. Si existe unión con el conjugado aparece un color celeste y se detendrá la reacción con ácido sulfúrico, con lo que el color celeste vira al amarillo. La concentración de anticuerpos específicos es directamente proporcional al color de la reacción.

El reactivo que utilizaremos para realizar la prueba es el CHAGATEST ELISA:

Incluye una policubeta sensibilizada que contiene tiras removibles con pocillos que contienen antígenos citoplasmáticos y de membrana de Tripanosoma cruzi inmovilizados.

Diluyente de muestra

Buffer de lavado de placa

Controles positivo y negativo

Anti inmunoglobulina humana conjugado

Solución de revelado

Solución de paro

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 35 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología La muestra para esta prueba puede ser plasma o

La muestra para esta prueba puede ser plasma o suero y de preferencia no se debe de utilizarse muestras lipemicas, hemolizadas o cualquier otra causa en la que la muestra se observe turbia.

Cuando el análisis no se realiza el día de la extracción de la muestra se puede conservar la muestra durante 7 días a 2-10°C o congelada a 20°C, cuando la muestra se requiera guardar y descongelar de nuevo.

Este procedimiento se lee a una longitud de onda primaria de 450nm (filtro de lectura), una longitud de onda secundaria de 620-650nm (filtro de referencia).

Una vez que se inicia el análisis no debe de existir interrupciones, es importante que la muestra y los reactivos al ser colocados en los diferentes pocillos sean colocados en el seno del pocillo y que al dispensar se enjuague la pipeta para asegurar la homogenización. Los reactivos utilizados en esta prueba están listos para usar y solo al Buffer de lavado (5X) se le realiza una dilución 1+ 4 (ejemplo para preparar 1l: 200ml de buffer de lavado + 800ml de agua destilada). Ver el inserto al final del procedimiento).

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DETECCION DE ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS ELISA

Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s) si se requiere.

Se prende la Incubadora Abbott Commander y se pone a 37 C para cuando se necesite introducir la muestra.

si se requiere. Se prende la Incubadora Abbott Commander y se pone a 37 C para
pone a 37 C para cuando se necesite introducir la muestra. Se escribe en la bitácora

Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras, bco, controles (los pocillos no se puden

marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis (mapa de muestras).

se puden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis
correcta identificación del análisis (mapa de muestras). Se centrifugada la muestra si es que no se

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el

análisis ( la muestra puede ser plasma o suero)

centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra
el análisis ( la muestra puede ser plasma o suero) A todos los pocillo previamente identificado

A todos los pocillo previamente identificado en la bitacora CAL- 26-A se les adiciona una alicuota de 200microlitros de diluyente de muestra

incluyendo al blanco

en la bitacora CAL- 26-A se les adiciona una alicuota de 200microlitros de diluyente de muestra
de diluyente de muestra incluyendo al blanco A los pocillos que son de los pacientes, donador

A los pocillos que son de los pacientes, donador o repetición de análisis se les adiciona 10 microlitros del suero o plasma y se homogenizan

con la misma punta con que se esta colocando.

análisis se les adiciona 10 microlitros del suero o plasma y se homogenizan con la misma
homogenizan con la misma punta con que se esta colocando. Al pocillo identificado como control internos

Al pocillo identificado como control internos positivo se le colocan 10 microlitros del tubo marcado como control interno positivo y al pocillo

marcado como control interno negativo se le adicionan 10 microlitros del tubo marcado como control interno negativo.

marcado como control interno negativo se le adicionan 10 microlitros del tubo marcado como control interno
microlitros del tubo marcado como control interno negativo. A los 2 pocillos identificados como control positivo

A los 2 pocillos identificados como control positivo se les colocan 10 microlitros a cada uno del reactivo marcado como control positivo y al los

3 pocillos marcados como control negativo se le adicionan 10 microlitros a cada uno del reactivo marcado como control negativo.

marcados como control negativo se le adicionan 10 microlitros a cada uno del reactivo marcado como
a cada uno del reactivo marcado como control negativo. Se mezclan aplicando suaves golpes en los

Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta s (para evitar

evaporaciòn).

en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta
adhesiva toda la policubeta s (para evitar evaporaciòn). Se incuba la policubeta a 37 C durante

Se incuba la policubeta a 37 C durante 30 min. en la incubadora Abbott Commander, una vez que suena la alarma se saca la policubeta y se

realiza el lavado en el Equipo Sanofi Diagnostics Pasteur LP 35

una vez que suena la alarma se saca la policubeta y se realiza el lavado en
el lavado en el Equipo Sanofi Diagnostics Pasteur LP 35 Una vez terminado el lavado se

Una vez terminado el lavado se decanta el remanente del lavado inviertiendo la policubeta y golpeàndola varias veces sobre papel

absorbente, posteriormente agregar a todos los pocillos 1 gota (60microlitros) de conjugado a todos incluyendo al blanco y mezclar aplicando

con suaves golpes en los laterales de la policubeta.

de conjugado a todos incluyendo al blanco y mezclar aplicando con suaves golpes en los laterales
con suaves golpes en los laterales de la policubeta. Se incuba la policubeta a 37 C

Se incuba la policubeta a 37 C durante 30 min. en la incubadora Abbott Commander, una vez que suena la alarma se saca la policubeta y se

realiza el lavado en el Equipo Sanofi Diagnostics Pasteur LP 35

una vez que suena la alarma se saca la policubeta y se realiza el lavado en
el lavado en el Equipo Sanofi Diagnostics Pasteur LP 35 Una vez terminado el lavado se

Una vez terminado el lavado se decanta el remanente del lavado inviertiendo la policubeta y golpeàndola varias veces sobre papel

absorbente, posteriormente agregar a todos los pocillos 1 gota (50microlitros) de revelador A y una gota de revelador B y mezclar aplicando

con suaves golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg.

A y una gota de revelador B y mezclar aplicando con suaves golpes en los laterales
golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg. La policubeta se deja a Temperatura
La policubeta se deja a Temperatura Ambiente durante 15-20MIN.

La policubeta se deja a Temperatura Ambiente durante 15-20MIN.

La policubeta se deja a Temperatura Ambiente durante 15-20MIN.
La policubeta se deja a Temperatura Ambiente durante 15-20MIN.
La policubeta se deja a Temperatura Ambiente durante 15-20MIN.
La policubeta se deja a Temperatura Ambiente durante 15-20MIN.
policubeta se deja a Temperatura Ambiente durante 15-20MIN. Se agrega 1 gota (50 microlitros) de soluciòn

Se agrega 1 gota (50 microlitros) de soluciòn Stopper (para detener la reacciòn) a todos incluyendo al blanco mezclar aplicando con suaves

golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg.

a todos incluyendo al blanco mezclar aplicando con suaves golpes en los laterales de la policubeta
golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg. Leer a 450nm o bicromàtica a
Leer a 450nm o bicromàtica a 450/ 620-650nm (el color de la reacciòn es estable

Leer a 450nm o bicromàtica a 450/ 620-650nm (el color de la reacciòn es estable durante 30min) o con el programa del equipo LP-400.

o bicromàtica a 450/ 620-650nm (el color de la reacciòn es estable durante 30min) o con
o bicromàtica a 450/ 620-650nm (el color de la reacciòn es estable durante 30min) o con
o bicromàtica a 450/ 620-650nm (el color de la reacciòn es estable durante 30min) o con
o bicromàtica a 450/ 620-650nm (el color de la reacciòn es estable durante 30min) o con
estable durante 30min) o con el programa del equipo LP-400. Se interpretan los resultados y se

Se interpretan los resultados y se guarda el reporte impreso en el Folder de Serologia Chagas y el mes en que se esta realizando el anàlisis y

tambien en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A.

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VALIDACIÓN DE LA CORRIDA

Si la corrida realizada no cumple con una o ambas de las siguientes condiciones se repite la corrida:

Una lectura de al menos 2 de los 3 controles negativos que corregidas contra el blanco de reactivos deben ser menores o iguales a 0,150 D.O.o ambas de las siguientes condiciones se repite la corrida: Una lectura media de los controles

Una lectura media de los controles positivos que corregida debe ser mayor o igual a 0,600 D.O.blanco de reactivos deben ser menores o iguales a 0,150 D.O. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS Con

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Con instrumental óptico:mayor o igual a 0,600 D.O. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS La presencia o ausencia de Ac.

La presencia o ausencia de Ac. Anti-T. cruzi se determina relacionando la absorbancia de la muestra respecto al valor Cut-off Cut-off = CN + 0,200 D.O. Donde CN: promedio de las lecturas del control negativo Zona de indeterminación: Cut-off +- 10%

Muestras no reactivas: se consideran aquellas con absorbancia menores que el límite inferior de la zona de indeterminación.control negativo Zona de indeterminación: Cut-off +- 10% Muestra reactiva: se consideran aquellas con absorbancia

Muestra reactiva: se consideran aquellas con absorbancia mayores que el límite superior de la zona de indeterminación.que el límite inferior de la zona de indeterminación. Muestras indeterminadas: se consideran aquellas con

Muestras indeterminadas: se consideran aquellas con absorbancia que caen dentro de la zona de indeterminación. Estas muestras deben ser ensayadas nuevamente.que el límite superior de la zona de indeterminación. Interpretación visual: Si se opta por esta

Interpretación visual: Si se opta por esta interpretación debe considerarse:Estas muestras deben ser ensayadas nuevamente. No reactiva: muestra que no presenta una coloración mayor

No reactiva: muestra que no presenta una coloración mayor que los controles negativos. Reactiva: muestra que presenta una coloración netamente amarilla.

Cuando se presentan colores tenues mayores que el control negativo se requiere interpretación instrumental.

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ANTICUERPOS CONTRA CHAGAS (HAI)

La hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hemaglutinación reversa pasiva, se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos del Tripanosoma cruzi de producir aglutinación específica en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los correspondientes antígenos.

En el suero existen anticuerpos inespecíficos (heterófilos) que son capaces de aglutinar glóbulos rojos de distintas especies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con los GR no sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se eliminan mediante tratamientos con 2-mercaptoetanol que se utiliza en la Prueba confirmatoria.

Para la realización de esta prueba solo se puede utilizar solo suero y se requiere que las muestras no se encuentren de preferencia lipemicas o hemolizadas. Si la muestra se resguardara antes de su análisis se conservara a 2-10 C durante no más de 72 Hrs. contadas a partir de la extracción o a 20 C para periodos mas largos de conservación.

Los reactivos a utilizar en esta prueba no todos están listos para usar y es muy importante que sean preparados con las cantidades que indica el inserto CHAGATEST HAI y el tiempo que se considera son estables. (Ver el inserto al final del procedimiento).

Cuando se presenten resultados en todas las diluciones reactivas o todas con ausencia de reactividad, puede ser indicio de autoaglutinación por la presencia de Anticuerpos heterofilos del antígeno HAI o deterioro de los reactivos.

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Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra( s).

Se marca la placa con dividiones de 4 pocillos

s). Se marca la placa con dividiones de 4 pocillos Se escribe en la bitácora para

Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL- 26- A el orden en que se pondran las muestras y controles , los datos que requiera la

bitacora para la correcta identificación del análisis.

bitacora para la correcta identificación del análisis. Se marca la placa con el numero de toma

Se marca la placa con el numero de toma de muestra que le corresponde

Se marca la placa con el numero de toma de muestra que le corresponde
Se marca la placa con el numero de toma de muestra que le corresponde
Se marca la placa con el numero de toma de muestra que le corresponde
Se marca la placa con el numero de toma de muestra que le corresponde
Se marca la placa con el numero de toma de muestra que le corresponde
la placa con el numero de toma de muestra que le corresponde Se centrifugada la muestra

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el

análisis ( la muestra solo puede ser suero). A todos los pocillo se les adiciona una alicuota de 25microlitros de diluyente de suero ( Buffer )

El diluyente del suero se prepara: 200 microlitros de solución proteica por cada 10 ml del buffer

de suero ( Buffer ) El diluyente del suero se prepara: 200 microlitros de solución proteica
microlitros de solución proteica por cada 10 ml del buffer A los pocillos que son de

A los pocillos que son de los pacientes , donador o repetición de análisis se les adiciona 25microlitros del suero y se homogenizan con la

misma punta con que se esta colocando .

de análisis se les adiciona 25microlitros del suero y se homogenizan con la misma punta con
homogenizan con la misma punta con que se esta colocando . Se realizaran diluciones seriadas a

Se realizaran diluciones seriadas a partir del primer pocillo ( ½, ¼, 1/ 8,

etc).

Se toma una alicuota de 25microlitros del primer pocillo del paciente y se pasa al segundo pocillo, se homogeniza y se toma una alicuota del

segundo pocillo de 25 microlitros y se pasa al tercer pocillo y lo mismo para el cuarto pocillo ( en el cuarto pocillo se toma la alicuota de

25microlitros y se tira para que contenga el mismo volumen que los demas pocillos. Las diluciones seran de ½ para el primer pocillo, ¼ para el

segundo pocillo y asi sucesivamente.

que los demas pocillos. Las diluciones seran de ½ para el primer pocillo, ¼ para el
pocillo, ¼ para el segundo pocillo y asi sucesivamente. Al pocillo identificado como control positivo y

Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de dilucion.

Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de
Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de
Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de
Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de
Al pocillo identificado como control positivo y control negativo se les realiza el mismo proceso de
negativo se les realiza el mismo proceso de dilucion. Una vez reconstituido y agitado el reactivo

Una vez reconstituido y agitado el reactivo que contiene los GR no sensibilizados ( control de heterofilia) se le adiciona 25microlitros a los

pocillo que contienen la dilucion ½ y ¼ de todas las muestras y controles

se le adiciona 25microlitros a los pocillo que contienen la dilucion ½ y ¼ de todas
la dilucion ½ y ¼ de todas las muestras y controles Y a los pocillo que
Y a los pocillo que contienen las diluciones 1/ 8 y 1/ 16 muestras y

Y a los pocillo que contienen las diluciones 1/ 8 y 1/ 16 muestras y controles se les adiciona 25 microlitros de Antigeno HAI o GR sensibilizados

las diluciones 1/ 8 y 1/ 16 muestras y controles se les adiciona 25 microlitros de
las diluciones 1/ 8 y 1/ 16 muestras y controles se les adiciona 25 microlitros de
adiciona 25 microlitros de Antigeno HAI o GR sensibilizados Se mezclan aplicando suaves golpes en los

Se mezclan aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta

(para evitar evaporaciòn).

en los laterales de la policubeta y se tapa con una cubierta adhesiva toda la policubeta
adhesiva toda la policubeta (para evitar evaporaciòn). Se deja en reposo durante 90min ( en un

Se deja en reposo durante 90min ( en un lugar donde no exista vibracion )

Se deja en reposo durante 90min ( en un lugar donde no exista vibracion )
Se deja en reposo durante 90min ( en un lugar donde no exista vibracion )
Se deja en reposo durante 90min ( en un lugar donde no exista vibracion )
Se deja en reposo durante 90min ( en un lugar donde no exista vibracion )
Se deja en reposo durante 90min ( en un lugar donde no exista vibracion )
durante 90min ( en un lugar donde no exista vibracion ) Leer a partir de los

Leer a partir de los 90min. Se puede aumentar la nitidez de lectura haciendolo sobre un espejo , ilumunando la placa desde arriba e

interponiendo un papel blanco y traslùcido entre la policubeta y la fuente de luz .

, ilumunando la placa desde arriba e interponiendo un papel blanco y traslùcido entre la policubeta
y traslùcido entre la policubeta y la fuente de luz . Se interpretan los resultados y

Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL- 13- A.

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INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

No reactivo: presencia de un sedimento en forma de un botón o pequeño anillo de bordes regulares. Reactivo: formación de una película o manto que cubre el 50% o más del fondo de los pocillos. Si no se usan microdilutores la imagen del manto puede ser más pequeña.

Cuando se observan resultados positivos y además se presenta manto en los pocillos de control de heterofilia (diluciones ½ y ¼), debe realizarse otra titulación con los sueros correspondientes pero previamente tratados con 2-ME o adsorbidos con GR no sensibilizados (el tratamiento elimina la reacción inespecífica).

ANTIGENO DE SUPERFICIE DE HEPATITIS B (ELISA)

Ensayo inmunoabsorbente enzimático para la detección del antígeno de superficie de la hepatitis B en suero o plasma humano.

La prueba de anticuerpos frente al HBs Ag ELISA es un ensayo inmunoabsorbente enzimático de tercera generación para la detección del antígeno de superficie de la hepatitis B (HBs Ag). Es una prueba de preselección de muestras y herramienta diagnóstica ante una posible infección por hepatitis B.

Se utilizan pocillos recubiertos con anticuerpos frente al HBs Ag como fase sólida. El técnica ELISA es de que los antígenos o anticuerpos que se fijan a la fase sólida pueden detectarse mediante un antígeno o anticuerpo complementario marcado con una enzima capaz de actuar como substrato cromegénico. Al aplicar el substrato, la presencia de un antígeno o anticuerpo puede detectarse por el desarrollo de un producto final coloreado, el ELISA es utilizado para enfermedades infecciosas.

El procedimiento se divide en dos etapas y se lleva a cabo en un micropocillo recubierto con anticuerpos frente al HBs Ag. El control de omisión de muestra (COM) es una característica de la prueba basada en la medición del cambio de densidad óptica ( DO) a 405nm que se produce en los pocillos al añadir la muestra. Cambio que se observa también visualmente, cuando el diluyente de conjugado pasa de color azul a verde azulado al añadir la muestra.

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Etapas de la prueba:

En la primera Se añade al pocillo de ensayo el conjugado de trabajo, constituido por anticuerpos conjugados con Se añade al pocillo de ensayo el conjugado de trabajo, constituido por anticuerpos conjugados con HPR y diluidos en diluyente de conjugado de color azul. La microplaca se incuba y si la muestra contiene HBs Ag, éste se fija al pocillo recubierto de anticuerpos, y simultáneamente al conjugado para formar complejos inmovilizados, constituidos por anticuerpos- HBs Ag-conjugado. Las proteínas séricas o plasmáticas se eliminan en el siguiente paso de lavado.

En la segunda etapao plasmáticas se eliminan en el siguiente paso de lavado. Se añade al pocillo un sistema

Se añade al pocillo un sistema de detección de enzimas compuesto por OPD y peróxido de hidrógeno. Si el conjugado se ha fijado a la muestra, el OPD se oxida bivalentemente la peroxidasa para formar un compuesto intermedio que, a su vez, se reduce, donante de iones hidrógeno. La forma oxidada de OPD resultante es de color naranja. Por último se añade ácido sulfúrico para detener la reacción. La intensidad de color depende de la cantidad de conjugado fijado que haya en el pocillo. La intensidad de color ésta en función de la concentración de HBs Ag que contenga la muestra, se mide con un lector de microplaca a 490 0 492nm.

Precauciones

Los reactivos se puede almacenar entre 2-8° C. No mezclar reactivos de lotes diferentes. Dejar reactivos a temperatura ambiente 30 min. antes de su empleo. Utilizar guantes y lavarse las manos al terminar.

La preparación de los reactivos se observa en el inserto de la prueba anexada al final del procedimiento.

Es importante que si utiliza plasma este recolectado con anticoagulante adecuado (heparina no) y que contenga la cantidad que se requiere para la muestra. Se puede utilizar suero. El suero o plasma se puede almacenar a 2 y 8 C durante un máximo de 7 días, en congelación a 18 C o menos y no descongelar y congelar consecutivamente.

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CRITERIOS DE ACEPTACION DEL SUBSTRATO EN BLANCO

Se considera que una placa es válida con respecto al substrato en blanco si el valor de la absorbancia del pocillo correspondiente al substrato en blanco (pocillo 1A) es igual o mayor que 0,001 e igual o menor que 0,050.

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CALIBRADOR NEGATIVO

Se considera que una placa es válida si al menos dos de los tres calibradores negativos cumplen con los siguientes criterios.

Si uno de los tres valores control está fuera de estos límites, deberá volver a calcularse la media de los controles negativos (NCalx) en base a los dos valores de absorbancia aceptables de los calibradores.

Los valores que estén entre 0,006 y 0,012, ambos incluidos, son válidas y deben redondearse a 0,000 para efectuar el cálculo.

Determine

la

media

de

negativo (NCalx).

los

valores

de

absorbancia

del

calibrador

La placa no será válida y deberá repetirse la prueba si dos o más de los tres valores control está fuera de los límites.

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL POSITIVO

Los controles positivos son utilizados para verificar que los componentes del kit de la prueba tienen capacidad para detectar una muestra reactiva, siempre que el procedimiento de la prueba se haya seguido estrictamente.

Se considera que una placa es válida únicamente cuando los valores de absorbancia respectivos a 490nm ó 492nm son iguales o mayores que el valor de corte, y cumple además los siguientes criterios:

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El valor de absorbancia del control positivo es igual o mayor que 0,225 e igual o menor de 2,500. El valor de absorbancia del control positivo no difieren entre sí más de 0,230. Si
El valor de absorbancia del control positivo no difieren entre sí más de 0,230. Si uno cualquiera de estos valores controles está fuera de estos límites, el ensayo no se considera válido y deberá repetirse.El valor de absorbancia del control positivo es igual o mayor que 0,225 e igual o

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO

El calibrador negativo y el control positivo deben cumplir los criterios de aceptación de control de calidad para que la microplaca se pueda considerar válida.

CALCULO DE LOS VALORES DE CORTE (cut-off)

Valor de corte = NCalx + 0,030

Ejemplo:

Control negativo

1 0,001

2 0,000

3 0,002

Absorbancia

Absorbancia total=

0,003

NCalx = Absorbancia total/ 3 =

0,001

Valor de corte= 0,001 + 0,030 = 0,031

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 44 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los
Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la muestra(s) que se van a
utilizar para esta prueba.
Se enciende la incubadora Abbott Commander a 37 C
Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan el blanco, muestras y controles (los circulos no se
pueden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis.
Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el
análisis ( la muestra que se utiliza puede ser suero o plasma )
La forma de colocarlos es asi:
Colocar 3 pocillos
Colocar 2 pocillos
Colocar las
Colocar el Control
Colocar el Control
Blanco
con Controles
con controles
muestras
interno negativo
interno positivo
negativos
positivos
Adicionar 50microlitros de Conjugado de Hepatitis B a todos los pocillos menos al blanco (7ml de diluyente de conjugado + 20microlitros de
concentrado de conjugado)
Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia y homogenizar con la punta que se adiciona.
Colocar 150microlitros de
cada muestra
Colocar 150microlitros en el
pocillo del Control interno
negativo
Colocar 150microlitros en el
pocillo del Control interno
positivo
Colocar en los 3 pocillos de
Controles negativos
150microlitros del control
Colocar en 2 pocillos de
Controles positivos
150microlitros del control
Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 90min.
Realizar los respectivos lavados (solución de lavado con 950ml de agua destilada+ 50ml de solución de lavado 20X) con el LP 35 SANOFI
Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 6 ciclos) La forma de operar del equipo se describe al final del procedimiento. Quitar exceso de lavado
con golpes sobre un papel. Se prepara la Solución Buffer-sustrato-OPD
(1 pastilla de OPD + 6ml de Buffer)
Adicionar 200microlitros deSolución Buffer-sustrato-OPD a todos los pocillos (incluyendo al blanco). Tapar la placa con una cubierta de metal
si se tiene o en oscuridad e incubar a temperatura ambiente durante 30min. Al termino de la incubación se adicionan a todos 50microlitros de
acido sulfurico 4N (para parar la reacciòn)
Se realiza la lectura y se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A. y se guarda el registro impreso
en el folder del mes y con el nombre de la prueba.

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 45 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Las muestras con valores de absorbancia menores que – 0,014 deben volver a ensayar una vez. Se considera que son no reactivas, aunque 0,014 deben volver a ensayar una vez. Se considera que son no reactivas, aunque en la repetición se obtenga el mismo valor.

Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte e igual o mayor de – 0,014 deberán considerarse no reactivas. No es necesario repetir la prueba. 0,014 deberán considerarse no reactivas. No es necesario repetir la prueba.

Las muestras cuyo valor de absorbancia sea igual o mayor que el valor de corte se consideran inicialmente reactivas y deben volver a ensayarse por duplicado antes de proceder a su interpretación definitiva.no reactivas. No es necesario repetir la prueba. Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva,

Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva,duplicado antes de proceder a su interpretación definitiva. ésta se considera repetidamente reactiva al HBs Ag

ésta se considera

repetidamente reactiva al HBs Ag si una cualquiera de las determinaciones por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte.

Después de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera reactiva y el resultado es confirmado por neutralización con anti- HBs Humano, se considera la muestra como positiva al HBs Ag.reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte. Después de volver a ensayar

Después de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera no reactiva al HBs Ag si ambas determinaciones duplicadas son no reactivas y menor que el valor de corte e igual o mayor de – 0,014. 0,014.

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

ANTICUERPOS CONTRA HCV (ELISA)

Este es un Inmunoensayo enzimático cualitativo para la detección de Anticuerpos frente al Virus de la Hepatitis C (anti- HCV) en suero o plasma humanos.

En el Inmunoensayo enzimático (ELISA) se utiliza como fase sólida pocillos con un revestimiento de una combinación de antígenos recombinantes configurados del virus de la hepatitis C. El principio de la ELISA es de que los antígenos o anticuerpos que se fijan a la fase sólida pueden detectarse mediante un antígeno o anticuerpo complementario marcado con una enzima capaz de actuar como substrato cromogénico. Al aplicar el substrato enzimático, la presencia sobre el antígeno o anticuerpo puede detectarse por el desarrollo de u producto final coloreado. El ELISA es utilizado para enfermedades infecciosas. El virus de la Hepatitis C es el agente causal de la mayoría si no es de todas, las hepatitis transmitidas por sangre y que no son del tipo A ni del tipo B.

Etapas de la prueba:

En la primera Se incuba una muestra diluida en el pocillo de pruebas durante un periodo determinado de Se incuba una muestra diluida en el pocillo de pruebas durante un periodo determinado de tiempo. Si en la muestra existe anticuerpo reactivo frente a cualquiera de los tres antígenos, se formarán complejos de antígeno-anticuerpo en la superficie del micropocillo. Si no existe anti-HCV, no formarán dichos complejos. La etapa de lavado elimina las proteínas del suero o plasma que no se hayan unido.

En la segunda etapalas proteínas del suero o plasma que no se hayan unido. Se añade al micropocillo un

Se añade al micropocillo un anticuerpo monoclonal de rata conjugado con peroxidasa de rábano. El conjugado se une específicamente a la porción de la IgG humana de los complejos antígeno-anticuerpo. Si estos complejos antígeno-anticuerpo no se hallan presentes, el conjugado que no se ha unido se eliminará en la fase de lavado que ha de realizarse a continuación.

En la tercera etapaen la fase de lavado que ha de realizarse a continuación. Se añade al pocillo un

Se añade al pocillo un sistema de detección de enzima compuesto de o-fenilendiamina (cromogénico) y peróxido de hidrógeno (sustrato). Si existe conjugado unido, el OPD se oxidará y dará lugar a un producto final coloreado. En esta reacción, la peroxidasa se

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 47 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

oxida de forma divalente mediante el peróxido de hidrógeno y forma un compuesto intermedio que, a su vez, se reduce a su estado inicial mediante interacción subsiguiente con el OPD donador de ión hidrógeno. Entonces, se añade ácido sulfúrico para paralizar la reacción.

La intensidad de color depende de la cantidad de conjugado unido, está en función de la concentración de anti-HCV presente en la muestra. La intensidad de color se mide con un lector de micropocillos diseñado para cuantificar la absorbancia de la luz en un micropocillo.

La preparación de los reactivos para este procedimiento se encuentra en el inserto al final del procedimiento.

Se puede utilizar suero o plasma para realizar la prueba, se puede utilizar suero, incluido el recogido en tubos separadores de suero, o plasma recogido en EDTA, ACD, CPDA, CP2D, CPD y citrato de sodio al 4% y heparina.

La muestra se puede almacenar entre 2-8 C hasta 7 días y si se requiere un almacenamiento prolongado, la muestra se congela a menos 18 C. Los pocillo que no se van a utilizar se almacenan entre 2-8 C en la bolsa de aluminio que se suministra, con desecante, sellada firmemente y se debe utilizar dentro de los 42 días siguientes a la apertura de la bolsa de aluminio.

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL SUBSTRATO EN BLANCO

Se considera que una placa es válida con respecto al substrato en blanco si el valor de la absorbancia del pocillo correspondiente al substrato en blanco (pocillo 1A) es igual o mayor que 0,020 e igual o menor que 0,050.

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO

que 0,050. CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO Los valores individuales de control negativo deben ser

Los valores individuales de control negativo deben ser iguales o menores que 0,0120 y mayores o iguales que 0,005. Si uno de los tres valores control se encuentra fuera de alguno de estos límites, recalcule el valor medio del control negativo en base a los dos valores controles aceptables. La placa no será válida y deberá repetirse la prueba si dos o más de los tres valores control están fuera de los límites.

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 48 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

Determinar la media de los valores control negativo.DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Ejemplo: Control negativo 1 0,005 2 0,015 3 0,010

Ejemplo:

Control negativo

1 0,005

2 0,015

3 0,010

Absorbancia

Absorbancia total=

0,030

NCx = Absorbancia total/ 3 =

0,010

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL POSITIVO

Los controles positivos son utilizados para verificar que los componentes del kit de la prueba tienen capacidad para detectar una muestra reactiva, siempre que el procedimiento de la prueba se haya seguido estrictamente.

Se considera que una placa es válida, si ambos controles positivos, si el valor de ambos controles positivos es mayor o igual al valor de corte “cutoff” dentro de la ambos controles positivos es mayor o igual al valor de corte “cutoff” dentro de la lectura del lector de placas

Nota: los valores por encima del límite superior del rango soportado del lector de microplacas puede aparecer como “ OVER” o “ *** “ .

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

blanco).Taparlaplacaconunacubiertademetalo/yoscuridadseincubaatemperaturaambientedurante30min.Yseadicionanatodos

50microlitrosdeacidosulfurico4N(parapararlareacciòn)

Serealizalalectura,seinterpretanlosresultadosyanotaelresultadoenlaBitàcoradeSerologiaCAL-13-Ayaguardaelregistrodentrodel

folderdelmesypruebacorrespondiente

CALCULO DE LOS VALORES DE CORTE (cut-off)

Valor de corte = NCx + 0,330 Ejemplo:

Control negativo

1 0,005

2 0,015

3 0,010

CAL-02-B

Absorbancia

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 50 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

Absorbancia total=

0,030

NCx = Absorbancia total/ 3 =

0,010

Valor de la línea de corte = 0,010 + 0,330 = 0,340

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Las muestras con valores de absorbancia menores que – 0,025 deben volver a ensayar en un pocillo único. Se considera que son no 0,025 deben volver a ensayar en un pocillo único. Se considera que son no reactivas, aunque en la repetición se obtenga el mismo valor o inferior a 0,025.

Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte se consideran no reactivas. No es necesario repetir la prueba.se obtenga el mismo valor o inferior a – 0,025. Las muestras cuyo valor de absorbancia

Las muestras cuyo valor de absorbancia sea igual o mayor que el valor de corte se consideran inicialmente reactivas y deben volver a ensayarse por duplicado antes de proceder a su interpretación definitiva.consideran no reactivas. No es necesario repetir la prueba. Al volver a ensayar una muestra inicialmente

Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera repetidamente reactiva para anticuerpos a HCV si una cualquiera de las determinaciones por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte.duplicado antes de proceder a su interpretación definitiva. Después de volver a ensayar una muestra inicialmente

Después de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera no reactiva para anticuerpos HCV, si ambas determinaciones por duplicado son no reactivos, es decir menores que el valor de corte.reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte. ANTICUERPOS CONTRA HIV 1 +

ANTICUERPOS CONTRA HIV 1 + 2 (ELISA)

Este es un Inmunoensayo enzimático cualitativo para la detección de Anticuerpos frente al Virus de Inmunodeficiencia humana de Tipos 1 y/o 2 (HIV-1 y HIV-2) en suero o plasma humanos.

En el Inmunoensayo enzimático (ELISA) se utiliza como fase sólida pocillos con un revestimiento de una combinación de antígenos recombinantes HIV-1 y HIV-2. El principio de la ELISA es de que los antígenos o anticuerpos que se fijan a la fase sólida

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

pueden detectarse mediante un antígeno o anticuerpo complementario marcado con una enzima capaz de actuar como substrato cromogénico. Al aplicar el substrato enzimático, la presencia de un antígeno o anticuerpo puede detectarse por el desarrollo de un producto final coloreado. El ELISA es utilizado para enfermedades infecciosas.

El síndrome de Inmunodeficiencia adquirida (SIDA) como el complejo relacionado con el (CRS) están causados por el virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 y tipo 2.

HIV-1 y HIV-2 son similares pero distintos.

Morfología y linfotropismo similar Modos de transmisión parecen ser idénticos. Los genomas de los virus exhiben aproximadamente un 60% de homología en genes conservados tales como gag y pol y un 30-40% de homología en genes menos conservados.tipo 1 y tipo 2. HIV-1 y HIV-2 son similares pero distintos. Este método puede ser

Este método puede ser utilizado tanto para el estudio de donadores de sangre como para fines de diagnóstico. El ensayo utiliza una combinación de dos proteínas de envoltura recombinantes de HIV-1 y una proteína core recombinante de HIV-2.

Etapas de la prueba:

En la primera Etapa del procedimiento se diluye en diluyente de la muestra (color verde). La dispersión de la muestra o el control provoca un cambio de color evidente que puede monitorearse visualmente o mediante lecturas fotométricas a 610nm. A continuación la muestra o control diluidos se incuban en el pocillo del equipo durante un periodo de tiempo establecido. Si la muestra contiene un anticuerpo reactivo a alguno de los 4 antígenos, se formaran complejos antígeno-anticuerpo en la superficie del pocillo. Si no hay anti HIV-1 y/o anti-HIV-2, nose formarán los complejos. Las proteínas séricas o plasmáticas no fijadas se eliminarán en la siguiente fase de lavado.proteína core recombinante de HIV-2. Etapas de la prueba: En la segunda etapa se añade al

En la segunda etapa se añade al pocillo una mezcla de los 4 antígenos HIV-1 y HIV-2 recombinantes conjugados a peroxidasa de rábano. El conjugado se fija específicamente la porción inmunoglobulina anti-HIV-1 y/o anti-HIV-2 (IgG e IgM) de los complejos antígeno-anticuerpo. Si no existen complejos antígeno-anticuerpo, el conjugado no fijado se eliminará en el siguiente lavado.los complejos. Las proteínas séricas o plasmáticas no fijadas se eliminarán en la siguiente fase de

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

En la tercera etapa, se añade un sistema de detección de enzimas consistente en o-fenilenediamina y peroxido de hidrógeno. Si hay conjugado fijado, el OPD se oxidará produciendo una reacción de color anaranjado. Entonces se añade ácido sulfúrico para detener la reacción.DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología La intencidada del color resultante depende de la cantidad

La intencidada del color resultante depende de la cantidad de conjugado fjado y es, por lo tanto, una función de la concentración de anti- HIV-1 y/o anti-HIV-2 presente en la muestra. La intensidad del color se mide con un lector de microplacas diseñado para medir la absorbancia de luz de un pocillo.se añade ácido sulfúrico para detener la reacción. La preparación de los reactivos para este procedimiento

La preparación de los reactivos para este procedimiento se encuentra en el inserto al final del procedimiento.

Se puede utilizar suero o plasma para realizar la prueba, se puede utilizar suero, incluido el recogido en tubos separadores de suero, o plasma recogido en EDTA, ACD, CPDA, CP2D, CPD y citrato de sódio al 4% y heparina.

La muestra se puede almacenar entre 2-8 C hasta 7 días y si se requiere un almacenamiento prolongado, la muestra se congela a menos 18 C.

Los pocillos que no se utilizan se deben de cerrar bien y darles 60 días de caducidad a 2-8 C con desecante.

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

Antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C aproximadamente los reactivos, los controles y la muestra(s) que se van a

utilizar para esta prueba. Los reactivos se agitan sin formar burbujas.

Se enciende la incubadora Abbott Commander a 37 C

utilizar para esta prueba. Los reactivos se agitan sin formar burbujas. Se enciende la incubadora Abbott
Se enciende la incubadora Abbott Commander a 37 C Se escribe en la bitácora para análisis

Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se colocan el blanco, muestras y controles (los circulos no se

pueden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis.

(los circulos no se pueden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta
la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se centrifugada la muestra si es que no

Se centrifugada la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el

análisis ( la muestra que se utiliza puede ser suero o plasma )

para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra que
( la muestra que se utiliza puede ser suero o plasma ) La forma de colocarlos

La forma de colocarlos en la placa es asi:

Colocar 1 pocillos Colocar 3 pocillos con controles Colocar las Colocar el Control Colocar el
Colocar 1 pocillos
Colocar 3 pocillos
con controles
Colocar las
Colocar el Control
Colocar el Control
Blanco
con Controles
positivos HIV1 y
muestras
interno negativo
interno positivo
negativos
otro + HIV2
Adicionar 50microlitros de diluyente de muestra a todos los pocillos menos al blanco
Adicionar a los pocillos con la siguiente secuencia y homogenizar con la punta que se adiciona.
Colocar 150microlitros de
cada muestra
Colocar en los 3 pocillos de
Controles negativos
150microlitros del control
Colocar en 1 de los pocillos
de Controles positivos
150microlitros del control
+HIV1 y en otro +HIV2
Colocar 150microlitros en el
pocillo del Control interno
negativo
Colocar 150microlitros en el
pocillo del Control interno
positivo
Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C durante 30min.
Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur (Programa 1 con 5 ciclos) La forma de operar del equipo se
describe al final del procedimiento. Quitar exceso del lavado con golpes sobre un papel.
Adicionar 200microlitros de Conjugado a todos los pocillos (excepto al blanco). Tapar la placa con una cubierta adhesiva e incubar a 37C
durante 30min. Realizar los respectivos lavados con el LP 35 SANOFI Diagnostico Pasteur
Adicionar 200microlitros de Soluciòn buffer- sustrato-OPD (1 pastilla de OPD en 6ml de Buffer sustrato) a todos los pocillos (incluyendo al
blanco). Tapar la placa con una cubierta metalica o poner a oscuridad e incubar a temperatura ambiente durante 30min. Y se adicionan a
todos 50microlitros de acido sulfurico 4N (para parar la reacciòn) incluyendo al blanco.
Se realiza la lectura, se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-13-A y se guarda el registro en el
folder del mes y la Prueba correspondiente.

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL SUBSTRATO EN BLANCO

Se considera que una placa es válida con respecto al substrato en blanco si el valor de la absorbancia del pocillo correspondiente al substrato en blanco (pocillo 1A) es igual o mayor que 0,020 e igual o menor que 0,050.

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL NEGATIVO

Los valores individuales de control negativo deben ser iguales o menores que 0,070 e iguales que – 0,010. Las cifras entre 0,000 y – 0,010, ambas inclusive, son válidas y deben 0,010. Las cifras entre 0,000 y 0,010, ambas inclusive, son válidas y deben redondearse a 0,000. Si uno de los tres valores control está fuera de estos límites, deberá volver a calcularse la media de los controles negativos (NCx) en base a los dos valores aceptables. La placa no será válida y deberá repetirse la prueba si dos o más de los tres valores control están fuera de los límites.

Determinar la media de los valores control negativo (NCx).de los tres valores control están fuera de los límites. Ejemplo: Control negativo 0,005 0,010 0,015

Ejemplo:

Control negativo

0,005

0,010

0,015

Absorbancia

Absorbancia total=

0,030

NCx = Absorbancia total/ 3 =

0,010

CRITERIOS DE ACEPTACION DEL CONTROL POSITIVO

Los controles positivos son utilizados para verificar que los componentes del kit de la prueba tienen capacidad para detectar una muestra reactiva, siempre que el procedimiento de la prueba se haya seguido estrictamente.

Se considera que una placa es válida, si ambos controles positivos (HIV-1 y HIV-2) satisfacen los siguientes criterios:

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

El valor de absorbancia del control positivo HIV-1 es igual o mayor que 0,200 y está dentro del rango soportado por el lector de microplacas.DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología El valor de absorbancia del control positivo HIV-2 es

El valor de absorbancia del control positivo HIV-2 es igual o mayor el corte del ensayo y está dentro del rango soportado por el lector de microplacas.dentro del rango soportado por el lector de microplacas. Si uno cualquiera de estos valores controles

Si uno cualquiera de estos valores controles está fuera de estos límites, el ensayo no se considera válido y deberá repetirse.dentro del rango soportado por el lector de microplacas. Nota: los valores por encima del límite

Nota: los valores por encima del límite superior del rango soportado del lector de microplacas puede aparecer como “ MAS DE” o “ *** “ .

CALCULO DE LOS VALORES DE CORTE (cut-off)

Valor de corte = NCx + 0,125

Ejemplo:

Control negativo

1 0,005

2 0,010

3 0,015

Absorbancia

Absorbancia total=

0,030

NCx = Absorbancia total/ 3 =

0,010

Valor de corte= 0,010 + 0,125 = 0,135

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Las muestras con valores de absorbancia menores que – 0,025 deben volver a ensayar en un pocillo único. Se considera que son no 0,025 deben volver a ensayar en un pocillo único. Se considera que son no reactivas, aunque en la repetición se obtenga el mismo valor.

Las muestras con valores de absorbancia menor que el valor de corte e igual o mayor de – 0,025 deberán considerarse no reactivas. No es necesario repetir la prueba. 0,025 deberán considerarse no reactivas. No es necesario repetir la prueba.

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Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 56 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

Las muestras cuyo valor de absorbancia sea igual o mayor que el valor de corte se consideran inicialmente reactivas y deben volver a ensayarse por duplicado antes de proceder a su interpretación definitiva para posteriormente realizar la Prueba confirmatoria para definir si es positiva, indeterminada o negativa.DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta

Al volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera repetidamente reactiva para anticuerpos a HIV-1 y/o HIV-2 si una cualquiera de las determinaciones por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el valor de corte.para definir si es positiva, indeterminada o negativa. Después de volver a ensayar una muestra inicialmente

Después de volver a ensayar una muestra inicialmente reactiva, ésta se considera no reactiva para anticuerpos a HIV-1 y/o HIV-2, si ambas determinaciones por duplicado son negativas, es decir menores que el valor de corte.de las determinaciones por duplicado, o ambas, son reactivas, es decir, igual o mayor que el

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MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

ANTICUERPOS CONTRA SIFILIS (VDRL o RPR)

Esta prueba es utilizada para detectar sífilis a través de una técnica aglutinación cuando existe presencia de Treponema pallidum, por medio de una reacción inmunológica color azul.

El reactivo SYPAL-CB es una suspensión coloidal de cardilipina, colesterol y lecitina. La cardiolipina es extraída del corazón de la res y la lecitina del pollo. Para su conservación el almacenaje se realiza a una temperatura de 2 - 8 C y cuidando que el recipiente se encuentre bien cerrados y alejados de luz.

Las tarjetas que contiene el kit no se introduce al refrigerador para evitar que se humedezcan. Se requiere atemperar los reactivos antes de utilizarlos (15-30°C)

CAL-02-B

Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría

Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de

Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 58 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

El Técnico de Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre

El Técnico de Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C el SYPAL-CB, los controles y la muestra(s).

Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C el SYPAL-CB,
Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C el SYPAL-CB,
Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C el SYPAL-CB,
Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C el SYPAL-CB,
de entre 15-30 C el SYPAL-CB, los controles y la muestra(s). Se escribe en la bitácora

Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL-26-A el orden en que se pondran las muestras y controles, los datos que requiera la

pondran las muestras y controles, los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del

bitacora para la correcta identificación del análisis (si se considera necesario) si no se pueden marcar a un lado de la placa con el # de toma

de muestra.

marcar a un lado de la placa con el # de toma de muestra. Se centrifuga

Se centrifuga la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis (

la muestra puede ser suero o plasma)

centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra
el análisis ( la muestra puede ser suero o plasma) En esta prueba se utiliza una

En esta prueba se utiliza una placa de prueba SYPAL -CB a todos los circulos se les adiciona una alicuota de 50microlitros o 1 gota con

pipeta desecha del suero del paciente, donador, etc.y se extiende con la misma pipeta desechable o punta.

o 1 gota con pipeta desecha del suero del paciente, donador, etc.y se extiende con la
etc.y se extiende con la misma pipeta desechable o punta. De igual forma se aplican los

De igual forma se aplican los controles positivo y negativo

De igual forma se aplican los controles positivo y negativo
De igual forma se aplican los controles positivo y negativo
De igual forma se aplican los controles positivo y negativo
De igual forma se aplican los controles positivo y negativo
De igual forma se aplican los controles positivo y negativo
De igual forma se aplican los controles positivo y negativo A todos los circulos se les

A todos los circulos se les adiciona 1 gota de SYPAL-CB

A todos los circulos se les adiciona 1 gota de SYPAL-CB (con la punta especial que

(con la punta especial que incluye el kit para la aplicacion de este reactivo) y se agita la placa en el agitador BAXTER ROTATOR V durante

6 min. Leer a partir de los 6min. /100 RPM

V durante 6 min. Leer a partir de los 6min. /100 RPM Se interpretan los resultados

Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B

Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B
Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B
Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B
Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B
Se interpretan los resultados y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B
y anota el resultado en la Bitàcora de Serologia CAL-26-B Cuando el Resultado es Negativo se

Cuando el Resultado es Negativo se reporta como Negativo,

cuando el Resultado es Positivo se realizan diluciones seriadas para determinar el titulo y se realiza la confirmatoria

INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS

Para realizar la lectura de la placa se agita manualmente por unos segundos (lo que aumenta el tamaño de los aglutinados) y se observa con luz fuerte y se continua agitando suavemente durante la lectura para distinguir cualquier microaglutinado.

Una prueba se considera positivas si se obtiene grandes aglutinados (lo que depende de la cantidad presente de anticuerpos en el suero).la lectura para distinguir cualquier microaglutinado. Una prueba se considera negativa cuando la mezcla permanece

Una prueba se considera negativa cuando la mezcla permanece homogénea.positivas si se obtiene grandes aglutinados (lo que depende de la cantidad presente de anticuerpos en

CAL-02-B

Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría

Banco de Sangre Instituto Nacional de Pediatría Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de

Código: CAL-26 Nivel de Revisión: 1 Fecha: 23 de Octubre de 2003 ISBN: 978-968-9170-17-4 Página 59 de 97

MANUAL DE PROCEDIMIENTOS Procedimiento de Técnicas de Serología

ANTICUERPOS CONTRA BRUCELA (ANTIGENO ROSA DE BENGALA)

Para determinar la presencia de anticuerpos en el diagnostico de la Brucela de forma rutinaria en el laboratorio se realiza la siguiente prueba:

Esta prueba es utilizada para el diagnostico de Brucelosis es de aglutinación rápida en placa es empleada para la detección temprana de aglutininas especificas de Brucilla ( B. melitensis, B. abortus y suis).

Para la realización de esta prueba solo se puede utilizar solo suero y se requiere que las muestras no se encuentren lipemicas o bemolizadas. Si la muestra se resguardara antes de su análisis se conservara a 2-8 C.

El Técnico de Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s).

de Serologia antes de iniciar la prueba se llevan a temperatura de entre 15-30 C los
de entre 15-30 C los reactivos, controles y la muestra(s). Se escribe en la bitácora para

Se escribe en la bitácora para análisis manual CAL- 26- A el orden en que se pondran las muestras y controles (los circulos no se puden

marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta identificación del análisis.

(los circulos no se puden marcar) y los datos que requiera la bitacora para la correcta
la bitacora para la correcta identificación del análisis. Se centrifuga la muestra si es que no

Se centrifuga la muestra si es que no se encuentra previamente centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis (

la muestra solo puede ser suero)

centrifugada para tenerla lista para el momento en que la requiere el análisis ( la muestra