Universidad del Valle de México

Campus Coyoacán
Licenciatura QFBT

Nombre del Alumno: Vigueras Lemus Rodrigo

Fecha de entrega: 1 de Junio del 2017
Trabajo No: 9
Calificación: ____________________
Observaciones:_____________________________________________________
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Cinética Enzimática
La cinética enzimática estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas. Estos estudios proporcionan información directa acerca del mecanismo
de la reacción catalítica y de la especifidad del enzima. La velocidad de una
reacción catalizada por un enzima puede medirse con relativa facilidad, ya que
en muchos casos no es necesario purificar o aislar el enzima. La medida se realiza
siempre en las condiciones óptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores,
etc. Y se utilizan concentraciones saturantes de sustrato. En estas condiciones, la
velocidad de reacción observada es la velocidad máxima (Vmax). La velocidad
puede determinarse bien midiendo la aparición de los productos o la desaparición
de los reactivos.
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Al seguir la velocidad de aparición de producto (o de desaparición del sustrato) en

función del tiempo se obtiene la llamada curva de avance de la reacción, o
simplemente, la cinética de la reacción. A medida que la reacción transcurre, la
velocidad de acumulación del producto va disminuyendo porque se va
consumiendo el sustrato de la reacción. Para evitar esta complicación se procede
a medir la velocidad inicial de la reacción (v0).

La velocidad inicial de la reacción es igual a la pendiente de la curva de avance

a tiempo cero (Figura de la derecha). De esta forma, la medida de v0 se realiza
antes de que se consuma el 10% del total del sustrato, de forma que pueda
considerarse la [S] como esencialmente constante a lo largo del experimento.
Además, en estas condiciones no es necesario considerar la reacción inversa, ya
que la cantidad de producto formada es tan pequeña que la reacción inversa
apenas ocurre. De esta forma se simplifican enormemente las ecuaciones de
velocidad.

La cinética enzimática se mide el efecto de la concentración inicial de sustrato

sobre la velocidad inicial de la reacción, manteniendo la cantidad de enzima
constante. Si representamos v0 frente a [S]0 obtenemos una gráfica como la de la
Figura de la derecha. Cuando [S]0 es pequeña, la velocidad inicial es directamente
proporcional a la concentración de sustrato, y por tanto, la reacción es de primer
orden. A altas [S]0, el enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad
ya no depende de [S]0. En este punto, la reacción es de orden cero y la velocidad
es máxima (Vmax).
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CÁLCULO DE LA KM Y DE LA Vmax DE UN ENZIMA

La representación gráfica de la ecuación de Michaelis-Menten (v0 frente a [S]0) es

una hipérbola. La Vmax corresponde al valor máximo al que tiende la curva
experimental, y la KM corresponde a la concentración de sustrato a la cual la
velocidad de la reacción es la mitad de la Vmax.
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Para determinar gráficamente los valores de KM y Vmax es más sencillo utilizar la

representación doble recíproca (1/v0 frente a 1/[S]0), ya que es una línea recta.
Esta representación doble recíproca recibe el nombre de representación de
Lineweaver-Burk (Figura de la derecha). Es una recta en la cual:

La pendiente es KM/Vmax

La abscisa en el origen (1/v0 = 0) es -1/KM

La ordenada en el origen (1/[S]0 = 0) es 1/Vmax

De esta forma, a partir de los datos experimentales se puede calcular

gráficamente, los valores de KM y Vmax de un enzima para diversos sustratos.
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ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

Se define la unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que

cataliza la conversión de 1 µmol de sustrato en un minuto. La actividad específica
es el número de unidades de enzima por miligramo de proteína (U/mg prot) o por
mililitro de disolución (U/ml).

Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de

actividad enzimática como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de
sustrato por segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 µmoles
y 1 minuto son 60 segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta unidad
es muy grande, de forma que se utilizan frecuentemente los submúltiplos como el
microkatal (µkat, 10-6 kat) o el nanokatal (nkat, 10-9 kat).

Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el número de centros

activos por molécula de enzima, las medidas de actividad enzimática permiten
calcular el número de recambio del enzima, o sea, el número de reacciones
elementales que realiza el enzima por cada centro activo y por unidad de tiempo.

TIPOS DE INHIBIDORES ENZIMÁTICOS

Los inhibidores enzimáticos son moléculas que se unen a enzimas y disminuyen su

actividad. Puesto que el bloqueo de una enzima puede matar a un organismo
patógeno o corregir un desequilibrio metabólico, muchos medicamentos actúan
como inhibidores enzimáticos. También son usados como herbicidas y pesticidas.
Sin embargo, no todas las moléculas que se unen a las enzimas son inhibidores; los
activadores enzimáticos se unen a las enzimas e incrementan su actividad.

La unión de un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo de la

enzima y/u obstaculizar que la enzima catalice su reacción correspondiente. La
unión del inhibidor puede ser reversible o irreversible. Normalmente, los inhibidores
irreversibles reaccionan con la enzima de forma covalente y modifican su
estructura química a nivel de residuos esenciales de los aminoácidos necesarios
para la actividad enzimática. En cambio, los inhibidores reversibles se unen a la
enzima de forma no covalente, dando lugar a diferentes tipos de inhibiciones,
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dependiendo de si el inhibidor se une a la enzima, al complejo enzima-sustrato o a

ambos.

Inhibidores o sustratos reversibles

Los inhibidores reversibles se unen a las enzimas mediante interacciones no

covalentes tales como los puentes de hidrógeno, las interacciones hidrofóbicas y
los enlaces iónicos. Los enlaces débiles múltiples entre el inhibidor y el sitio activo se
combinan para producir una unión fuerte y específica. Al contrario de lo que ocurre
con el sustrato y los inhibidores irreversibles, los inhibidores reversibles generalmente
no experimentan reacciones químicas cuando se unen a la enzima y pueden ser
eliminados fácilmente por dilución o por diálisis.

Tipos de inhibidores reversibles

Inhibición competitiva: el sustrato (S) y el inhibidor (I) compiten por el sitio activo
(cavidad de la enzima).

Existen tres tipos de inhibidores reversibles. Se clasifican en base al efecto producido

por la variación de la concentración del sustrato de la enzima en el inhibidor.

En la inhibición competitiva, el sustrato y el inhibidor no se pueden unir a la misma

enzima al mismo tiempo, como se muestra en la figura de la derecha. Esto
generalmente ocurre cuando el inhibidor tiene afinidad por el sitio activo de una
enzima en el que también se une el sustrato; el sustrato y el inhibidor compiten para
el acceso al sitio activo de la enzima. Este tipo de inhibición se puede superar con
concentraciones suficientemente altas del sustrato, es decir, dejando fuera de
competición al inhibidor. Los inhibidores competitivos son a menudo similares en
estructura al sustrato verdadero (ver ejemplos expuestos más abajo).

En la inhibición no competitiva, el inhibidor se puede unir a la enzima al mismo

tiempo que el sustrato. Sin embargo, la unión del inhibidor afecta la unión del
sustrato, y viceversa. Este tipo de inhibición se puede reducir, pero no superar al
aumentar las concentraciones del sustrato. Aunque es posible que los inhibidores
de tipo mixto se unan en el sitio activo, este tipo de inhibición resulta generalmente
de un efecto alostérico donde el inhibidor se une a otro sitio que no es el sitio activo
de la enzima. La unión del inhibidor con el sitio alostérico cambia la conformación
(es decir, la estructura terciaria o la forma tridimensional) de la enzima de modo
que la afinidad del sustrato por el sitio activo se reduce.
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La inhibición mixta, es una forma de inhibición mixta donde la unión del inhibidor
con la enzima reduce su actividad pero no afecta la unión con el sustrato. Como
resultado, el grado de inhibición depende solamente de la concentración de
inhibidor.

Descripción cuantitativa de la inhibición reversible

La inhibición reversible puede ser descrita cuantitativamente en términos de la

unión del inhibidor a la enzima y al complejo enzima-sustrato, y sus efectos en las
constantes cinéticas de la enzima. En el esquema clásico de Michaelis-Menten
mostrado abajo, una enzima (E) se une a su sustrato (S) para formar el complejo
enzima-sustrato (ES). En la catálisis, este complejo se rompe para liberar el producto
(P) y la enzima (E). El inhibidor (I) puede unirse tanto a (E) como a (ES) con las
constantes de disociación Ki o Ki', respectivamente.

Los inhibidores competitivos se pueden unir a (E), pero no a (ES). La inhibición

competitiva aumenta el valor de Km (es decir, el inhibidor interfiere con la unión del
sustrato), pero no afecta a la Vmax (el inhibidor no obstaculiza la catálisis en (ES)
porque no se puede unir a (ES)).

Los inhibidores no competitivos tienen afinidades idénticas por (E) y (ES) (Ki = Ki'). La
inhibición no competitiva no cambia la Km (es decir, no afecta a la unión del
sustrato) pero disminuye la Vmax (es decir, la unión del inhibidor obstaculiza la
catálisis).

Los inhibidores de tipo mixto se unen tanto a (E) como a (ES), pero sus afinidades
por estas dos formas de enzimas son distintas (Ki ≠ Ki'). Por lo tanto, los inhibidores de
tipo mixto interfieren con la unión del sustrato (incremento de Km) y dificulta la
catálisis en el complejo (ES) (disminución de la Vmax).

Esquema cinético aplicable a los inhibidores enzimáticos reversibles.

Cuando una enzima tiene múltiples sustratos, los inhibidores pueden mostrar
distintos tipos de inhibiciones dependiendo del sustrato que se considere, ya que el
sitio activo posee dos diferentes lugares para la unión con el sustrato en el mismo
sitio activo, uno para cada sustrato. Por ejemplo, un inhibidor puede competir con
el sustrato A por el primer sitio de unión, pero ser un inhibidor no competitivo con
respecto al sustrato B en el segundo sitio de unión.
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Referencias Bibliográficas:

- C.K. Mathews, K.E. Van Holde y K.G. Ahern (2002) Bioquímica. 3ª

Edición. Pearson Educación.
- J.M. Berg, J.L. Tymoczko y L. Stryer.(2003) Bioquímica. 5ª Edición.
Editorial Reverté
- A. Lehninger, 2001. Principios de Bioquímica. 3 ed. Editorial Omega.

(Consultados el 28 de Mayo del 2017)