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b) Se consiguen preparaciones de
Entender la eficacia alta calidad en las que se pueden
de un microcultivo observar perfectamente las
estructuras de diferenciación
para identificar y
clasificar un hongo c) Identificación por caracteres
filamentoso morfológicos mediante la
observación de las estructuras de los
hongos (hifas y esporas o conidios)
Identificación de hongos
Morfología colonial
Morfología microscópica
Microcultivo
Pruebas metabólicas (levaduras)
Composición de la pared celular
Nutrición
Reproducción
Morfología microscópica
Hifas
Esporas
asexuadas/
sexuadas
Organización
celular
HONGOS FILAMENTOSOS
Gota
Disgregación pendiente
Lamina
Microcultivo Cultivo desecada
Montaje
Cinta Emparedado
adhesiva
Montaje en fresco
(disgregación)
Ventajas Desventajas
Ventajas Desventajas
Limpiar. Círculo
de vaselina en el
cubre
Se inocula una
asada del hongo
en una gota de
azul de lactofenol
Colocar porta
encima del cubre
Invertir la
preparación y
observarla en el
microscopio.
FUNDAMENTO
La gota permite multitud de planos de enfoque lo que facilita la
observación de estructuras y movilidad de microorganismos.
Exenta de las fluctuaciones provocadas por las corrientes líquidas
que se generan entre porta y cubre
Ventajas Desventajas
Extracto de malta
Agar borelli
Agar Saboraud
Agar Czapek
Desarrollo de la
técnica
1
Colocar un trozo
circular de papel filtro
sobre el fondo de una
caja de Petri estéril.
Colocar un par de
varillas (o triángulo)
de vidrio dentro de la
caja y encima de este
dispositivo colocar un
portaobjetos.
2
En condiciones
estériles, cortar un
cubo (o cilíndro) de
agar PDA o Saboraud
(apróx. 1.5 cm
diámetro) y colocarlo
sobre la superficie del
portaobjetos.
3
Inocular (a partir de
los hongos aislados)
en 4 ejes del borde
del medio de cultivo.
Calentar un cubreobjetos
con suavidad pasándolo
rápidamente por una
flama y colocarlo de
inmediato sobre la
superficie del agar (con
el fin de fundir
parcialmente la
superficie del agar y
obtener un sello
hermético.
Agregar a la caja
Petri suficiente
agua glicerinada
estéril 5% para
saturar el papel
filtro.(con el fin de
humectar la
preparación y
evitar desecación).
Cerrar la caja
Petri e incubar
a temperatura
ambiente (o a
30°C) de 3 a 7
días.
Revisar diariamente el
crecimiento del
hongo. Si se decide
que esta completa la
maduración del
cultivo, agregar de 1 a
3 mL de formaldehído
al 10% o fenol, 30 min.
antes de la
manipulación del
microcultivo.
8
Ventajas Desventajas
Ventajas Desventajas
Ventajas Desventajas
Métula
Conidioforo
Fialide
Descripción
Conidias
Conidióforos rectos, hialinos,
con fialides que nacen sobre
métulas. Conidias en cadena,
esféricas, hialinas.
Hongos filamentosos
Aspergillus sp
Hongo filamentoso cosmopolita aislado de la naturaleza comúnmente aislado del
suelo, restos vegetales y el aire ambiental.
Descripción
Conidióforo
Conidióforos
hialinos.
Conidias
Conidias equinuladas a
esféricas.
Hongos filamentosos
Alternaria sp
Hongo filamentoso dematiáceo, aislado de suelos, plantas, comida y aire.
Conidias
Hifas
Descripción
Hifas septadas dematiáceas.
Conidióforos Conidióforos con una apariencia
en zigzag. Conidias cafés con
septos transversales y
Hongos filamentosos longitudinales.
Fusarium sp
Hongo filamentoso aislado de plantas y suelo
Macroconidias
Hifas
Descripción
Bioquímica Clínica
•Diagnostico de hongos patógenos.
•Permite la identificación del agente etiológico
•Son útiles en la selección y monitoreo de la terapia antifúngica, seguimiento
evolutivo y para confirmar la curación.
Farmacia hospitalaria
•Monitoreo de preparaciones parenterales.
•Debido a que son preparaciones estériles, es necesario monitorear la proliferación
microbiológica que afectaría directamente al producto y la salud del paciente.
•Tratamiento de enfermedades causadas por hongos.
Metodología para realizar Microcultivo
Colocar un Colocar 5 mL de
Trozo circular 1 x 0.3
portaobjetos con las glicerina-agua (sin
cm de agar PDA o
pinzas de disección rebasar el triángulo de
Sabouraud
(estériles) varilla de vidrio)
Colocar un triángulo de
varilla de vidrio y
Inocular los cuatro Incubar a T.
portaobjetos con el trozo
costados del agar con ambiente o a 30°C
de agar en base de caja
el hongo elegido de 3 a 7 días.
Petri
Metodología para realizar Microcultivo (continuación)
Al portaobjetos sin
Observar ambas
agar colocar 1-2 gotas
Al cultivo maduro preparaciones a
de azul de algodón y
agregar 1 mL de 10x y 40x
poner cubreobjetos
formaldehido
(media hora antes)