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PRÁCTICA 2
Introducción
Entre los requisitos para el trabajo con microorganismos están los últimos en la técnica
aséptica. Dada la ubicación de los microorganismos que la existencia de endosporas
termorresistentes se han desarrollado varios procesos de esterilización, o sea de eliminación
o destrucción de todo organismo vivo.
Así todo objeto esterilizado está libre de organismos viables capaces de reproducirse. La
destrucción de endosporas termorresistentes se realiza a temperaturas mayores de 100°C,
15 lb (1.2 atm) de presión por 1 hora. Temperaturas mayores pueden ocasionar destrucción
de los componentes de los medios de cultivo. Soluciones con antibióticos o vitaminas
usualmente se esterilizan por filtración de membranas. Algunos medios requieren la
esterilización por separado de fuentes de carbono, para evitar caramelización del medio y
reacciones que inhiban el crecimiento de los microorganismos.
Objetivo: Adquirir destrezas y conocer los fundamentos del uso, preparación y aplicación
de medios de cultivo y esterilizarlos.
Materiales
Equipos:
Autoclave. Estufa o plancha con agitador magnético
Balanza.
Procedimiento
Prepare 225 ml de agar nutritivo o Tripticasa Soya Agar (TSA), a partir de medio
deshidratado.
Todos grupos pueden realizar los cálculos para la preparación de los diferentes volúmenes
de medios, teniendo en cuenta las recomendaciones de la casa comercial.
Si el medio no se esteriliza se aplican solo los puntos 1-7, con los componentes apropiados,
pero si el agar es SS, Ud. Que haría?
Agar DNAsa
Agar Palcam
Agar PDA
Agar TSA 1/10
Agar TSA 1/50
Agar PDA 1/3
Agar SRS
Consultar:
1. http://www.unavarra.es/genmic/micalm/manual%20practicas%20micalimentos.pdf
Cuando el medio de cultivo no es de casa comercial se puede preparar en el laboratorio, por
ejemplo: Agar papa dextrosa agar (PDA) 170 ml, a partir de un extracto o infusión de papa.
Fórmula para 1 litro.
1. Pele papas y pese 200 g. Coloque a hervir por 15 minutos en 1 litro de agua. Cuando
éste tibio mida el volumen en el cilindro graduado y adición de agua hasta completar 1
litro.
2. Adicione glucosa al 1% y agar al 1 .5%.
3. Mezcla hasta homogenizar. Hierva el medio.
4. Sirva 8 tubos de ensayo (6 ml cada uno) tápelos y colóquelos en la canastilla o en
recipiente plástico (esterilizable). Éstos servirán para preparar los tubos con medio
inclinado o en una cuña, después de la esterilización en la autoclave.
5. Ponga el tapón de gasa y algodón al resto del medio del Erlenmeyer.
6. Coloque el material así preparado en la autoclave.
7. Esterilice por 15 minutos a 121°C 15 {lb de presión.
8. Una vez esterilizados a los medios saque los recipientes y deje enfriar hasta unos 45-
50°C (el calor del recipiente debe ser tolerable al tacto).
9. Sirva las cajas de Petri. Se abren estas cerca del mechero a unos 10 cm de distancia
y vierta el medio (quede con un espesor menor de 2 mm, aprox. 15-20 ml).
10. Los tubos con el medio fundido se inclinan sobre la barra de vidrio procurando que quede
un fondo de 1 cm y que la superficie inclinada fue extendido no quede cerca del tapón.
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GUIA LABORATORIO MICROBIOLOLOGÍA – Código: GLMIC
PROGRAMA BIOLOGÍA – F. CIENCIAS
Versión: 1
Cuestionario
Bibliografía
- Arenas, R. 2000 Micología médica ilustrada. Mc Graw Hill, México.
- French, E. and Hebert, T. 1982 Métodos de investigación fitopatológica, Instituto
Interamericano de Cooperación para la agricultura (IICA) San José.
- Helms, R., Helms, C., Kosinski, R, and Cummings, J. 1998 ALL AMERICAN STEREO
AUTOCLAVE 25X. Instrucciones and supplies. Biology in the laboratory, 3ª edition,
W.H. Freeman and company.
- Madigan, M., Martinko, J. and Parker, J 1997 Brock biology of microorganisms 8a
edición. Prentice Hall, New Jersey.
- Microbiology Manual 2002 Darmstadt, Merk pp. 187, 207.
- http: //www.cecyt15.ipn.mx/depots/tecno/tcl/microcli/practicac%209.htm
Introducción histórica
Se puede decir que el impresionante trabajo de investigación y estudia las bacterias,
realizado principalmente por Pasteur y Koch, dió como resultado el nacimiento de la
microbiología.
Fue en 1876 cuando Koch fue capaz de propagar una bacteria patógena (Bacillus anthracis)
en cultivo puro, fuera del cuerpo que la portada; en 1881, utilizando el medio líquido, los
solidificó con gelatina y desarrolló los métodos de rayado y siembra en placa para
aislamiento de bacterias. El siguiente paso lo dio Hesse, en 1891, al utilizar como agente
solicitante un producto denominado agar, extraído de las algas rojas. El agar era muy
superior a la gelatina, ya que era resistente a la digestión microbiana y a la licuefacción.
Se enriqueció la composición de los cultivos solicitados utilizando extractos de carne e
infusiones, a fin de equipararlos con el tejido infectado portador. Éste decenio es considerado
por el número y la brillantez de los descubrimientos realizados, como uno de los más
brillantes de la medicina.
El aislamiento en cultivo puro constituye aún hoy el fundamento de la práctica en
microbiología e investigación.
Hoy el día, las técnicas de cultivo, para aislar y de crecimiento de microorganismos, se han
desarrollado notablemente con requisitos nutricionales específicos.
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GUIA LABORATORIO MICROBIOLOLOGÍA – Código: GLMIC
PROGRAMA BIOLOGÍA – F. CIENCIAS
Versión: 1
Medio de cultivo
2. Según su composición
- Biológicos o Naturales. -Sintéticos. -Semisintéticos.
a) Biológicos o Naturales: en su composición aparecen sustancias orgánicas.
b) Sintéticos: en su composición aparecen sustancias químicas definidas.
c) Semisintéticos: en su composición aparecen moléculas naturales hidrolizadas
a) Medios enriquecidos: suele ser medios con nutriente simple que presentan
enriquecedores, tales como la sangre de carnero, la sangre de Caballo, etc. son
medios destinados a desarrollar microorganismos muy exigentes.
b) Medios diferenciales o de aislamiento: contienen colorantes, azúcares e
indicadores, concebidos para provocar una respuesta bioquímica conocida,
generalmente el color.
c) Medios selectivos e inhibidores: además de contar en su composición con los
mismos productos que los medios diferenciales, presentan una serie de agentes que
sirven para inhibir la flora acompañante de la muestra a estudiar, y aislar, de ésta
forma el microorganismo que se busca.
d) Medios de transporte y mantenimiento: se utilizan en la recogida, transporte y
conservación de muestras microbiológicas. Esencialmente, son medios no
nutrientes, semisólidos muy reductores, que inhiben las reacciones enzimáticas
autodestructivas dentro de las células y evitan los efectos letales de la oxidación.
Son medios que no deben potenciar el crecimiento lujurioso.
e) Medios de uso general: son medios que soportan el crecimiento de una amplia
variedad de microorganismos fastidiosos, sin exigencias nutritivas especiales.
f) Medios para filtros de membrana: las técnicas de filtración de membrana se han
impuesto en microbiología, por las ventajas que presentan. Son técnicas que
permiten el examen de grandes volúmenes de líquido con una población muy baja
de microorganismos, la separación de los microorganismos del medio de cultivo e
incluso su cambio de un medio de cultivo a otro sin interrumpir su ciclo de
crecimiento.
a. Medios Líquidos
Ejercicio