PRACTICA Nº 2

Impregnación Argéntica Nucleolar

Fundamento
Esta técnica sirve para distinguir los nucléolos dentro del núcleo celular
por una alta impregnación de plata positiva que les da una tonalidad pardo
oscura hasta casi negra mientras que el núcleo toma un color ocre débil y más
leve aún es la tonalidad del citoplasma.

Objetivos
- Determinar las bases teóricas de la tinción de la impregnación argéntica
nucleolar.
- Identificar los distintos estadios nucleolares y su morfología en células de Allium
cepa.
- Adquirir destreza en la preparación de láminas para observación microscópica.

Materiales y reactivos
- Raíces de Allium cepa - Solución formol 10% -hidroquinona 1%
(1:1)
- Hojas de bisturí o gillete - Agua destilada
- Guantes - Nitrato de plata al 2%
- Tapabocas - Estufa a 70º C
- Láminas y laminillas - Ácido acético 50%
- Goteros
- Papel aluminio
- Gradilla

Metodología
- Cortar los ápices de las raíces de Allium cepa.
- Fijar los ápices por 1-2 horas a temperatura ambiente en la solución (1:1)
de formol 10% -hidroquinona 1%.
- Lavar los ápices en agua destilada 3 veces durante 10 minutos cada vez
Introducción
Para estudiar las células e identificar sus partes, uno de los métodos son
las tinciones, que se utilizan para dar una tonalidad y aislar partes específicas de
los microorganismos. (Davidson, 1980). En esta práctica se utilizó dicho método
para la diferenciación del nucléolo dentro del núcleo celular, en célula vegetal
específicamente Allium cepa, basándose en la impregnación argentica.

El nucléolo es la región del núcleo donde se sintetizan los componentes

de RNA ribosómico, se encuentra dentro del núcleo, por lo general redondo o de
forma irregular; 2 a 4 micrómetro de tamaño, su apariencia varia con la actividad
celular, más grande cuando la célula está involucrada en forma activa de síntesis
de proteína. (Rodak ,2004).

La impregnación argentica se fundamenta en la reducción del nitrato de

plata hasta obtener plata metálica. Consiste en tratar inicialmente el tejido con
una solución de una sal reducible de plata y después con un agente reductor, el
cual actúa de forma análoga al revelador utilizado para negativos fotográficos,
pues convierte la sal de plata en plata metálica, con el resultado de que los
componentes captan la sal y se tornan oscuro. (Bermejo, 2006).
Objetivos
- Determinar las bases teóricas de la tinción de la impregnación argéntica
nucleolar.
- Identificar los distintos estadios nucleolares y su morfología en células de Allium
cepa.
- Adquirir destreza en la preparación de láminas para observación microscópica
Materiales y reactivos
- Raíces de Allium cepa - Solución formol 10% -hidroquinona 1%
(1:1)
- Hojas de bisturí o gillete - Agua destilada
- Guantes - Nitrato de plata al 2%
- Tapabocas - Estufa a 70º C
- Láminas y laminillas - Ácido acético 50%
- Goteros
- Papel aluminio
- Gradilla

Metodología
- Se cortaron los ápices de las raíces de Allium cepa.
- Se fijaron los ápices por 1-2 horas a temperatura ambiente en la solución (1:1)
de formol 10% -hidroquinona 1%.
- Se lavaron los ápices en agua destilada 3 veces durante 10 minutos cada vez.
- Se depositó los ápices en una solución de nitrato de plata al 2% contenida
dentro de un tubo de vidrio envuelto en papel aluminio.
- Se colocó el tubo en una gradilla de metal y se dejó en la estufa a 70º C durante
10-15 horas en total oscuridad.
- Transcurridas las 10-15 horas de incubación, se lavaron los ápices en agua
destilada 3 veces durante 10 minutos cada vez.
- Se fijaron los ápices por 1-2 horas a temperatura ambiente en una nueva
solución (1:1) de formol 10% -hidroquinona 1%.
- Se pusieron los ápices en una lámina y se agregó una gota de ácido acético al
50%, realizar el squash.
- Se cubrió el preparado con la laminilla y se llevó a observación.
- Se dibujaron y señalaron los distintos estadios nucleolares.
Descripción de resultados y Discusión
Figura 1: Célula vegetal Allium cepa con 1 nucléolo
Se observó con ayuda del microscopio óptico, con un aumento de 400x, al
meristemo apicular de la célula vegetal Allium cepa, diferenciado la pared
celular muy visible, al citoplasma con una apariencia rugosa, el núcleo con una
forma circular, los contornos bien marcados rodeando al nucléolo, un nucléolo
presentando una tonalidad oscura en forma ovalada.
Figura 2: Célula vegetal Allium cepa con 2 nucléolos
Se observó con ayuda del microscopio óptico, con un aumento de 400x, al
meristemo apicular de la célula vegetal Allium cepa, identificándose
nuevamente la pared celular con los contornos visibles, al citoplasma rugoso, el
núcleo de forma circular rodeando a los nucléolos, los mismos presentaron una
tonalidad oscura, con forma ovalada.
Figura 3: Célula vegetal Allium cepa con 3 nucléolos
Se observó con ayuda del microscopio óptico, con un aumento de 400x, al
meristemo apicular de la célula vegetal Allium cepa, identificándose la pared
celular de la misma manera, tal como el citoplasma y el núcleo, los nucléolos con
la tonalidad oscura y la forma ovalada.
Figura 4: Célula vegetal Allium cepa con 4 nucléolos
Se observó con ayuda del microscopio óptico, con un aumento de 400x, al
meristemo apicular de la célula vegetal Allium cepa, la pared celular bien
definida, el citoplasma rugoso, el núcleo muy visible de forma circular, los
nucléolos presentaron tonalidad oscura con forma ovalada.
Figura 5: Célula vegetal Allium cepa con nucléolo amorfo
Se observó con ayuda del microscopio óptico, con un aumento de 400x, al
meristemo apicular de la célula vegetal Allium cepa, la pared celular muy visible,
el citoplasma rugoso nuevamente, el núcleo de forma circular rodeando al
nucléolo, el mismo se presentó sin una forma definida, con la tonalidad oscura.
Discusión
Tras describir los resultados obtenidos con la aplicación del método de
impregnación argéntica en células vegetales de Allium cepa. Los mismos
presentaron una tonalidad en el nucleolo, las distintas muestras presentaron la
misma tonalidad, debido al tiempo que estuvieron expuestas a la reacción.
Conclusión
Con esta práctica se logró determinar con la fundamentación de la bases
teóricas, la impregnación argéntica nucleolar, se observó los distintos estadios
nucleolares que presenta y su morfología en células de allium cepa, además de la
destreza en la preparación para la observación microscópica.