“Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional”

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE HIGIENE Y SEGURIDAD
INDUSTRIAL

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO, CLASIFICACION DE MEDIOS.

SEGUNDO LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL- BO-112

ESPINOZA CALSINA FRANCO NERI -- 20171388H S2

OBREGÓN OBREGÓN MIGUEL ÁNGEL --
INGA ESPINOZA JESUS ANGELO – 20172119K S3

DOCENTE: MSc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

INDICE
I. RESUMEN
II. INTRODUCCION
III. OBJETIVOS
IV. MARCO TEÓRICO
V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
a) materiales
b) metodología
VI. RESULTADOS
VII. DISCUSION DE RESULTADOS
VIII. CONCLUSIONES
IX. RECOMENDACIONES
X. FUENTES DE INFORMACIÓN
XI. ANEXOS
XII. APENDICE
RESUMEN

Un microorganismo se puede sembrar en un medio líquido o en la superficie de un

medio sólido de agar, además se debe tener en cuenta que los microorganismos se
pueden estudiar de un modo fácil y rápido, esto es debido a que su distribución es
generalmente muy amplia, su tamaño es microscópico, su ciclo vital es relativamente
corto y muy simple en comparación con el de organismos más desarrollados y
tienden tanto a vivir formando colonias como a generar una abundante descendencia
y justamente por estas características es que se deben cultivar los microorganismos,
pero no solo basta con cultivarlos, anteriormente se debe hacer un proceso muy
importante en el estudio de algún tipo de organismo, ese proceso vendría a ser la
esterilización, para eliminar aquellos organismos de distinta clase; y por otro lado se
tiene que brindar una buena nutrición a dicho microorganismo por estudiar, para que
de esta manera tenga un correcto crecimiento y multiplicación

INTRODUCCIÓN

Para esta ocasión, en el laboratorio de microbiología se trabaja con varios

microorganismos de distintos tipos; los cuales para su crecimiento necesitan
nutrientes, que provienen de los medios de cultivo, Para que las bacterias crezcan
adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones
como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuadas, así
como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener
los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas requieren
nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo
humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos
de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. Dentro de los diferentes
medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como
hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Para el presente de
laboratorio de microbiologia se trabaja con material y soluciones estériles para evitar
la contaminación de la muestra que se tiene interés, así se evitara cualquier tipo de
errores al momento de desarrollas los resultados, conclusiones, etc.; errores por
ejemplo: características de ciertos microorganismos que no se pensaba analizar
(intrusos).
OBJETIVOS

- Reconocer los distintos tipos que existen de medios de cultivos para el

crecimiento de los microorganismos, para luego poder aplicar las distintas
técnicas y preparación de cultivos y así obtener un correcto desarrollo de los
microorganismos

- Aprender a preparar los distintos medios de cultivo, ya sean sólidos o

líquidos; siguiendo las instrucciones del encargado del laboratorio, para así
evitar las mayores posibles equivocaciones

- Aprender a esterilizar los materiales donde serán depositadas los

microorganismos, para evitar algún tipo de contaminación.

- Clasificar de manera ordenada los diferentes medios de cultivo, para evitar

confusiones, en pocas palabras saber cuál es cual.

- Desarrollar en los estudiantes de laboratorio competencias en los puntos

clave que deben tenerse en cuenta antes, durante y después de preparar los
medios de cultivo

MARCO TEÓRICO

1. Medios de cultivo

Son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones adecuadas y en

condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los microorganismos.
Son esenciales en el Laboratorio de Microbiología por lo que un control en su
fabricación, preparación, conservación y uso, asegura la exactitud,
confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos.

2. Clasificación

De acuerdo a la naturaleza de sus constituyentes

- Medios naturales o complejos: constituidos por sustancias complejas de

origen animal o vegetal, las que son usualmente complementadas por la
adición de minerales y otras sustancias. En ellos no se conocen todos los
componentes, ni las cantidades exactas presentes de cada uno de ellos.

- Medios definidos o sintéticos: son los medios que tienen una composición
química definida cualitativamente y cuantitativamente. Generalmente se usan
en trabajos de investigación.
 De acuerdo al uso del medio de cultivo

- Medios de enriquecimiento: son medios líquidos que favorecen el crecimiento

de un tipo de microorganismo en particular. Permiten aumentar el número de
microorganismos de ese tipo. Usualmente contienen una o más sustancias
inhibidoras del crecimiento de los microorganismos con excepción de los que
se quieren cultivar.

- Medios selectivos: son parecidos a los de enriquecimiento, se diferencian por

ser medios sólidos y están diseñados para el aislamiento de microorganismos
específicos.

- Medios diferenciales: son medios que contienen indicadores de productos

derivados de la actividad microbiana de los microorganismos. No contienen
ningún tipo de sustancia con actividad antimicrobiana. Permiten revelar
características fisiológicas de los microorganismos.

Atendiendo a su estado físico

Líquidos
Semisólidos
Sólidos

3. Preparación
Los medios de cultivo se pueden preparar en el laboratorio a partir de cada uno de
sus constituyentes básicos, o por simple rehidratación de productos asequibles
comercialmente (medios de cultivo deshidratados). Generalmente se prefiere el uso
de los medios de cultivo deshidratados porque, además de simplificar el trabajo, con
ellos se tiene mayor probabilidad de obtener resultados reproducibles.

4. Condiciones generales para el cultivo

Disponibilidad de nutrientes adecuados

Un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener,
como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos
casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del
crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer
de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan
lugar.
Consistencia adecuada del medio
Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo
productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en
estado semisólido o sólido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran
inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a
temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen
la capacidad de licuarla.
Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y
comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está
ampliamente extendido en el laboratorio.

Presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases

Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno
normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero
los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en
una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos
microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias
(tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un
metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones.
Condiciones adecuadas de humedad
Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es
imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los
cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las
estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que
se deseque el medio.

Luz ambiental
La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en
presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los
microorganismos fotosintéticos.

PH
La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los
microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe
olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metabólicos normales.
Temperatura
Los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43
°C. Otros como los psicrófilos crecen a 0 °C y los temófilos a 80 °C o incluso a
temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos
humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37 °C, y
los saprofitos tienen rangos más amplios.

Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos
medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que
utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

a. Materiales Medios de cultivos deshidratados

✓ Probetas caldo nutritivo

✓ Erlenmeyer Caldo BHI

✓ Tubo de ensayo Agar plate count

✓ Espátulas Agua peptonada

✓ Algodón Equipos
✓ Alcohol 70°

✓ Papel Kraft Refrigeradora

✓ Mechero bunsen Autoclave

✓ Encendedor Balanza analítica

✓ Guantes asbesto Hornilla eléctrica

✓ Bombillas

✓ Pipetas bacteriológicas

✓ Rejilla

✓ Pisetas

✓ Pabilos
 b. Metodologia

Preparación de medios de cultivos

AGAR PLATE COUNT (22.5 gr/lt)

1. Leer el marbete del medio de cultivo deshidratado.
2. Con la ayuda de la espátula pesar 6.75 gr de APC e introducirlo en un
Erlenmeyer que contiene 300 ml de agua destilada para diluirlo.
3. Tapar el matraz con algodón y calentarlo en la hornilla eléctrica para
homogenizar la mezcla, en el proceso de calentamiento agitar repetidamente
y retirar de la hornilla cuando empiece a hervir, evitando que el cultivo de
derrame.
4. Llegado a la dilución total dejar enfriar para luego taparlo con papel kraft
ajustándolo con pabilo. Etiquetar el matraz.
5. Llevar a la autoclave (121° por15’).
6. Cuando llegue a la temperatura ambiente colocarlo a la refrigeradora (4°).

AGUA PEPTONADA (0.1 gr/lt)

1. Pesar 0.15gr de peptona e introducirlo en el matraz que contiene 150ml de

agua destilada para disolverlo.
2. Repartir el medio: 90ml en matraz de 250ml. -9ml en 5 tubos de ensayo.
3. Colocar tapones a los tubos y agruparlos con papel kraft, amararlo con el
pabilo.
4. Tapar el matraz con algodón y papel kraft y amararlo con el pabilo.
5. Todo el material se coloca en una canastilla y lo llevamos a la autoclave 121°
por 15’)
6. Dejar enfriar a temperatura ambiente para luego colocarlo a la refrigeradora
(4°).
DISCUSION DE RESULTADOS

 Respecto al fundamento teórico de la preparación del medio APC nos dio el

resultado esperado ya que tuvo una resistencia liquida, de color café claro. A
demás este al salir del autoclave se solidifico a temperatura ambiente.

 Con respecto al fundamento teórico del Agua Peptonada, este debio

presentar una consistencia liquida en todo el experimento, esto mismo se
observo en el laboratorio

CONCLUSIONES

- El buen estado de los materiales utilizados tales como: bureta y pera de

bureta ayudaron al experimento a que se realizara de manera
homogeneizada.
- El papel Kraft ayudo a poder separar las muestras que realizamos.
- El Agar PC salió de una forma consistente y amarillente, lo que afirma el
buen trabajo que realizamos.

RECOMENDACIONES
 Tener cuidado con el tiempo que se expone la preparación del cultivo al calor,
ya que este mismo puede rebalsar del matraz, y así malograr la muestra
 Usar y tapar estos medios, ya que muchos de ellos son compuestos
higroscópicos, es decir absorben la humedad del medio ambiente
 Limpiar los compuestos, ya que estas pueden contaminar las muestras.
Diagrama de flujo

Preparación de medios de cultivo

Agar plate count Medio de cultivo Agua peptonada

0.15gr
6.75gr Pesar

300ml Diluirlo 150ml

Matraz

Exponerlo

Repartir 5 tubos
Hornilla eléctrica ensayo

Envolver papel kraft y

amararlo

Auto clave

Refrigerador