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UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Perú, Decana de América)

DEPARTAMENTO DE ESTUDIOS GENERALES

GUÍA DE PRÁCTICAS

DE

LABORATORIO DE BIOLOGÍA PARA INGENIERIAS

2018-I
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, Decana de América)
DEPARTAMENTO DE ESTUDIOS GENERALES-2018

CONTENIDO
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Introducción 3

Instrucciones Generales 4

Práctica Nº 1: Componentes Químicos de la Materia viva: Carbohidratos 7

Práctica Nº 2: Componentes Químicos de la Materia viva: Proteínas y Lípidos 11

Práctica Nº 3: Microscopía 14

Práctica Nº 4: Célula Procariota y Eucariota 19

Práctica Nº 5: Permeabilidad Celular 22

Práctica Nº 6: Demostración indirecta de las leyes de Mendel 24

Bibliografía 28

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INTRODUCCIÓN
La presente guía de prácticas del curso de biología tiene como objetivo dar a conocer al estudiante
aspectos básicos sobre los seres vivos, guiando al estudiante por medio de la experimentación en
el laboratorio.

En la actualidad se hace necesario conocer a los seres vivos y su funcionamiento no solo desde el
punto de vista teórico, sino práctico.

Las prácticas que se presentan permitirán al estudiante tener una visión amplia y panorámica de
los temas más importantes. Se incluye una práctica sobre microscopía, y su uso como herramienta
que permitirá apreciar a las células y los organismos, que no pueden percibirse con el ojo humano.
Se hará un reconocimiento a los componentes moleculares del cual está formada la materia viva
como son carbohidratos, proteínas y lípidos.

Se incluye el estudio de las células procariota de bacterias y eucariota como la célula vegetal y
animal tanto en su estructura como en su funcionamiento.

El avance de la Biología y sus campos relacionados en la actualidad depende mucho del


conocimiento básico que se tratará en esta guía.

Es importante destacar que al final de cada tópico analizado se encuentra un cuestionario que
comprende preguntas que ayudarán al estudiante a cimentar sus conocimientos ya que su solución
requiere de una consulta de obras en Biología y literatura especializada que lo complementen y
permitirá al estudiante un mejor conocimiento y dominio de la Biología.

Este trabajo es el esfuerzo de los profesores involucrados en su realización, para que el estudiante
pueda tener a la mano una herramienta de trabajo útil no sólo para su desenvolvimiento en el
laboratorio de Biología, sino que le sirva de base para otras asignaturas como bioquímica,
microbiología general, microbiología oral, embriología y otras ramas afines a la Biología.

Los autores

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INSTRUCCIONES GENERALES PARA EL ESTUDIANTE

1. Es importante que el estudiante tome conciencia que el laboratorio es un lugar de trabajo; su


atención y comportamiento serán observados por el o los profesores encargados de la marcha
del laboratorio, quienes están para guiarlo y responder a sus dudas.
2. Antes de ingresar al laboratorio el alumno deberá haber leído con suficiente anticipación el
procedimiento experimental que ha de realizar. Sin embargo a manera de repaso, los profesores
harán una exposición resumida del experimento que deberá efectuar antes de iniciar la práctica.
Pregunte cuando no entienda el método o la finalidad de algún experimento.
3. El uso del mandil es obligatorio, así también lentes y guantes, además de una franela y esponja.
4. Utilizar camisas o blusas que cubran el torso, pantalón largo, zapatos cerrados a fin de evitar el
contacto con la piel de las muestras y/o agentes químicos a utilizar.
5. Cada grupo de práctica se responsabilizará por su material y su zona de trabajo, por eso es
importante su revisión antes de su uso.
6. Antes de utilizar un reactivo hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se
necesita y saber de los riegos de su manipulación.
7 Nunca pipetear líquidos con la boca, sino usando bombillas para ese fin.
8. No devolver nunca a los frascos con reactivos los sobrantes, siempre consultar con el profesor.
9. Llevar a cabo los procedimientos en forma ordenada evitando el riesgo de producir salpicaduras,
aerosoles o derrames de productos tóxicos o sustancias biológicas infectantes.
10. Jamás tocar con la mano y menos llevar a la boca los productos químicos y/o biológicos.
11. No use más reactivos de los que se indique. Los reactivos son caros, y lo más importante es
que por exceso de estos puede dar resultados falsos. No olvidar que los reactivos que usa
sirven también para sus otros compañeros que llevan el curso.
12. No deseche el producto obtenido hasta que esté seguro de que no lo necesita. Eche los
desperdicios sólidos en los depósitos destinados para tal fin. Los desperdicios líquidos
desecharlos en el lavadero. Cuando estos sean ácidos de preferencia neutralizarlos y dejar
correr el agua en el lavadero a fin de diluirlos y de esta forma evitar la corrosión de las tuberías.
13. Use siempre materiales limpios, secos y estériles.
14. Los productos inflamables (alcohol, éter, u otros solventes, etc.) deben mantenerse alejados de
las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos con estas sustancias, se hará al baño
maría, nunca directamente a la llama.
15. Racionalice el uso de los reactivos, debido a que ellos son costosos.
16. Cuando caliente una sustancia en un tubo de ensayo, tenga mucho cuidado de no dirigir la boca
del tubo a su vecino, ni así mismo. Utilizar siempre un baño maría.
17. Todos los materiales, equipos y demás objetos utilizados, deben manejarse con cuidado
evitando golpearlos, dejarlos caer o forzando su mecanismo.
18. Los residuos biológicos deben ser esterilizados previamente y disponerse en bolsas para ser
desechados a la basura.
19. Cuide el microscopio, evitando que los colorantes o reactivos manchen sus objetivos o partes
de él.
20. El orden y la limpieza deben estar presente en todas las experiencias de laboratorio. Al terminar
cada práctica los alumnos procederán a limpiar el material utilizado además de su mesa de
trabajo al final de su práctica.
21. Dé cuenta inmediatamente al profesor de cualquier accidente tal como cortaduras, que maduras
o derramamiento de material biológico o químico. Tomé las precauciones para evitar los
accidentes y/o contaminación.
22. Es importante que los alumnos tengan un cuaderno para anotar todos sus datos y observaciones
y así poder redactar el informe sobre la práctica respectiva.
El examen de laboratorio se referirá no sólo a la información proporcionada en este manual sino
también a sus propias observaciones y deducciones.
23. Resuelva siempre el cuestionario que hay al final de cada práctica, e incluya la bibliografía que
ha consultado para su desarrollo.
24. Está terminantemente prohibido fumar, comer, tomar y utilizar celulares en el laboratorio.
25. Lo más importante de todo es que usted sepa que los experimentos que se realizan no son una
repetición memorizada de la guía, éstas no tienen sino por objeto darle las indicaciones
(guiarlos) importantes para cada experiencia. El alumno deberá tener un entendimiento
adecuado del fundamento de la experiencia que está realizando.

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26. Antes de retirarse de laboratorio los alumnos deben lavarse las manos con jabón carbólico o
desinfectarse con alcohol y dejar todo en orden.
27. La presentación del informe de la práctica realizada debe realizarse en la clase siguiente y es
necesario que sepan los alumnos que la inasistencia a ella lo imposibilita a ser calificado en
dicha práctica ya que la asistencia a las mismas tiene carácter obligatorio, solo se permitirá su
calificación con la presentación de la justificación debida dada por la entidad competente.

FORMATO DE LOS INFORMES


1. Carátula
(Universidad, Departamento Académico, Curso, Práctica Nº, Título de Práctica, Horario,
Profesor, Fecha de Realización y Fecha de entrega del informe, Integrantes.)
2. Resumen
3. Índice
4. Introducción
5. Parte Teórica (NO MÁS DE 3 HOJAS)
6. Detalles experimentales.
7. Reacciones Químicas (si fuera el caso)
8. Cálculos Experimentales y Resultados.
9. Discusión de Resultados.
10. Conclusiones.
11. Recomendaciones.
12. Apéndice (Cuestionarios, Diagramas, Cuadros, Gráficas, etc.).
13. Bibliografía
➢ Texto: autores) (apellidos, nombres), título del texto, editorial, edición y año, páginas.
➢ Revista: a u t o re s ( apellidos, n o m b r e s ), n o m b r e re vist a , vo l u m e n , número,
año, páginas.
➢ Internet: indicar página Web completa y fecha de acceso.

DE LAS PROHIBICIONES:

1. Está prohibido el uso de la boca para succionar y llenar las pipetas de trabajo.
2. Está prohibido comer, beber o fumar dentro de los laboratorios.
3. Está prohibido trabajar dentro del laboratorio sin mandil de trabajo apropiado.
4. Está prohibido el uso de pulseras o joyas dentro del laboratorio, porque estas
pueden ser causa de accidentes sobre todo si se trabaja cerca de llamas ó maquinas en
funcionamiento.
5. Es preferible no utilizar cosméticos cuando se trabaje con sustancias químicas.
6. No utilice lentes de contacto, porque amplifican los riesgos oculares.
7. Nunca maneje una sustancia química que no haya podido identificar.

DE LOS DERRAMES:

1. Si se produce un pequeño derrame de un compuesto químico, avise al profesor y en lo


posible evite que se extienda por la mesa o caiga al piso.
2. Retire los materiales, reactivos y equipos que se encuentren cerca.
3. Use lentes de seguridad, guantes y en lo posible mascarillas de respiración de
acuerdo al tipo de compuesto.
4. Para el caso de derrame pequeño de líquidos:
a) Confine el derrame en un área pequeña.
b) Si se trata de un ácido neutralice con soda o carbonatos.
c) Si se trata de una base neutralice con sulfato ácido de sodio.
d) Si se trata de otros compuestos use material no reactivo como arena seca o
arcilla.
5. Para el caso de derrames mayores de líquidos, avise al profesor y si está preparado
realice las siguientes acciones:
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a) Si se trata de ácido o bases, use grandes cantidades de agua; si es que el agua no


causa un daño mayor.
b) Si se trata de líquidos con vapores no tóxicos y miscibles en agua, limpie con
absorbente de algodón (toalla), posteriormente lave el absorbente con abundante agua.
c) Si se trata de líquidos con vapores tóxicos: Protegido con una mascarilla adecuada,
absorba el líquido con un absorbente de algodón (toalla), traslade el absorbente
dentro de un recipiente hacia una campana extractora, donde lo transferirá a un
recipiente de residuos líquidos peligrosos.
6. Para el caso de derrames de sólidos, avise al profesor y si está preparado realice
las siguientes acciones:
Colóquese guantes y mascarilla y luego barra el sólido con una brocha para luego
colocarlo en el recipiente de desechos químicos sólidos.

ACCIDENTES EN EL LABORATORIO:

A.- INCENDIOS
En cualquier tipo de incendio, se debe cerrar inmediatamente toda llave de salida de gas.
Si la llama es pequeña, puede ser apagada con una toalla húmeda o caso contrario se debe
usar un extinguidor de anhídrido carbónico.
Fuego en Ropas: Inmediatamente se debe cubrir con una tela no inflamable.

Incendio de reactivos: Cuando hay incendio de frascos o vasos se debe inmediatamente


tapar la boca de estos, ya sea con una plancha de asbesto con una tela húmeda.

B.- CORTES
Muchas veces son producidos por roturas de vidrio como pueden ser de termómetros u
otros. Se debe lavar la herida con agua y jabón, luego aplicar un antiséptico y colocar una
venda.

C.- QUEMADURAS
Ácidos en los ojos: Se debe lavar inmediatamente la parte afectada con bastante agua
de caño, luego con una solución de bicarbonato de sodio al 2%. Seque y eche dentro del
ojo una gotita de aceite de oliva.
Álcalis en los ojos: Lave inmediatamente la parte afectada con bastante agua de caño,
luego con solución saturada de ácido bórico. Seque y eche dentro del ojo una gotita de
aceite de oliva.
Álcalis en la piel: Lávese con bastante agua de caño, luego con una solución de ácido
bórico. Seque y aplique picrato de butesín.
Ácidos en la piel: Igualmente lave con bastante agua de caño y luego con bicarbonato de
sodio diluido. Seque y aplique picrato de butesín. Si no hubiera picrato de butesín puede
reemplazarlo con glicerina.
Agua hirviendo: Aplique sal de mesa sólida en la parte afectada. Agréguele unas gotas de
agua para lograr su adherencia. Enjuague después de 15 minutos.

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PRÁCTICA Nº 1

COMPONENTES QUÍMICOS DE LA MATERIA VIVA: CARBOHIDRATOS


OBJETIVO
➢ Determinar experimentalmente el comportamiento químico de los carbohidratos más conocidos
en los sistemas biológicos, con la ayuda de reacciones químicas de coloración.

I. INTRODUCCIÓN
Las biomoléculas son componentes esenciales en los sistemas biológicos. Entre estas se
encuentran los carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.
Los carbohidratos son los compuestos orgánicos más abundantes y a su vez los más diversos.
Los carbohidratos o hidratos de carbono o también llamados azúcares están integrados por
carbono, hidrógeno y oxígeno, de ahí su nombre con frecuencia en la proporción Cn(H20)n, por
ejemplo, glucosa C6(H2O)6. Son parte importante de nuestra dieta, es decir, el conjunto de alimentos
consumidos en un día (no confundir con el régimen que se sigue para bajar de peso o tratar algunas
enfermedades).
Casi todas las plantas y animales sintetizan carbohidratos y los emplean para almacenar energía y
suministrarla al organismo para que realice sus actividades celulares, como la síntesis de sus
propias moléculas. Estos compuestos, abarcan sustancias muy conocidas y al mismo tiempo,
bastante disímiles, azúcar común, papel, madera, algodón, son carbohidratos o están presentes en
ello en una alta proporción. La glucosa, no solamente la utiliza el organismo como fuente de energía,
puede transformarla en otras macromoléculas, el glucógeno, que se acumula en el hígado y
músculos y sirve de reserva de energía, la transforma en colesterol y hormonas esteroidales
imprescindibles para numerosas funciones. Si se ingieren excesos de carbohidratos estos se
transforman en grasas.
Dependiendo de su composición, los carbohidratos pueden clasificarse en:

Simples
• Monosacáridos: glucosa o fructosa
• Disacáridos: formados por la unión de dos monosacáridos iguales o distintos: lactosa, maltosa,
sacarosa, celobiosa, etc.
• Oligosacáridos: polímeros de hasta 20 unidades de monosacáridos.
Complejos
• Polisacáridos: están formados por la unión de más de 20 monosacáridos simples.
• Función de reserva: almidón, glucógeno y dextranos.
• Función estructural: celulosa y xilanos.
La oxidación de una aldosa o de una cetosa da origen a los azúcares ácidos; estos pueden sufrir
oxidaciones por la acción de alguna enzima o por medio de agentes oxidantes. A los azúcares
capaces de oxidarse se les llama azúcares reductores. Según el grupo carbonilo presente en el
monosacárido, se dividen en aldosas (si está en el extremo de la molécula) como la glucosa y
cetosas (si está en medio de la molécula) como la ribulosa. Dependiendo del número de átomos de
Carbono presentes en la molécula, pueden ser triosas, tetrosas, pentosas, hexosas y polisacáridos
etc. Los términos pueden ser combinados ej. La glucosa es una aldohexosa mientras que la ribulosa
es una cetopentosa. La glucosa es la única aldosa que aparece en forma libre en la naturaleza como
monosacárido. Otros monosacáridos (D-gliceraldehído, D-ribosa y D-galactosa), son importantes
componentes de otras biomoléculas. Las azúcares L son mucho menos abundantes en la naturaleza
que las D.
Los polisacáridos son macromoléculas que por hidrólisis producen muchos monosacáridos como
la glucosa, fructosa, entre 100 y 90,000 unidades como el almidón, glucógeno, celulosa y otros.

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II. MATERIALES Y MÉTODOS

• Solución al 1% de glucosa, fructosa, sacarosa y almidón


• Reactivos de Benedict, molish, seliwanoff, lugol, ácido sulfúrico, nítrico y clorhídrico concentrados,
agua destilada.
• Tubos de ensayo, picetas, gradillas, pipetas de 1, 5 y 10 mL, marcador de proyección permanente,
cocinas de plancha.
• Vasos de precipitación de 50, 100, 250 y 600 mL

III. DESARROLLO EXPERIMENTAL

1. IDENTIFICACIÓN DE CARBOHIDRATOS

A. DETERMINACIÓN DE CARBOHIDRATOS

1.1. FUNDAMENTO

Se basa en la acción del ácido sulfúrico concentrado (reacción) sobre los carbohidratos dando
derivados del furfural, posteriormente estos derivados en presencia de α-naftol contenido en el
reactivo de Molish forman compuestos coloreados de color violeta.

1.2 . PROCEDIMIENTO

Marcar los 4 tubos para su identificación y proceder de acuerdo al cuadro. Al agregar el ácido
sulfúrico, hacerlo lentamente por las paredes del tubo evitando agitarlo.
La formación de un anillo color violeta en la interface indica reacción positiva.
TUBOS 1 2 3 4
Solución del Glucosa Fructosa Sacarosa Almidón
carbohidrato al 1% 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
Reactivo de Molish 1 ó 2 gotas 1 ó 2 gotas 1 ó 2 gotas 1 ó 2 gotas
H2SO4 (cc) Verter por las Verter por las Verter por las Verter por las
paredes del paredes del paredes del paredes del
tubo tubo tubo tubo

B. DETERMINACIÓN DE AZÚCARES REDUCTORES.

1.1. FUNDAMENTO
Cuando un azúcar reductor se somete a la acción del calor en el medio alcalino de Benedict,
Barfoed, el ión cúprico procedente del CuSO4 se encuentra en forma de hidróxido cúprico.
Cuando el Cu(OH)2 (de color azul) se calienta en presencia de un compuesto reductor se forma
óxido cuproso (de color rojo ladrillo). El reactivo de Fehling da la misma reacción.
CuSO4 + 2NaOH Cu (OH)2 + Na2SO4
Cu(OH)2 + RCOH Cu2O (rojo ladrillo) + RCOOH + H2O

1.2. PROCEDIMIENTO

Prepare 5 tubos como se indica el cuadro.


TUBOS 1 2 3 4 5
Sol. al 1% del Glucosa Fructosa Sacarosa Almidón
carbohidrato 1mL 1 mL 1 mL 1 mL
Agua destilada - - - - 1 mL
Reactivo de Benedict, 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
Barfoed o Fehling

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Marque los tubos e introducirlos en un baño de agua hirviendo durante 5 minutos, e interprete sus
observaciones.

+Calor
NaOH +R
CuSO4 Cu(OH)2 (azul) Cu2O (rojo ladrillo)
C) DIFERENCIACIÓN ENTRE ALDOSAS Y CETOSAS

1.1. FUNDAMENTO

El resorcinol contenido en el reactivo de seliwanoff, reacciona con altas concentraciones de


furfural y derivados en caliente para dar un compuesto de color rojo cereza. Las cetosas se
deshidratan más rápidamente que las aldosas

1.2. PROCEDIMIENTO

Prepare 2 tubos de ensayo de acuerdo al cuadro y calentar en baño maría hasta aparición de la
coloración.
TUBO 1 2
Solución de carbohidrato Glucosa (aldosa) Fructosa (cetosa)
al 1% 0.5 mL 0.5 mL
Reactivo de Seliwanoff 2.5 mL 2.5 mL

D) IDENTIFICACIÓN DEL ALMIDÓN

1.1. FUNDAMENTO

El almidón es una mezcla (en diferentes proporciones según las especies) de los polisacáridos
amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%). El almidón en solución acuosa la amilosa forma
estructuras helicoidales lineales y la amilopectina ramificadas, gracias a la formación de puentes de
H entre los grupos OH de la glucosa y las moléculas de H2O.

El Lugol (yodo en yoduro de potasio) colorea el almidón de color azul negruzco, debido a una
adsorción o fijación del yodo sobre las unidades de glucosa de la amilosa, y ayuda a mantener su
estructura. Al calentar hasta ebullición, desaparece la estructura ternaria (incoloro) y reaparece al
enfriar (azul-violeta).

1.2. PROCEDIMIENTO

En dos tubos de ensayo agregue una muestra de almidón (Calentar ligeramente el almidón). Añada
2 ó 3 gotas de lugol. La formación de un color azul negruzco indicará la presencia del almidón. Si
es un color rojo indicará la presencia de glucógeno o eritrodextrina. En el otro tubo agregar unas
gotas de HCl concentrado y calentar unos 15 minutos enfriar y agregar unas gotas de lugol. Anote
y compare sus resultados.
IV. CUESTIONARIO

1.

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PRÁCTICA Nº 2

COMPONENTES QUÍMICOS DE LA MATERIA VIVA: PROTEÍNAS Y


LÍPIDOS

OBJETIVO
➢ Determinar experimentalmente el comportamiento químico de las proteínas y lípidos más
conocidos en los sistemas biológicos, con la ayuda de reacciones cualitativas de coloración.

I. INTRODUCCIÓN

Las biomoléculas son componentes esenciales en los sistemas biológicos. Entre estas se
encuentran los carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.
Las proteínas son grupos de prótidos constituidos fundamentalmente por aminoácidos unidos
mediante enlace peptídico. Son componentes esenciales de toda la materia viva y elementos
indispensables en la dieta, necesarios para la formación de tejidos, ácidos nucleicos y en la síntesis
de enzimas, hormonas y componentes proteicos de la sangre. Cumplen variadas funciones
biológicas:
Proteínas estructurales: Forman parte principal de todas las unidades estructurales de plantas
y animales. Glucoproteínas, α - queratina, colágeno
• Proteínas reguladoras: hormonas - involucradas en la regulación de las múltiples reacciones
bioquímicas necesarias para la vida. Insulina, HHC, HEF, HL.
• Proteínas de transporte: Intervienen en el transporte de sustancias alimenticias, desperdicios.
Hemoglobina, seroalbúmina
• Reserva: Ovoalbúmina, caseína.
• Protectoras o defensa: Anticuerpos, complemento
• Catalíticas. Enzimas, ribozimas.
• Contráctiles. Miosina, actina
Los lípidos son componentes que existen en forma natural en animales y plantas, los cuales son
importantes en procesos biológicos (lípidos esenciales) y forman parte de la membrana celular
(fosfolípidos). Entre ellos tenemos: grasas aceites, fosfolípidos, triacilgliceroles, esteroides,
colesterol, prostaglandinas, carotenos, vitaminas (A, D, E y K) y otros.
Los encontramos en los productos lácteos, las carnes, los aceites y las frutas secas. Su aporte son
los ácidos grasos esenciales (linoleico (ω6), linolénico (ω3), ácido araquidónico). Representan el 10
% del peso corporal por lo cual necesitamos ingerir 56 g diarios para mantener esta proporción.

FUNCIONES
• Fuente de energía
• Protección para vasos sanguíneos, nervios y otros órganos
• Componentes de la membrana celular
• Estimulantes del apetito
• Vehículos para la absorción de vitaminas A, D, K y E
• Componentes del tejido nervioso

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II. MATERIALES Y MÉTODOS


• Reactivos: Ácidos sulfúrico y nítrico concentrados, NaOH al 10%, sulfato de cobre al 0,5%,ninhidrina
al 0.2%, alcohol, cloroformo, acetona, agua destilada.
• Muestras: Ovoalbúmina diluida y filtrada en gasa, aceite de diversas procedencias.
• Tubos de ensayo, picetas, gradillas, pipetas de 1, 5 y 10 mL, marcador de vidrio, mecheros de gas
o cocinas de plancha.

III. DESARROLLO EXPERIMENTAL

1) IDENTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS
A) REACCIÓN DE BIURET

1.1 FUNDAMENTO
El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina de NaOH. La reacción se basa en
la formación de un compuesto de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación
entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los
enlaces peptídico, dando un complejo de color violeta.

1.2 PROCEDIMIENTO
En un tubo de ensayo coloque 2 mL de una solución de albúmina diluida, agregue unas gotas de
NaOH al 20%, mezclar bien y añadir 1 ó 2 gotas de CuSO4 al 0,5%, agitar y observar la aparición
de la coloración violeta.

B) REACCIÓN XANTOPROTEÍCA

1.1. FUNDAMENTO
Se basa en la capacidad de los aminoácidos que contienen anillo aromático (bencénico), Phe, Trp,
y Tyr para formar por interacción con ácido nítrico concentrado compuestos dinitroderivados de
color amarillo

1.1 PROCEDIMIENTO
En un tubo de ensayo colocar 2 mL de solución de ovoalbúmina diluida, agregar gota a gota ácido
nítrico concentrado, calentar hasta ebullición y observar la aparición de la coloración (tener cuidado
al calentar).

C) REACCIÓN CON LA NINHIDRINA

1.1. FUNDAMENTO
Se basa en la interacción de la ninhidrina con el grupo amino de los aminoácidos, péptidos y
proteínas con la formación de un complejo de color azul-violeta. La ninhidrina reacciona con el
α-aminoácido formando una base de Schiff. Esta base se descompone con la liberación de
anhídrido carbónico y por hidrólisis da el compuesto 2 amino-1,3-diceto hidrindeno y un aldehído.

1.2. PROCEDIMIENTO

En un tubo de ensayo colocar 1 mL de solución de ovoalbúmina diluida y agregar gotas de ninhidrina


al 0.2%, llevar al baño maría y observar la aparición de un color púrpura.

2. IDENTIFICACIÓN DE LÍPIDOS
A) PRUEBA DE SUDAN III
1.1. FUNDAMENTO
El colorante Sudán III es específico para identificar grasas, reacciona dando una coloración
rojo rosada.

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1.2. PROCEDIMIENTO
En un tubo de ensayo colocar una muestra de aceite o muestra problema y agregar gotas
del colorante Sudán III. Agita suavemente. Observa y anota si se producen variaciones de
coloración con el tiempo. Analiza los resultados y concluye acerca de la existencia de lípidos
en la solución problema.

B) SOLUBILIDAD

2.1. FUNDAMENTO
Se basa en la propiedad de los lípidos de ser solubles en solventes orgánicos. Solubilidad
es la cualidad de soluble (que se puede disolver). Se trata de una medida de la capacidad
de una cierta sustancia para disolverse en otra. La sustancia que se disuelve se conoce
como soluto, mientras que la sustancia donde se disuelve el soluto recibe el nombre de
solvente o disolvente. La concentración por otra parte, hace referencia a la proporción
existente entre la cantidad de soluto y la cantidad de disolvente en una disolución.

2.2. PROCEDIMIENTO
Proceder de acuerdo al cuadro
TUBO 1 2 3 4
Solvente Agua destilada Alcohol Cloroformo Acetona
1 mL 1 mL 1 mL 1 mL
Aceite 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota

Nota: La muestra problema (aceites) agregar gota a gota con agitación constante al solvente.

C) EMULSIÓN DE LÍPIDOS
Proceder de acuerdo al cuadro
TUBO 1 2
Agua destilada 1 mL 1 mL
Aceite 2 gotas 2 gotas
NaOH al 10% - 0.5 mL
Nota: Agregar el NaOH gota a gota, mezclar y observar el fenómeno.

IV. CUESTIONARIO
1.

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PRÁCTICA Nº 3

MICROSCOPÍA
OBJETIVO
➢ Aprender y reconocer las partes que constituyen un microscopio óptico, así como también usarlo
correctamente, aprender a preparar muestras para observación y cuidados que deben tener en
cuenta antes y después de su uso.

I. INTRODUCCIÓN
El microscopio es un instrumento óptico, constituido por un sistema de lentes que permite obtener
una imagen aumentada de un objeto no visible al ojo desnudo. La imagen puede ser fotografiada
u observada directamente. Para poder usarlo correctamente se necesitan algunos conocimientos
básicos relativos a sus partes, cierta habilidad y adiestramiento.

En microscopia se manejan tres parámetros importantes para entender la teoría del microscopio.
1. PODER DE RESOLUCIÓN (PR): Es la capacidad que tiene el microscopio (o el ojo humano) de
percibir por separado dos puntos pequeños, adyacentes y cercanos. Es la capacidad para revelar
detalles bien definidos de unos puntos situados muy cerca uno del otro en el objeto, y poder
distinguir imágenes puntuales y totales. Es una medida cualitativa, por lo que no podemos
expresarla como un número. El PR aumenta a medida que disminuye la distancia. El PR es
inversamente proporcional al límite resolutivo. El limite resolutivo del ojo es 1/10 mm o 100 μm y
del microscopio 0,2 μm o 200 nm.

2. LÍMITE RESOLUTIVO (LR): Es la distancia mínima que debe existir entre dos puntos para que
sean distinguidos por separado, comprenderemos la relación inversa que se establece entre el
poder resolutivo y el límite resolutivo, depende de la longitud de onda de la luz (λ) que se emplee,
así como también de la apertura numérica de las lentes. (AN), ósea cuanto menor sea la distancia
que debe separar dos puntos para que se distingan por separado, mayor será el poder resolutivo
necesario para observarlos.
• El límite de resolución depende de la AN y de la longitud de onda de la luz empleada.

Límite de Resolución = λ (ANobj. + ANcond.) = λ / (2AN)


• El Límite de resolución máximo que se consigue en los microscopios de campo luminoso se sitúa
entre 0,22-0,25 μm.

3. APERTURA NUMÉRICA (AN): Es una expresión matemática que describe la forma en que la
luz es concentrada por el condensador y captada por el objetivo.

AN = nSen α
Donde:
n= Índice de refracción del medio entre las lentes y la muestra. (1,0 para el aire; 1,56 para el aceite)
Sen α = Ángulo formado por el eje óptico y los rayos de luz más externos que son captados por el
objetivo.
Teniendo en cuenta que el seno de α, no puede exceder de 1, y que el índice de refracción de
los mejores lentes no pueden ser superior a 1,6, usando aceite de inmersión, y usando luz
monocromática violeta (400 nm), se tiene que el menor límite resolutivo que se puede obtener
es de 170 nm (0,17μm), si usamos luz blanca de la mínima distancia que veríamos, sería de
objetos separados 250 nm.
1. FUNDAMENTO ÓPTICO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
Se basa en producir una imagen más grande, virtual e invertida. La imagen que observamos es una
composición de las imágenes proyectadas por dos lentes principales el objetivo y el ocular.

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2. DETERMINACIÓN DEL AUMENTO DE OBSERVACIÓN


Cuando se indica el poder de amplificación tanto en el objetivo como en el ocular, se multiplica el
aumento del ocular por el aumento del lente objetivo, en posición de observación y el producto es
el aumento total. Eje.
Ocular = 10X
Objetivo = 40X
Aumento = 400X

3. PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO


El microscopio óptico consta de 2 partes: Mecánica y óptica

A) PARTE MECÁNICA
Constituida por los siguientes dispositivos:
1. CABEZAL: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular, binocular, dentro de él
se encuentra el TUBO ÓPTICO, un cilindro de metal en cuya parte superior se encuentra colocado
el ocular y en la parte inferior el revólver, al cual se atornillan los objetivos.
2. BRAZO: Es de metal macizo en forma de C. Por su parte antero-posterior se une con el tubo óptico
y por su extremo inferior se conecta con la base del microscopio o pie. En su extremo inferior se
encuentra el tornillo macrométrico y micrométrico los cuales se utilizan para movilizar el cabezal
rápidamente (enfoque grosero) y para movimientos lentos (Enfoque fino), respectivamente.
3. PLATINA: Es una plataforma de forma cuadrada, rectangular o circular que se encuentra fija en
parte anterior e inferior del brazo. Se utiliza para colocar la preparación a observarse. Presenta una
abertura central denominada apertura de la platina, cuyo fin es dejar pasar los rayos luminosos
proyectados de la fuente de luz, además posee presillas o pinzas que permite sujetar la lámina o
portaobjetos.
4. REVOLVER: Es un dispositivo giratorio que está unido a la parte inferior del tubo óptico y posee
dos, tres o más roscas donde se atornillan los objetivos. Este revólver al hacerlo girar debe
disponerse en el retén, los objetivos, indicando que se encuentra en posición de observación.
5. SISTEMAS DE DESPLAZAMIENTO DE LA MUESTRA: Sistemas de cremalleras que permite el
desplazamiento de la muestra de atrás hacia delante o viceversa y de derecha a izquierda o
viceversa.
6. BASE, PIE O ESTATIVO: Tiene forma de herradura o circular, y sirve de apoyo al microscopio,
debiéndose colocar sobre una superficie plana y horizontal.
7. TORNILLOS DE ENFOQUE: El macrométrico y el micrométrico permiten el enfoque primario con
el objetivo de menor aumento de la imagen y la focalización fina de ésta.

B) PARTE ÓPTICA
1. OCULARES: Son cilindros cortos y huecos que se colocan en la parte superior del tubo óptico.
Interiormente poseen dos o tres lentes, uno a cado extremo. La lente superior se denomina lente
ocular y la inferior lente de campo. En la parte externa de estos lentes se indica el poder de
amplificación 4X, 10X, 15X, etc. Son llamados oculares porque el ojo del observador se coloca en
este lugar.
2. OBJETIVOS: Son tubos cortos atornillados al revolver. El objetivo es un sistema de lentes de los
cuales el que está más cerca al objetivo se encuentra en la parte externa del mismo: 4X, 10X, 20X,
40X 100X, etc. Este último es el objetivo de inmersión que se usa con aceite de cedro. A este
dispositivo se le denomina lente objetivo porque está ubicado cerca del objeto y forma una imagen
real, invertida y más grande.
3. CONDENSADOR: Se encuentra debajo de la platina y tiene como función concentrar los rayos
luminosos sobre la preparación y puede moverse acercándose o alejándose de ésta por medio de
un tornillo.
4. DIAFRAGMA: Ubicado en la parte inferior del condensador. Es un disco circular que permite regular
la cantidad de luz proyectada a la apertura de la platina.
5. LUZ: La fuente de luz se encuentra instalada en el pie.

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C) MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO


1. Para su transporte se levanta siempre con una mano por el brazo y con la otra se coge por la base.
2. Limpie previamente los objetivos con papel lente. Estando el instrumento en posición vertical,
oriéntelo hacia la fuente luminosa y regule la entrada de luz con el diafragma.

PARA REALIZAR EL ENFOQUE:


1. La lámina con la muestra a observar es ubicada sobre la platina sujetándola con las pinzas. Las
láminas deben estar completamente secas para no mojar las piezas del microscopio. Colocar
2. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos
(10x) si la preparación es de bacterias.
3. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico. Esto
debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar
el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
4. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la preparación
con el macrométrico y, cuando se observe algo nítido la muestra, girar el micrométrico hasta obtener
un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con
mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por
completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación
desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil
que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones
anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó con
el objetivo de inmersión.

EMPLEO DEL OBJETIVO DE INMERSIÓN:


1. Bajar totalmente la platina.
2. Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica la zona que
se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
3. Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino entre éste y el de 40X.
4. Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
5. Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de inmersión.
6. Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la lente toca la gota de
aceite. En ese momento se nota como si la gota ascendiera y se adosara a la lente.
7. Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre el objetivo de
inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el de 40x por lo que el riesgo de
accidente es muy grande.
8. Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se puede volver a usar
el objetivo 40X sobre esa zona, pues se mancharía de aceite. Por tanto, si desea enfocar otro
campo, hay que bajar la platina y repetir la operación desde el paso
9. Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se coloca el objetivo de
menor aumento girando el revólver. En este momento ya se puede retirar la preparación de la
platina. Nunca se debe retirar con el objetivo de inmersión en posición de observación.
10. Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial para óptica.
Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente limpio.

MANTENIMIENTO Y PRECAUCIONES

1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en posición de
observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina no sobresale del borde de la
misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto con su funda para
evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a usar de forma prolongada, se debe
guardar en su caja dentro de un armario para protegerlo del polvo.

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3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas muy suavemente con
un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que queda en el objetivo
con pañuelos especiales para óptica o con papel de filtro (menos recomendable). En cualquier
caso se pasará el papel por la lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a
secarse y pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcohol-acetona (7:3) o
xilol.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico, micrométrico, platina,
revólver y condensador).
7. El cambio de objetivo se hace girando el revólver y dirigiendo siempre la mirada a la preparación
para prevenir el roce de la lente con la muestra. No cambiar nunca de objetivo agarrándolo por
el tubo del mismo ni hacerlo mientras se está observando a través del ocular.
8. Mantener seca y limpia la platina del microscopio. Si se derrama sobre ella algún líquido, secarlo
con un paño. Si se mancha de aceite, limpiarla con un paño humedecido en xilol.
9. Es conveniente limpiar y revisar siempre los microscopios al finalizar la sesión práctica y, al
acabar el curso, encargar a un técnico un ajuste y revisión general de los mismos.

II. MATERIALES Y MÉTODOS.


• Láminas y laminillas
• Piceta
• Papel lente
• Lana, algodón, u otra muestra
• Una hoja de periódico
• Tijeras
• Estiletes
• Microscopio óptico
• Algún otro material que pueda traer el alumno

III. PREPARACIÓN DE LÁMINAS.


• Limpie la lámina con papel lente, maneje únicamente por los borde. Con la piceta coloque una
gota de agua en el centro, después coloque un trozo de lana o algodón sobre ella y cúbrala con
una laminilla. Observe a menor y mayor aumento.
• Prepare otra muestra húmeda pero esta vez utilice una letra “e” de un papel periódico y
colóquela en posición de lectura. Proceda igual al caso anterior.
• Prepare una muestra húmeda de un cabello y cúbrala con una laminilla, observe a menor y mayor
aumento. Haga los esquemas de todas sus observaciones.

IV. CUESTIONARIO.
1.

PREPARACION DE LÁMINAS:
Haciendo uso de la lámina preparar una muestra húmeda a observar
Sobre el cual se colocará la laminilla

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PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO

FORMACIÓN DE LA IMAGEN EN EL MICROSCOPIO COMPUESTO

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PRÁCTICA Nº 4

CÉLULA PROCARIOTA Y EUCARIOTA


OBJETIVO
➢ Observar y conocer la célula procariota con técnicas de coloración.
➢ Identificar y reconocer de la célula eucariota las partes principales que conforman este tipo de
célula.
➢ Diferenciar una célula animal de una vegetal.

I. INTRODUCCIÓN

Son seres generalmente unicelulares que pertenecen al reino Monera. Su tamaño varía entre 1 - 2
m por 1 – 4 m o menos. Las bacterias tienen una estructura menos compleja que la de las células
de los organismos superiores. Son células procariotas, que presentan un cromosoma circular y
carecen de membrana nuclear.

Las bacterias juegan un papel fundamental en la naturaleza y en el hombre: la presencia de una


flora bacteriana normal es indispensable, aunque gérmenes son patógenos. Análogamente tienen
un papel importante en la industria y permiten desarrollar importantes progresos en la investigación,
concretamente en fisiología celular y en genética.

El examen microscópico de las bacterias no permite identificarlas, ya que existen pocos tipos
morfológicos, cocos (esféricos), bacilos (bastón), espirilos (espiras), vibrios (coma). El estudio
mediante la microscopia óptica y electrónica de las bacterias revela la estructura de éstas.
Las células eucariontes de protistas, hongos, plantas y animales, son más grandes y complejas que
las células procariontes. Se caracterizan por poseer núcleo organizado donde se encuentra el ADN
y un complejo sistema de membranas internas, que subdividen a la célula en compartimientos
especializados e integrados, que cumplen diversas funciones importantes para la vida celular.

Cada compartimiento contiene sus propias enzimas y moléculas y además existe un complejo
sistema que transporta los productos específicos de un compartimiento a otro. La organización en
compartimientos separados por membranas permite a la célula llevar a cabo muchas reacciones
químicas incompatibles en forma simultánea. Las células eucariontes poseen una membrana
celular, que le sirve para relacionarse con su medio ambiente, en el citoplasma se encuentra
diversos tipos de orgánulos como, retículo endoplásmico, complejo de Golgi, peroxisomas,
mitocondrias, lisosomas, núcleo y en las células vegetales cloroplastos.

II. MATERIALES Y MÉTODOS


• Muestras de leche, Allium cepa “cebolla”, Daucos carota “zanahoria” y Pelargonium
domesticum “geranio”
• Hojas de Elodea sp.
• Láminas y laminillas
• Microscopio compuesto
• Lugol
• Hoja de afeitar
• Piceta
• Batería GRAM: Cristal Violeta, lugol, alcohol-acetona, safranina o fucsina
• Azul de metileno al 1%
• Aceite de inmersión
• Papel lente y agente limpiador de lentes
• Microscopio compuesto
• Mechero de gas o alcohol

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• Marcador
• Mondadientes
• Fósforos o encendedor

III. DESARROLLO EXPERIMENTAL

A) COLORACIÓN GRAM

1.1 FUNDAMENTO
El método se basa en capacidad tintorial de las bacterias y las divide en dos grandes grupos, GRAM
(+) y GRAM (-). Cuando las bacterias toman el colorante cristal violeta o violeta de genciana o
cristal violeta y si retienen este colorante después del tratamiento con lugol y lavado con alcohol-
acetona, se les denomina bacterias GRAM POSITIVAS y presentan una coloración púrpura. Si las
bacterias no retienen el colorante después del tratamiento con lugol y lavado con alcohol-acetona y
por tanto toman el colorante de contraste fucsina básica o safranina, dando un color rojo-grosella,
se les denomina bacterias GRAM NEGATIVAS.
El fundamento de la reacción se basa en que el colorante cristal violeta o violeta de genciana se
mezcla con el lugol (mordiente) y forma el complejo CV-I el cual queda retenido en la malla que
forma el péptidoglicano en la pared celular y luego éste, al ser tratado con el alcohol -acetona
(diferenciador) no cede el colorante, que queda retenido en esta malla y se mantiene el color violeta.
En cambio las bacterias gram negativas presentan un péptidoglicano más delgado y una capa
gruesa de lipopolisacáridos, estos son solubilizados el tratamiento con el decolorante y requieren
de un colorante de contraste como la fucsina o safranina dando una coloración rojo grosella,
pudiendo ser observadas. Estudios recientes comparativos atribuyen el carácter de Gram
positividad a la estructura química de las paredes celulares; entre otras, principalmente, al contenido
de lípidos. En las Gram positivas la permeabilidad de las paredes resistentes puede decrecer por el
efecto deshidratante del alcohol, mientras que en las Gram negativas el alcohol extrae de sus
paredes el gran contenido de lípidos aumentando la permeabilidad. De esta manera, fácilmente
escapa el complejo cristal violeta-yodo o violeta de genciana-yodo

1.2 PROCEDIMIENTO
1. Con el mondadientes obtenga una muestra de sarro dentario
2. Extienda la muestra en la lámina
3. Secar la muestra al mechero
4. Adicionar violeta de genciana y dejar actuar por 2 minutos
5. Lavar con agua corriente
6. Cubrir con lugol por un minuto
7. Lavar con alcohol-acetona (cuidadosamente)
8. Lavar con agua corriente
9. Cubrir con fucsina básica por un minuto
10. Secar la muestra y colocar la laminilla
11. Examinar al microscopio utilizando el objetivo de inmersión
12. Identifique las diferentes formas de los microorganismos y esquematice.

C) DESARROLLO EXPERIMENTAL

1. Observación de una célula animal: Epitelio bucal


a. Con el extremo de una lámina hacer un raspado de epitelio bucal
b. Con otra lámina hacer un frotis de epitelio bucal, dejar secar
c. Cubrir con azul del metileno, por 3 minutos, lavar con agua corriente
d. Dejar secar al medio ambiente, y observar con el objetivo de 10X y 40X.
2. Observación de célula vegetal: Cebolla y Zanahoria
a. Con una hoja de afeitar o bisturí trazar un cuadrado de 1 cm X 1cm sobre la cebolla

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b. Extraer las catáfilas y colocar sobre una lámina la epidermis de una de ellas.
c. Colocar encima de este preparado una gota de lugol y cubrir con una laminilla.
d. Observar con objetivo de 10X y 40X.
e. Con la muestra de zanahoria hacer un corte fino con la hoja de afeitar
3. Corte transversal de Pelargonium domesticum “geranio”
a. Hacer un corte transversal de la hoja de geranio
b. Colocarla sobre una lámina con una gota de agua.
c. Cubrir con una laminilla
d. Observar con objetivo de 10X y 40X.
4. Corte superficial Pelargonium domesticum “geranio”
a. Hacer un corte superficial del geranio
b. En una lámina colocar una gota de agua y sobre ella el corte de geranio
c. Colocar la laminillas
d. Observar con objetivo de 10X y 40X.
5. Observación de cloroplastos en la célula de Elodea sp
a. Seleccione una hoja joven del extremo de una rama en crecimiento
b. Colóquelo en una lámina con una gota de agua
c. Cubra con laminillas
d. Observe al microscopio a 10X y 40X

IV. CUESTIONARIO

1.

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PRÁCTICA N°5

PERMEABILIDAD CELULAR
OBJETIVO
➢ Reconocer los medios extra e intra celular.
➢ Comprender como las diferentes concentraciones de las soluciones pueden afectar a la célula.

I. INTRODUCCIÓN
La membrana celular juega un papel fundamental en la regulación del contenido de la célula, pues
tanto los elementos nutritivos como los productos de desecho deben pasar a través de ella. A fin de
comprender estos intercambios de sustancias, definiremos la difusión como el movimiento de
moléculas de una zona de alta concentración a otra de menor concentración.

Existen con respecto a esto, dos casos muy particulares: la diálisis, en la cual se produce la difusión
de moléculas disueltas o de soluto; y la ósmosis, en la cual se produce la difusión de moléculas de
agua en su tendencia a difundir durante la ósmosis, se llama presión osmótica.

Las células se hallan por lo general rodeadas de líquido, sí en este medio la concentración de
sustancias es mayor que la existente dentro de la célula, el medio se denomina hipertónico y el
agua tiende a salir de la célula, produciéndose así la crenación o la plasmólisis celular. Si el líquido
extracelular tiene menor concentración de sustancias que el interior celular, el medio se denomina
hipotónico y el agua tiende a ingresar a la célula, produciéndose el hinchamiento de ésta. Cuando
la concentración de sustancias en el medio extracelular es igual a la del interior celular, el medio se
denomina isotónico y no se produce un desplazamiento neto de moléculas de agua, manteniendo
la célula su forma normal.

II. MATERIALES Y MÉTODOS


• Materiales: Allium cepa “cebolla”, Daucos carota “zanahoria” grande y sin cortes y glóbulos rojos.
• Soluciones de NaCl al 0.2, 0.9 y 5%
• Alcohol yodado
• Algodón
• Laminas y laminillas
• Piceta
• Azúcar granulada
• Agua destilada
• Lancetas de punción
• Papel lente y liquido limpiador
• Microscopio compuesto
• Mondadientes
• Bisturí
• Vaso de precipitado de 600 mL

III. DESARROLLO EXPERIMENTAL

1.1. PROCEDIMIENTO
Experimento A
a. Con la ayuda de un bisturí o un cuchillo extraer la parte central de la zanahoria.
b. Colocar dentro de ella el azúcar granulado.
c. Colocar la zanahoria dentro del vaso de precipitado con agua desilada y mantenerla con los
mondadientes en posición vertical.
d. Esperar el tiempo que tarde el proceso de difusión.

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Experimento B
a. Colocar una capa de epidermis de catáfilo de cebolla en cada una de tres láminas.
b. Agregar a la primera una gota se solución salina al 0.2%, a la segunda 0.9% y a la tercera 5%.
c. Cubrir con una laminilla.
d. Observar al microscopio a 10X y 40X

Experimento C.
a. Usar la lanceta de punción para obtener sangre de un dedo previamente desinfectado.
b. Colocar una gota de sangre en cada una de tres láminas.
c. Agregar a cada gota de sangre una gota de solución salina al 0.2, 0.9 y 5%.
d. Cubrir con una laminilla.
e. Observar al microscopio a 40X.

IV. CUESTIONARIO

1.
1.

Medio isotónico Medio hipertónico Medio hipotónico Glóbulos rojos medio isotónico

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PRÁCTICA Nº 6

DEMOSTRACIÓN INDIRECTA DE LAS LEYES DE MENDEL

OBJETIVO

• Conocer la manera como se transmite un determinado carácter de un progenitor a la siguiente


generación y como se expresa este mediante el fenotipo.
• Como se manifiestan los caracteres dominantes y recesivos en el fenotipo.

I. INTRODUCCIÓN

Gregorio Mendel realizó experiencias de cruzamiento con la especie vegetal Pisum sativum
“arvejas”, descubriendo las leyes que rigen la transmisión hereditaria y que constituye el
fundamento de la genética moderna.

A) PRIMERA LEY DE MENDEL O LA LEY DE LA SEGREGACIÓN (MONOHIBRIDISMO)

Mendel sostuvo que un determinado carácter era controlado por un factor hoy conocido como
gen, susceptible de segregarse, esto es, que durante la formación de gametos los dos genes se
separan y uno de ellos con el del otro progenitor va a integrar el par de genes de la descendencia.
Si representamos por medio de letras los dos genes en el cruzamiento y designamos con la letra
“A”, el gen para el carácter amarillo (dominante) y con la letra “a” al gen para el carácter verde
(recesivo), tendremos:

P (Padres) AA X Aa
GAMETOS A a
F1 Aa
GAMETOS A A a a
F2 AA Aa Aa aa
1 2 1
HOMOCIGOTO HETEROCIGOTO HOMOCIGOTO
AMARILLO VERDE
FENOTIPO 3 1

En la primera generación F1, se hallan ambos genes “A” y “a”, solo el “A” produce el carácter
visible color amarillo, porque es dominante; el gen “a” permanece oculto y se denomina recesivo.
La segunda generación F2 se obtiene al cruzar descendientes F1, quiere decir Aa X Aa. Durante
la formación de gametos, en cada progenitor los dos genes se segregan y la mitad de gametos
llevan el gen “A” y la otra mitad el gen “a”.

B) SEGUNDA LEY O DE LA DISTRIBUCIÓN INDEPENDIENTE DE CARACTERES

La segunda ley describe el comportamiento simultáneo de 2 ó más pares de genes situados en


pares cromosómicos diferentes que se segregan independientemente durante la gametogénesis,
formando los gametos ocho combinaciones. Si se cruzan una línea pura de semilla amarilla, lisa
AABB con otra de semilla verde, rugosa aabb, en la primera generación las semillas son
amarillas lisas AaBb y sí estas se autofecundan, en la segunda generación obtenemos una
proporción fenotípica de 9:3:3:1 como se observa en el siguiente cuadro:

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P (Padres) AABB X aabb


GAMETO AB ab
F1 AaBb
GAMETOS AB Ab aB ab
F2 AABB AABb AaBB AaBb AAbb Aabb aaB aaB aabb
B b

FENOTIPO AMARILLO LISO AMARILLO VERDE VERDE


RUGOSO LISO RUGOSO
9 3 3 1

II. MATERIALES Y MÉTODOS

• 20 granos de fríjol de color oscuro


• 20 granos de fríjol de color blanco
• Bolsas de papel

III. PROCEDIMIENTO

PASO A
1. En las bolsas de papel introducir en cada una de ellas 10 granos de fríjol de color oscuro y 10
de color blanco.
2. Simultáneamente haga retirar de cada bolsa y por un alumno diferente un grano de fríjol
referente al gen felpar de alelos que entra en el cruzamiento. Consideramos la retirada de una
bolsa como el gen proveniente de una hembra y el de la otra bolsa como el gen proveniente
de un macho.
3. Establezca el genotipo del descendiente combinando los dos genes (Fríjol oscuro = “A” y fríjol
blanco= “a”), y anote el resultado en la hoja adjunta.
4. Devuelva los frijoles a las bolsas de donde los obtuvo.
5. Repita 100 veces las retiradas de los granos al azar y con reposición para no alterar la
frecuencia inicial.
6. Determine los fenotipos y números obtenidos o encontrados a cada fenotipo.
7. Obtenga el desvió utilizando la fórmula del error patrón.

pq
EP = n

Donde:
• p, q son los números obtenidos o encontrados para el fenotipo dominante o recesivo
• n, es el total de resultados obtenidos
• Sí el desvió es dos veces mayor que el error patrón, es significativo, esto es, los números
obtenidos no concuerdan con lo esperado, es decir las probabilidades que los acontecimientos
ocurran al azar son pequeñas.

1 26 51 76
2 27 52 77
3 28 53 78
4 29 54 79
5 30 55 80
6 31 56 81

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7 32 57 82
8 33 58 83
9 34 59 84
10 35 60 85
11 36 61 86
12 37 62 87
13 38 63 88
14 39 64 89
15 40 65 90
16 41 66 91
17 42 67 92
18 43 68 93
19 44 69 94
20 45 70 95
21 46 71 96
22 47 72 97
23 48 73 98
24 49 74 99
25 50 75 100
Además del método del error patrón verificar si los números obtenidos concuerdan con los
esperados, usando la prueba del Ji cuadrado X2 cuya fórmula es la siguiente:

d2
2
X =
E

El siguiente paso consiste en interpretar los valores de X2 en términos de probabilidad.


Para tal efecto, considere otro factor, el número de clases (fenotipo) en que se basa el X2, el número
de clases se incluye en el concepto matemático como grados de libertad.
El número de grados de libertad es uno menos del número de clases (la proporción 3:1 con dos
clases, tiene un grado de libertad). Cuando se ha determinado el X2 y los grados de libertad,
debemos consultar la tabla del X2.
Localizar el número que representa los grados de libertad a la izquierda, leer en sentido horizontal
hasta encontrar el porcentaje correspondiente de la tabla. Si el valor es menor de 5% (0.05), los
resultados no han ocurrido al azar; si es mayor a 5%, si han ocurrido al azar.
GENOTIPO FRECUENCIA FENOTIPO OBTENIDO ESPERADO DESVIO
AA
Aa
aa

pq
EP = n

1. ¿El desvío es dos veces mayor que el error patrón?.....................................................


2. ¿Los números obtenidos concuerdan con los esperados?..........................................

d2
X2 =
e

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3. ¿Cuál es su conclusión?...............................................................................................

PASO B:
1. Siguiendo el procedimiento anterior (Paso A), establezca el genotipo del descendiente (fríjol
oscuro gen B; fríjol blanco, gen b).
2. Continúa con el procedimiento ya establecido, y para determinar la probabilidad de las
desviaciones. Utilice solamente la prueba del X2.
GENOTIPO FRECUENCIA FENOTIPO OBTENIDO ESPERADO DESVIO
AABB
AABb
AaBB
AaBb
AAbb
Aabb
AaBB
AaBb
aabb

d2
2
X =
E

3. ¿Cuál es su conclusión?..................................................................................................................

…………………………………………………………………………………………………....................…
TABLA DEL JI CUADRADO

GRADOS DE PROBABILIDAD
LIBERTAD 0.99 0.95 0.80 0.50 0.20 0.10 0.05 0.02 0.01
1 0.0002 0.0039 0.0642 0.45 1.64 2.7 3.8 5.4 6.6
2 0.02 0.10 0.45 1.38 3.21 4.6 6.0 7.8 9.2
3 0.12 0.35 1.00 2.37 4.64 6.3 7.8 9.8 11.3
4 0.30 0.71 1.65 3.36 5.98 7.8 9.5 11.7 13.3
5 0.55 1.14 2.34 4.35 7.28 9.2 11.1 13.4 15.1
6 0.87 1.63 3.07 5.35 8.55 10.6 12.6 15.0 16.8
7 1.24 2.17 3.82 6.35 9.80 12.0 14.1 16.6 18.5
8 1.65 2.73 4.59 7.34 10.3 13.4 15.5 18.2 20.1
9 2.09 3.33 5.38 8.34 12.24 14.1 16.9 19.7 21.7
10 2.56 3.94 6.18 9.34 13.44 16.0 18.3 21.2 23.2
Según Fisher, 1964 (modificado)

IV. CUESTIONARIO
1.

26
UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, Decana de América)
DEPARTAMENTO DE ESTUDIOS GENERALES-2018

BIBLIOGRAFÍA

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Edición. México.
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Interamericana. México.

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