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MEDIANTE HPLC
FUENTES MAVIS 4-778-2106
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUI, FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS, ESCUELA DE QUÍMICA, CURSO DE QUÍMICA
ANALÍTICA (228).
RESUMEN: Esta experiencia tuvo como principal objetivo determinar el contenido de cafeína y ácido benzoico
presente en una bebida de Coca Cola “light” mediante HPLC. Por separado se prepararon disoluciones madre
de cafeína y acido benzoico, de cada uno se pesó 0.050g y se disolvió en 25 mL de agua Milli Q. Esta
disolución se transfirió a un matraz aforado de 50 mL y se ensara con agua Milli Q. Con las disoluciones
madre de cafeína y acido benzoico se prepararon patrones de concentraciones de 5, 10, 20, 30, 40 y 50 ppm
y se colocaron en viales para después inyectar. En la preparación de la muestra de la bebida coca cola (esta
debe estar desgacificada desde unos días antes), se extrajeron 10 mL de la muestra con una pipeta, se aforo
en un matraz de 50 mL y se enrasa con agua Mili Q. se homogeneizó la disolución y se filtró con un filtro de
nylon con un tamaño de poro de 0,45 µm, ya por último se colocó en un vial para después inyectar; ya
teniendo todos los patrones y la muestra lista se acondicionó el equipo para inyectar primeramente los
patrones los cuales se inyectaron en el mismo orden y así mismo fueron impresos los Cromatogramas luego
se inyecto la muestra de coca cola y se obtuvo las áreas y los tiempos de retención de los picos
correspondientes a los analitos de interés. De acuerdo a los resultados obtenidos se concluye que
determinamos el contenido de cafeína, acido benzoico presente en una bebida de Cola “light” y normal.
PALABRAS CLAVES: Cromatografía líquida, Las bebidas que contienen cafeína, como el café,
disolución madre, Cafeína, ácido benzoico, el té, algunas bebidas no alcohólicas
cromatograma. (especialmente los refrescos de cola) y las bebidas
energéticas gozan una gran popularidad, ya que
OBJETIVOS contienen cafeína, sustancia psicoactiva más
Entender el fundamento de la cromatografía ampliamente consumida en el mundo.
de líquidos. La cafeína es un alcaloide del grupo de las
xantinas que se adiciona en algunas bebidas
Aprender el manejo de un equipo de HPLC. refrescantes por su acción estimulante. En los
Determinar el contenido de cafeína y ácido refrescos de cola, este compuesto procede del
benzoico presente en una bebida de Cola extracto de nuez de cola. Un fruto tropical que la
contiene de modo natural. La cafeína se encuentra
“light”. además en muchos alimentos de uso cotidiano
como el café, el té y el chocolate.
El aspartamo (E951) es un edulcorante artificial no
MARCO TEÓRICO: calórico descubierto en 1965 y comercializado en
La cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) los años 80. Es un polvo blanco en incoloro, unas
es una técnica de análisis instrumental que 200 veces más dulce que la sacarosa que se
introduce un grado de eficiencia y velocidad al emplean numerosos alimentos bajos en calorías o
concepto de cromatografía. "light". Cuando se encuentra seco o congelado es
La cromatografía es una técnica de separación estable pero cuando se conserva en medio líquido
que se basa en el reparto entre dos fases. La a temperaturas superiores a 30 °C se descompone
separación se logra en base a la diferencia de y pierde su poder edulcorante.
velocidad de movilidad de los analitos entre una El ácido benzoico (E-210) es uno de los
fase inmóvil denominada fase estacionaria y una conservantes más utilizados. Es un compuesto que
fase móvil o eluyente. Esa movilidad va depender presenta un anillo aromático y es un sólido incoloro
del grado de afinidad que tenga el analito con la poco soluble en agua fría pero bastante soluble en
fase estacionaria y la fase móvil, según Harvey, P. agua caliente o disolventes orgánicos. Es muy útil
(2009). contra mohos, levaduras y bacterias en alimento de
DETERMINACIÓN DE CAFEINA Y ACIDO BENZOICO EN BEBIDAS REFRESCANTES
MEDIANTE HPLC
FUENTES MAVIS 4-778-2106
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUI, FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS, ESCUELA DE QUÍMICA, CURSO DE QUÍMICA
ANALÍTICA (228).
carácter ácido, por lo que es muy utilizado como C. Preparación de disolución patrón.
conservante en bebidas refrescantes.
A partir de las disoluciones madre de
MATERIALES Y REACTIVOS: cafeína, Aspartamo y ácido benzoico de
1000 ppm .
Material Capacidad Cantidad Preparar cinco disoluciones patrón de
Cromatógrafo - 1 10 mL que contengan concentraciones
liquido entre 5 y 50 ppm de cafeína.
Pipeta 10 mL 1
Entre 5 y 50 ppm de ácido benzoico y se
Vasos químicos 100 mL 3 enrasan con la disolución de la fase
Volumétrico 100 mL 2 móvil.
Jeringa 10 mL 1 Despues se colocan en un vial para
Filtro de jeringa 0.45µm 4 proceder a Inyectar.
Agua grado - -
HPLC
Reactivo Concentración Cantidad
D. Preparación de bebidas refrescantes.
Acido benzoico 1000 ppm 50 mL
Cafeína 1000 ppm 50 mL
Tomar con una pipeta 10 ml de la coca-cola
Coca- cola - 20 mL normal y light.
Metanol Concentrado 40 mL
para HPLC Colocarlo en una volumetrico de 50 ml,
aforar.