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DETERMINACIÓN DE CAFEINA Y ACIDO BENZOICO EN BEBIDAS REFRESCANTES

MEDIANTE HPLC
FUENTES MAVIS 4-778-2106
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUI, FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS, ESCUELA DE QUÍMICA, CURSO DE QUÍMICA
ANALÍTICA (228).
RESUMEN: Esta experiencia tuvo como principal objetivo determinar el contenido de cafeína y ácido benzoico
presente en una bebida de Coca Cola “light” mediante HPLC. Por separado se prepararon disoluciones madre
de cafeína y acido benzoico, de cada uno se pesó 0.050g y se disolvió en 25 mL de agua Milli Q. Esta
disolución se transfirió a un matraz aforado de 50 mL y se ensara con agua Milli Q. Con las disoluciones
madre de cafeína y acido benzoico se prepararon patrones de concentraciones de 5, 10, 20, 30, 40 y 50 ppm
y se colocaron en viales para después inyectar. En la preparación de la muestra de la bebida coca cola (esta
debe estar desgacificada desde unos días antes), se extrajeron 10 mL de la muestra con una pipeta, se aforo
en un matraz de 50 mL y se enrasa con agua Mili Q. se homogeneizó la disolución y se filtró con un filtro de
nylon con un tamaño de poro de 0,45 µm, ya por último se colocó en un vial para después inyectar; ya
teniendo todos los patrones y la muestra lista se acondicionó el equipo para inyectar primeramente los
patrones los cuales se inyectaron en el mismo orden y así mismo fueron impresos los Cromatogramas luego
se inyecto la muestra de coca cola y se obtuvo las áreas y los tiempos de retención de los picos
correspondientes a los analitos de interés. De acuerdo a los resultados obtenidos se concluye que
determinamos el contenido de cafeína, acido benzoico presente en una bebida de Cola “light” y normal.

PALABRAS CLAVES: Cromatografía líquida, Las bebidas que contienen cafeína, como el café,
disolución madre, Cafeína, ácido benzoico, el té, algunas bebidas no alcohólicas
cromatograma. (especialmente los refrescos de cola) y las bebidas
energéticas gozan una gran popularidad, ya que
OBJETIVOS contienen cafeína, sustancia psicoactiva más
 Entender el fundamento de la cromatografía ampliamente consumida en el mundo.
de líquidos. La cafeína es un alcaloide del grupo de las
xantinas que se adiciona en algunas bebidas
 Aprender el manejo de un equipo de HPLC. refrescantes por su acción estimulante. En los
 Determinar el contenido de cafeína y ácido refrescos de cola, este compuesto procede del
benzoico presente en una bebida de Cola extracto de nuez de cola. Un fruto tropical que la
contiene de modo natural. La cafeína se encuentra
“light”. además en muchos alimentos de uso cotidiano
como el café, el té y el chocolate.
El aspartamo (E951) es un edulcorante artificial no
MARCO TEÓRICO: calórico descubierto en 1965 y comercializado en
La cromatografía liquida de alta resolución (HPLC) los años 80. Es un polvo blanco en incoloro, unas
es una técnica de análisis instrumental que 200 veces más dulce que la sacarosa que se
introduce un grado de eficiencia y velocidad al emplean numerosos alimentos bajos en calorías o
concepto de cromatografía. "light". Cuando se encuentra seco o congelado es
La cromatografía es una técnica de separación estable pero cuando se conserva en medio líquido
que se basa en el reparto entre dos fases. La a temperaturas superiores a 30 °C se descompone
separación se logra en base a la diferencia de y pierde su poder edulcorante.
velocidad de movilidad de los analitos entre una El ácido benzoico (E-210) es uno de los
fase inmóvil denominada fase estacionaria y una conservantes más utilizados. Es un compuesto que
fase móvil o eluyente. Esa movilidad va depender presenta un anillo aromático y es un sólido incoloro
del grado de afinidad que tenga el analito con la poco soluble en agua fría pero bastante soluble en
fase estacionaria y la fase móvil, según Harvey, P. agua caliente o disolventes orgánicos. Es muy útil
(2009). contra mohos, levaduras y bacterias en alimento de
DETERMINACIÓN DE CAFEINA Y ACIDO BENZOICO EN BEBIDAS REFRESCANTES
MEDIANTE HPLC
FUENTES MAVIS 4-778-2106
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUI, FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS, ESCUELA DE QUÍMICA, CURSO DE QUÍMICA
ANALÍTICA (228).
carácter ácido, por lo que es muy utilizado como C. Preparación de disolución patrón.
conservante en bebidas refrescantes.
A partir de las disoluciones madre de
MATERIALES Y REACTIVOS: cafeína, Aspartamo y ácido benzoico de
1000 ppm .
Material Capacidad Cantidad Preparar cinco disoluciones patrón de
Cromatógrafo - 1 10 mL que contengan concentraciones
liquido entre 5 y 50 ppm de cafeína.
Pipeta 10 mL 1
Entre 5 y 50 ppm de ácido benzoico y se
Vasos químicos 100 mL 3 enrasan con la disolución de la fase
Volumétrico 100 mL 2 móvil.
Jeringa 10 mL 1 Despues se colocan en un vial para
Filtro de jeringa 0.45µm 4 proceder a Inyectar.
Agua grado - -
HPLC
Reactivo Concentración Cantidad
D. Preparación de bebidas refrescantes.
Acido benzoico 1000 ppm 50 mL
Cafeína 1000 ppm 50 mL
Tomar con una pipeta 10 ml de la coca-cola
Coca- cola - 20 mL normal y light.
Metanol Concentrado 40 mL
para HPLC Colocarlo en una volumetrico de 50 ml,
aforar.

FASE EXPERIMENTAL: Pasar a través de un filtro de nylon y


colocarlo en un vial.
A. Preparación de disoluciones.
Inyectar.
 Cafeína y Acido benzoico :

Se disuelven 0,050 g de cafeína en


aproximadamente 25 mL de agua Milli Q..
RESULTADOS:
La disolución resultante se transfiere a un
matraz aforado de 50 mL. Tabla 1. Datos de los patrones.
• Aforar. Concentración Área Área
(ppm) Cafeína Ac. Benzoico
Repetir con el acido benzoico. 5 79.69 40.32
10 179.57 61.33
B. Determinación de cafeína y ácido 20 341.46 180.6
benzoico. 30 470.04 230.9
40 717.07 384.76
Se toman 5 mL de la muestra con una 50 876.57 441.49
pipeta aforada.

Se llevan a un matraz aforado de 10 mL


y se enrasa con fase móvil.

Se agita el matraz para homogeneizar la


disolución.
DETERMINACIÓN DE CAFEINA Y ACIDO BENZOICO EN BEBIDAS REFRESCANTES
MEDIANTE HPLC
FUENTES MAVIS 4-778-2106
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ANALÍTICA (228).
DISCUSION:
Concentración vs Área
Se realizaron disoluciones madre de cafeína y
1000 acido benzoico, luego estas disoluciones las
900 y = 17.626x - 11.26 utilizamos para preparar los patrones de
800 R² = 0.9936 concentraciones de 5, 10, 20, 30, 40 y 50 ppm;
700
estos se inyectaron e imprimieron en el mismo
orden, observándose las áreas de la cafeína y
600
acido benzoico para cada concentración como
área

500 muestra la Tabla 1; a partir de los resultados de


400 los cromatogramas, se puede destacar que las
300 áreas de los picos incrementaban en forma
proporcional al aumento de las concentraciones de
200 y = 9.3486x - 18.272 los patrones. Esto es de esperarse, ya que, el área
100 R² = 0.9826
debajo de cada pico es proporcional a la
0 concentración de ese componente en la muestra
0 20 40 60 original.
Concentración (ppm) Para establecer el modelo matemático lineal se
graficó el área de picos vs. concentración de
Gráfica 1. Concentración vs área de los cafeína y acido Benzoico en ppm donde se
patrones de cafeína y acido benzoico. observa las ecuaciones de la recta para cada caso,
tal como se puede observar en la gráfica 1. La
ecuación de la recta obtenida para la cafeína fue
Tabla 2. Datos de las bebidas refrescantes.
y=17.626x-11.26, con un R² = 0,9936; y para el
Concentración
Bebida área (ppm) ácido benzoico fue de y=9.3486x-18.272, con un
Coca- cola normal 56.74 2.58 R2 = 0.9826. El estadístico R2 indica que el modelo
Coca- cola light 31.02 1.12 ajustado explica un % de la variabilidad en la
variable dependiente (señal analítica), según
Curva de calibración de la cafeína: Harvey, (2009).
y = 17.626x – 11.26, R² = 0.9936 En la Tabla 2 se muestra el área y la concentración
ppm que se obtuvo mediante la curva de
 Coca- cola normal:
calibración de la cafeína en la Coca cola normal y
𝑦 − 𝑏 (56.74) − (11.26) de la Light.
𝑥= =
𝑚 (17.626)
Según Borfitz, (2009) el grado de retención de los
𝑥 = 2.58 componentes de la muestra depende de la
 Coca- cola light: naturaleza del compuesto, de la composición de la
fase estacionaria y de la fase móvil. El tiempo que
𝑦 − 𝑏 (31.02) − (11.26)
𝑥= = tarda un compuesto a ser eluido de la columna se
𝑚 (17.626) denomina tiempo de retención y se considera una
𝑥 = 1.12 propiedad identificativa característica de un
compuesto en una determinada fase móvil y
estacionaria.
DETERMINACIÓN DE CAFEINA Y ACIDO BENZOICO EN BEBIDAS REFRESCANTES
MEDIANTE HPLC
FUENTES MAVIS 4-778-2106
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIRIQUI, FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y EXACTAS, ESCUELA DE QUÍMICA, CURSO DE QUÍMICA
ANALÍTICA (228).
La utilización de presión en este tipo de 2. ¿Cómo se puede predecir el orden de
cromatografías incrementa la velocidad lineal de elusión de los analito en cromatografía
los compuestos dentro la columna y reduce así su en fase inversa en función del pKa de los
mismos?
difusión dentro de la columna mejorando la
R/.
resolución de la cromatografía. Los disolventes BIBLIOGRAFÍA:
más utilizados son metanol, acetonitrilo y agua la
cual puede contener tampones, sales, o  Harvey, P. 2009. Química analítica
compuestos como el ácido trifluoroacético, que moderna, sexta edición. Editorial McGraw-
ayudan a la separación de los compuestos. Hill, México.
 Harris, D.C. (2008). Análisis químico
Las bebidas que contienen cafeína, como el café, cualitativo. Editorial Pearson, México.
el té, algunas bebidas no alcohólicas  Borfitz, V. (2009). Química analítica
(especialmente los refrescos de cola) y las bebidas
descriptiva. Séptimas edición. Editorial
energéticas gozan una gran popularidad, ya que
contienen cafeína, sustancia psicoactiva más McGraw-Hill, España
ampliamente consumida en el mundo. (GIL, 2010).  Ángeles Méndez (2011). “Cromatografía
liquida”. Obtenido en línea, el 31 de octubre
CONCLUSIÓNES:
del 2017, en
 Se logró entender el funcionamiento de http://quimica.laguia2000.com/general/crom
cada parte de equipo HPLC. atografia-liquida
 Desarrollamos el análisis obteniendo el  Inmaculada Angurell, et al (2010).
área de cafeína y acido benzoico de cada “Cromatografía”. Obtenido en línea, el 31 de
patrón. octubre del 2017, en
 Determinamos el contenido de cafeína y http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/c
ácido benzoico presente en una bebida de romatografia_fonament.html
Cola “light”.  GIL, A. (2010).“Cromatografía liquida para
 Obtuvimos resultados de alta resolución y la composición y calidad nutritiva de los
son fáciles de leer, y las pruebas se alimentos”. Obtenido en línea, el 31 de
reproducen con facilidad a través del octubre del 2017, en
proceso automatizado. http://plinios.tripod.com/cromatografialiquida
.htm
CUESTIONARIO:
1. ¿Se puede ver modificado el espectro de
absorción UV de un compuesto en
función del pH?
R/. Los disolventes orgánicos pueden tener una
significativa absorción de UV, por lo que no todos
los disolventes son adecuados para su uso en
espectrometría UV. La polaridad y el pH del
disolvente pueden afectar la absorción del espectro
de un compuesto orgánico. La tirosina, por
ejemplo, aumenta su máximo de absorción y su
coeficiente de extinción molar cuando aumenta el
pH de 6 a 13, o cuando disminuye la polaridad de
los disolventes.

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