REPORTE LABORATORIO BIOPROCESOS

PRACTICA LABORATORIO N° 1 Y 2
RECONOCIMIENTO DE MORFOLOGIAS MICROBIANAS
CUANTIFICACION RENDIMIENTOS CULTIVO BATCH

Integrantes Grupo: Grupo Lab: 102

1. Laura Vargas
2. Eveline
3. Angie Natalia Morales
4. Laura Camila Caballero

CONCEPTOS PREVIOS

1. Identificación morfológica (macroscópica y microscópica)

A partir de las cajas Petri (microorganismos crecidos) que el docente asigno, se describió cada una
de las morfologías observadas bajo Coloración Gram, soportando porque son Gram positivas o Gram
negativas y las estructuras de los hongos filamentosos observados.

Tabla 1. Identificación morfológica macroscópicamente de bacteria, levadura y hongo filamentoso

(correspondiente al grupo VARGAS 102).

MACROSCÓPICAS

Bacteria: Se observan colonias

pequeñas, posee un
pigmento de color crema
amarillo naranja, sus
STAPHYLOCOCCUS AUREUS
colonias son
aproximadamente de 1 a 3
mm de diámetro, levemente
elevadas, de forma circular, bordes redondeados,
superficie lisa y convexa además de brillante.

LEVADURA Colonias pastosas,

constituidas en su mayor
parte por células aisladas
que suelen ser esféricas,
ovoides, elipsoides o
alargadas de color durazno piel.
Hongo Filamentoso: De tipo micelial
caracterizada por la
producción de abundante
FUSARIUM SP micelio aéreo, algodonoso,
con una coloración
variable, de blanco a rosado
durazno además de tener
sus esporas en forma de media luna.

Tabla 2. Identificación morfológica microscópicamente de bacterias, levadura y hongos filamentosos

(correspondiente de cada grupo exceptuando la levadura).

MICROSCÓPICAS

Bacterias :

STAPHYLOCOCCUS AUREUS Son cocos Gram positivos, se

observa asociación en racimos
irregulares (similar aún
racimo de uvas, para esto se
divide en tres planos), tiene
una forma esférica y un
diámetro aproximadamente de una micra,
carecen de flagelos, no producen esporas no
presenta movilidad ni forma cápsula.

SERRATIA MARCESCENS Son bacilos Gram negativo,

anaerobios facultativos
móviles.

MICROCOCCUS LUTEUS Es una especie de bacteria

Gram positiva. Se trata de
una bacteria saprófita.
Posee una morfología de
coco (esférico) tienen de
0.5 a 3.5 micrómetros de
diámetro y generalmente están dispuestos en
 tétradas o racimos
irregulares es una bacteria
aerobia obligada no
móviles

BACILLUS CEREUS Es un
microorganismo
Gram-positivo, con
forma de bastón
alargado (bacilos),
de 1,3 mm de
diámetro por 3 a 5 mm de largo con bordes
redondeados, que forman cadenas cortas. Se
observan esporas cilíndricas subterminales,
aerobio facultativo, es esporulado formador de
esporas centrales forma elipsoide y al formarse en
el interior de la célula dan lugar al hinchamiento
de esta, la mayoría son móviles.

LEVADURA: Células en forma

ovaladas de color
morado, no móviles

Hongos filamentosos:

BOTRYTIS SP la organización de las esporas en forma de

racimos, se puede destacar micelio (el
crecimiento hifal es en forma ramificada, las
extensiones suceden en el ápice hifal, donde
germinan las esporas), conidióforos (se presentan
en formas libres, formando estructuras delgadas
y del tipo ramificado), conidias (hialinas o
levemente coloreadas, unicelulares, ovoides o
 esférica) y esclerocios (por
filamentos de micelio
entrelazado)

RHIZOPUS SP Hifas gruesas y

aseptadas, presenta un
micelio macrosifonado (
entre

5 – 10µm), hialino,
cenocítico, en los puntos en donde se conectan los
esporangióforos(son largos y no se ramifican) y
los estolones que presentan, se forman rizoides,
un esporangio, con una columela oval y gran
cantidad de esporangiosporas Azul.

Fiálides(es
generalmente fina, con
FUSARIUM SP forma de botella; simple
o ramificada; cortas o
largas), macroconidias
fusiformes con septos transversales presentan
forma de medialuna, hialinos y septados y
microconidias elipsoidales acumuladas en la
punta de la fiálide formando falsas cabezas. Hifas
hialinas septadas y delgadas, fiálides y
microconidias formando acúmulos.

TRICHODERMA SP Los conidióforos son

erectos, hialinos, en su
mayoría ramificados, no
verticilados, los cuales
pueden ser solitarios o en grupos. Los fiálides son
en forma de botella únicas o en grupos, hinchadas
en la región central pero delgadas hacia el ápice,
son hialinas.
 2. Cuantificación de rendimientos de un cultivo Batch de saccharomyces Cerevisiae

Tabla 3. Fermentación grupo VARGAS 102

Tiempo

Fermentación Densidad Biomasa (g) pH °Brix Tipo de Temperatura

(g/ml) agitación (°C)

1.0317 Tubo 1: 0.0428 5.989 3.5 Estático 28.2

Inicial Tubo 2: 0.0429
Tubo 3: 0.0421
Biomasa : 0.0426

1.0045 Tubo 1:0.0551 4.489 1.67 Estático 28.2

Final Tubo 2:0.0655
Tubo 3: 0.0523
Biomasa: 0.0576

Tabla 4. Fermentación del grupo LOPEZ 105

Tiempo

Fermentación Densidad Biomasa (g) pH °Brix Tipo de Temperatura

(g/ml) agitación (°C)

1,2084 Tubo 1: 0,1585 5,8 3,33 dinámica 28.2

Inicial Tubo 2: 0,1582
Tubo 3: 0,1616
Biomasa: 0,1594
1,05 Tubo 1: 0,2269 4,171 1,23 dinámica 28.2
Final Tubo 2: 0,2792
Tubo 3: 0,3481
Biomasa: 0,2847

3. Soporte de cálculos

 Para la masa de la levadura Saccharomyces Cerevisiae: levadura liofilizada panaria- levadura

industrial.
 𝑔 1𝐿
10 ( ) ∗ (100 𝑚𝑙) = 1 𝑔 𝑆𝑎𝑐𝑐ℎ𝑎𝑟𝑜𝑚𝑦𝑐𝑒𝑠 𝐶𝑒𝑟𝑒𝑣𝑖𝑠𝑖𝑎𝑒
𝐿 1000 𝑚𝑙

1. Determinación de la densidad
𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑝𝑖𝑐𝑛𝑜𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 𝑙𝑙𝑒𝑛𝑜(𝑔) − 𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑝𝑖𝑐𝑛𝑜𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 𝑣𝑎𝑐𝑖𝑜(𝑔)
𝐷𝑒𝑛𝑠𝑖𝑑𝑎𝑑 =
𝑣𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑝𝑖𝑐𝑛𝑜𝑚𝑒𝑡𝑟𝑜 (𝑚𝑙)

 Tiempo inicial:
45.9910 𝑔 − 20.1971 𝑔 𝑔
𝐷𝑒𝑛𝑑𝑖𝑑𝑎𝑑 (𝑇. 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙) = = 1.0317
25 𝑚𝑙 𝑚𝑙

 Tiempo final:
44.6924 𝑔 − 19.5788 𝑔 𝑔
𝐷𝑒𝑛𝑑𝑖𝑑𝑎𝑑 (𝑇. 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙) = = 1.0045
25 𝑚𝑙 𝑚𝑙

2. Biomasa
Tabla 5. Datos de los pesos de tubos vacíos y con Biomasa, en tiempo inicial y final.

Tiempo Inicial Tiempo Final

Tubos vacíos Tubos con Biomasa Tubos vacíos Tubos con Biomasa
(g) (g) (g) (g)
Tubo 1 5.4294 5.4722 5.4919 5.5470
Tubo 2 5.4071 5.4500 5.5142 5.5797
Tubo 3 5.5027 5.5448 5.4704 5.5227

𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 = 𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑡𝑢𝑏𝑜 𝑐𝑜𝑛 𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 − 𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑡𝑢𝑏𝑜 𝑣𝑎𝑐𝑖𝑜

 Tiempo inicial:
𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑇𝑢𝑏𝑜 1 (𝑇. 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙) = 5.4722 𝑔 − 5.4294 𝑔 = 0.0428 𝑔

𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑇𝑢𝑏𝑜 2 (𝑇. 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙) = 5.4500 𝑔 − 5.4071 𝑔 = 0.0429 𝑔

𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑇𝑢𝑏𝑜 3 (𝑇. 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙) = 5.5448 𝑔 − 5.5027 𝑔 = 0.0421 𝑔

Para obtener la biomasa inicial se promedia la de los 3 tubos:

0.0428 𝑔 + 0.0429 𝑔 + 0.0421 𝑔

𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 = = 0.0426 𝑔
3
 Tiempo final:
𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑇𝑢𝑏𝑜 1 (𝑇. 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙) = 5.5470 𝑔 − 5.4919 𝑔 = 0.0551 𝑔
 𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑇𝑢𝑏𝑜 2 (𝑇. 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙) = 5.5797 𝑔 − 5.5142 𝑔 = 0.0655 𝑔

𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑇𝑢𝑏𝑜 3 (𝑇. 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙) = 5.5227 𝑔 − 5.4704 𝑔 = 0.0523 𝑔

Promedio para la biomasa final:

0.0551 𝑔 + 0.0655 𝑔 + 0.0523 𝑔

𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 = = 0.0576 𝑔
3
3. Determinación del pH: se obtuvo por medio del pH-metro a partir de 4 ml de cultivo

4. Determinación de °Brix: se realizaron 3 mediciones en el pH-metro. Este representa los

solido disueltos (glucosa) por cada 100 g del medio de cultivo

Tabla 6. Datos de °Brix medido en el refractómetro digital.

Tiempo inicial Tiempo final

°Brix °Brix
3.7 1.6
3.3 1.8
3.5 1.6

Realizando un promedio se obtuvo:

3.7 + 3.3 + 3.5 3.5 𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎

°𝐵𝑟𝑖𝑥 (𝑇. 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙) = =
3 100 𝑔 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑐𝑢𝑙𝑡𝑖𝑣𝑜

1.6 + 1.8 + 1.6 1.67 𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎

°𝐵𝑟𝑖𝑥 (𝑇. 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙) = =
3 100 𝑔 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑐𝑢𝑙𝑡𝑖𝑣𝑜

5. Calculo del rendimiento (YX/S): en donde se va a formar más etanol que biomasa, por estar
en condiciones aerobias.

 para la determinación de la masa de sustrato:

°𝐵𝑟𝑖𝑥 (𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎) 𝑔 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 (𝑔 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑖𝑛𝑜𝑐𝑢𝑙𝑜) = ∗𝜌 ∗ 100 𝑚𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
100 𝑔 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑚𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜

 Tiempo inicial:
 3.5 𝑔 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑔 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 (𝑇. 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙 ) = ∗ 1.0317 ∗ 100 𝑚𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
100 𝑔 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑚𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜

𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 (𝑇. 𝑖𝑛𝑖𝑐𝑖𝑎𝑙) = 3.6109 𝑔 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑖𝑛𝑜𝑐𝑢𝑙𝑜

 Tiempo final:
1.6 𝑔 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑔 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 (𝑇. 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙 ) = ∗ 1.0045 ∗ 100 𝑚𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜
100 𝑔 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑚𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜

𝑀𝑎𝑠𝑎 𝑠𝑢𝑠𝑡𝑟𝑎𝑡𝑜 (𝑇. 𝑓𝑖𝑛𝑎𝑙) = 1.6072 𝑔 𝑔𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑖𝑛𝑜𝑐𝑢𝑙𝑜

 Para la determinación del rendimiento:

𝑋𝑓 − 𝑋𝑖
𝑌𝑥 =
𝑠 𝑆𝑖 − 𝑆𝑓

Se parte del promedio de las biomasas y la determinación de las masas de sustrato, para tiempo inicial
y tiempo final:

0.0576 𝑔 𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝐹. −0.0426 𝑔 𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝐼.

𝑅𝑒𝑛𝑑𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑌𝑥 = ∗ 100
𝑠 3.6109 𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 − 1.6072 𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎

𝑔 𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑌𝑥 = 0.74862
𝑠 𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑖𝑛𝑜𝑐𝑢𝑙𝑜

 Rendimiento de biomasa del grupo LOPEZ 105.

0.2847 𝑔 𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝐹. −0.1594 𝑔 𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎 𝐼.

𝑅𝑒𝑛𝑑𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑌𝑥 = ∗ 100
𝑠 4,02394 𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 − 1,29156 𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎

𝑔 𝐵𝑖𝑜𝑚𝑎𝑠𝑎
𝑅𝑒𝑛𝑑𝑖𝑚𝑖𝑒𝑛𝑡𝑜 𝑌𝑥 = 0.04586
𝑠 𝑔 𝐺𝑙𝑢𝑐𝑜𝑠𝑎 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑖𝑛𝑜𝑐𝑢𝑙𝑜