Grupo 2: Santiago Martínez, Geovanny Ibarguen, Valentina Paredes.

Grupo 2
10. Recuento de microorganismos.
El recuento en placa, es un método de recuento de células viables, las cuales son capaces de
dividirse y orginiar descendencia. Es un método muy utilizado cuando se necesita determinar
el tamaño de la población bacteriana de una muestra. Este método permite determinar la
cantidad total de bacterias que poseen la enzima beta-glucuronidasa (GUD) cuya acción se
pone de manifiesto sobre el indicador cromogénico del medio de cultivo al producirse un
cambio de pH.

El recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollará una
colonia visible. Pero debido a que una muestra no es totalmente homogénea con respecto a
su composición microbiológica, es posible que una colonia se origine de un microorganismo
o de cientos de ellos, dando en este último caso un recuento menor del real.

También es posible que muchas de las bacterias presentes en la muestra no puedan crecer en
las condiciones elegidas (pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo, etc.). En este caso el
recuento también será inferior al real. Lo que si se sabe es que cada colonia observada se
formó a partir de por lo menos un microorganismo.

Esta es una condición necesaria y suficiente. Entonces la colonia es considera una unidad
formadora de colonia (ufc) a los efectos de los cálculos. Se admite, por lo tanto, que en los
métodos de recuento de microorganismos vivos, son inevitables los errores. Especialmente
cuando se examinan muestras pequeñas, es posible cometer grandes errores

Hay dos modalidades de siembra:

1. En superficie (siembra por extensión): un volumen de la muestra (0,1 ml) se

coloca sobre la superificie de la placa que contiene el medio y se extiende con
ayuda de un asa de extensión.
2. En prfundidad (siembra por vertido en placa): la muestra se mezcla con el
medio de cultivo y se vierte en la placa esteril. Permite inocular volúmenes mayores
de la muetra.

En la mayoría de los casos antes de realizar la siembra las muestras tienen que diluirse
(diluciones seriadas).
Una vez inoculadas, las placas se incuben a la temperatura adecuada y cuando aparecen,
se cuentan las colonias. Normalmente, una celula origina una colonia, pero con el fin de
evitar errores a la hora de dar el resultado se suele hablar de Unidades Formadoras de
Colonias (UFC), en lugar de células. El resultado se expresa como UFC/ml.

11. Expresión de los resultados.

Siembra en placa Petri con un medio de cultivo apropiado, al que se le añade un extracto
de la muestra a diferentes diluciones. Una incubación de la placa durante 48 ± 2 h a 37 ±
1ºC provoca el crecimiento de los microorganismos presentes en la muestra.

El recuento directo de los microorganismos y el cálculo a realizar en función de la

cantidad de muestra sembrada permitirá expresar el resultado como colonias por gramo.
Para los cálculos, se utilizan las placas que se ha efectuado el recuento, y se multiplican
por el inverso de la dilución y se expresan el resultado como Unidades Formadoras de
Colonias por g de alimento (UFC/g).

Para los resultados se utiliza la Media del número de colonias típicas en las dos placas x
inverso de la dilución x 10 = UFC/g o UFC/mL

𝑁 = 𝐶 𝑥 𝐷 𝑥 10

donde:

N= Unidades formadoras de colonia por gramo de muestra (UFC/g o UFC/mL).

C= Media del número de colonias en las dos placas.

D= Factor o inverso de la dilución.

12. Cuestionario

- ¿Qué efectos en los seres humanos la presencia de E. Coli?

- ¿Cómo se puede prevenir la infección causadas por E. Coli?
- ¿Cómo se realiza la desinfección y cuáles son los agentes que consiguen esta acción?
- ¿Cuáles son las condiciones de utilización de los desinfectantes?
- ¿Los métodos químicos de la desinfección en que se basan y cómo pueden emplearse?
- ¿Por qué la limpieza inicial del objeto es fundamental?
 - ¿Qué permite determinar el estudio cuantitativo de bacterias?
- ¿Qué tipo de muestras se pueden analizar? Ejemplifique.

Bibliografia.

- López, L., Torres, C. (2006). Estudio cuantitativo de bacterias. Recuperado de:

http://www.biologia.edu.ar/microgeneral/tp5.pdf
- Martin, I. Recuento en placa. Recuperado de:
http://www.diversidadmicrobiana.com/index.php?option=com_content&view=articl
e&id=464&Itemid=526
- FEDNA. (2000). Escherichia coli (Recuento en placa). Recuperado de:
http://www.fundacionfedna.org/tecnicas_de_analisis/escherichia-coli-recuento-en-
placa