PLAN DE INVESTIGACIÓN

I. Antecedentes y justificación

Realidad problemática:

La tendencia en los microorganismos es crecer y desarrollarse, gran parte de ellos

usan como mecanismo la división celular, sin embargo, para que se dé un
crecimiento y desarrollo exitoso, es necesario tomar en cuenta la nutrición
microbiana, esta suele estar compuesta principalmente por carbono y nitrógeno,
mientras que los micronutrientes, vitaminas y elementos trazas suelen ser muy
relativos y variar de acuerdo a lo que se desea lograr.

El carbono puede ser suministrado y a su vez asimilado en diversas formas, según

Helen M. Wallace et al., diversas bacterias del suelo pueden tomar carbono a partir
de un derivado de carbono estable vegetal y/o animal denominado biochar, además
de carbono pirogénico encontrado en la misma área para la obtención de energía y
material celular1, Según Shang L. et al. se reporta que el metabolismo del carbono
no solo jugaría un papel en la obtención de energía sino también en la colonización
de plantas por parte de la bacteria Pantoea alhagi LTYR-11Z aportando resistencia
a las sequías 2. Trabajos previos han establecido la clasificación de heterótrofos
para aquellos que toman el carbono de una fuente orgánica y autótrofos para
fuentes inorgánicas3.

El nitrógeno el metabolizado por las bacterias llega a formar parte de las proteínas,
ácidos nucleicos y en cierta forma las paredes y membranas celulares. De manera
similar al carbono este elemento también puede ser obtenido de diversas formas, la
más común es mediante la fijación en suelo, Xingang Zhou et al. menciona en
estudios realizados sobre la composición bacteriana del suelo en donde se cultiva
alcachofa de Jerusalén, la presencia de consorcios microbianos productores de
reductasas del óxido nítrico y nitroso, además de las clásicas enzimas nitrito y nitrato
reductasa que permiten la captación de nitrógeno e integración en el ciclo de
nitrógeno4.
Por otra parte, la fuente de nitrógeno puede jugar un papel importante en la
captación de micronutrientes, según Wang JJ. et al. diversas fuentes de nitrógeno
tienen un impacto en la capacidad de solubilización y captación de fosfatos por parte
de la bacteria Pantoea sp en rizosfera5. Así como también en la producción de
bioenergía mediante la emisión de óxido nitroso por parte de Nitrosospira sp. En
suelos tropicales según Lourenço KS et al6.

El nitrógeno también puede ser captado a partir de los aminoácidos, suministrados

en el medio, Federica Cardinali et al. menciona que la biota bacteriana presente en
embutidos, pueden tomar los aminoácidos de la carne presente en esta y asimilarlos
como fuente de nitrógeno, mediante un proceso de reducción a nitratos y nitritos7.
Algo similar fue reportado por Galván A. et al. mediante estudios en una relación
mutualista entre Chlamydomonas y Methylobacterium spp en donde estas algas
proporcionaban aminoácidos que eran asimilados como fuente de nitrógeno por
parte de Methylobacterium spp, quien a su vez producía nitrógeno inorgánico que
era asimilado favorablemente por Chlamydomonas8.

Los alcaloides son considerados compuestos nitrogenados orgánicos a menudo con

nitrógeno unido heterocíclicamente, que se deriva del metabolismo de los
aminoácidos9. Debido a las variaciones estructurales, su basicidad varía mucho, e
incluso se han descrito alcaloides neutros, algunos alcaloides son clasificados por
el sistema de anillo heterocíclico que poseen peor algunos autores prefieren la
clasificación a partir del aminoácido que les da origen como en el caso de los
alcaloides de indol que se producen a partir del triptófano10.

Según Kimberly R.Klas et al. algunos alcaloides indolicos con anillo biciclico
derivados del triptófano son producidos como metabolitos fúngicos11, los estudios
previos por Zurina Hassan et al. confirman que el principal genero de hongos
productor de alcaloides es Psilocybe, que contiene psilocibina como alcaloide, el
cual es metabolizado a Psilocina en humanos, considerada psicoactiva 12.
Tittarelli R. et all. Menciona que la Psilocibina al ser considerado un alcaloide
indolico posse una estructura de triptamina como esqueleto, la estructura en
concreto se compone de un anillo de benceno y un anillo de pirrol, con la adición de
una cadena lateral de 2 carbonos, además de un grupo fosforilo y dos moléculas de
nitrógeno, conformando el anillo característico de su estructura y una de sus
cadenas lo que hace a este alcaloide una molécula capaz de proporcionar una
fuente de nitrógeno y/o carbono 13.

En la actualidad Fricke J et al. propone el mecanismo o base enzimática de la

biosíntesis de Psilocibina como producto natural derivado de la triptamina
psicotrópica de Psilocybe en donde PSID, representa una nueva clase de
descarboxilasas L-triptófano fúngicas, PsiK, cataliza la etapa de transferencia del
grupo fosforilo, Psim metiltransferasa, cataliza la transferencia de nitrógeno dentro
del N-metilo y PsiH, una monooxigenasa. en una reacción combinada PsiD / PsiK /
PsiM, la Psilocibina se sintetizó enzimáticamente en una ruta económica de 4-
hidroxi-l-triptófano14.

Durante los últimos años se ha descubierto que la interacción entre diversos tipos
de alcaloides y bacterias puede resultar en muchas situaciones en un efecto
favorable para el crecimiento y desarrollo de estas, si consideramos como ejemplo
a dos de los alcaloides comercialmente más conocidos como son la nicotina y la
cafeína, se puede encontrar una mejora en la relación sinérgica de Streptococcus
mutans y Candida albicans a partir de la nicotina, Streptococcus mutans y Candida
albicans son microorganismos que pueden llegar a encontrarse en la cavidad oral
humana. La relación sinérgica entre estas dos especies ha sido profundamente
explorada en muchos estudios, mediante un modelo de biofilm de estas dos
especies se estudió la cantidad de biomasa en biofilm, estructuras en biopelícula,
síntesis de polisacáridos extracelulares (EPS) y expresión de glucosiltransferasas
(Gtfs), obteniéndose como resultado que la formación de biofilm, el número de
células bacterianas y fúngicas en los biofilms de doble especie aumentó en
presencia de nicotina15.
Además, se encontró que en algunas otras especies del género Pseudomonas,
tienen la capacidad de usar la nicotina como única fuente de nitrógeno y carbono
para su crecimiento, esto es debido a la presencia de la enzima nicotina
oxidorreductasa que emplea Pseudomonas putida, estudios publicados muestran
como Pseudomonas putida es eficiente en la degradación y asimilación de este
alcaloide, alcanzado valores de eficiencia de degradación de hasta 3.3 g/l, 40h. De
forma similar Arthrobacter nicotinovorans también es capaz de crecer
eficientemente en un medio con nicotina como fuente carbono y nitrógeno 16.

En cuanto a la cafeína, se encontró que la especie Paraburkholderia caffeinitolerans

sp. nov., aislada de una muestra de suelo de plantaciones de té tenía la capacidad
para degradar cafeína, utilizando así la cafeína como única fuente de carbono y
nitrógeno para el crecimiento y desarrollo y consecuentemente producción de
biomasa, el nitrógeno presente en la estructura química es llevado hasta nitrato en
los procesos de asimilación, mediante pruebas bioquímicas que la actividad de la
ureasa este presente, las actividades de oxidasa, catalasa y amilasa están
ausentes, así también se determinó valores positivos para la hidrolisis de gelatina y
la producción de indol17.

Otros alcaloides no tan conocidos se han visto involucrados en la relación

crecimiento y desarrollo, como en el caso de Alcaloides β-carbolina los cuales son
la base para el efecto antagónico entre Bacillus species (T42) aisaldo desde la
rizosfera de Coffe arabica L y las especies Colletotrichum gloeosporioides, Fusarium
oxysporum, los cuales son productores de estos alcaloides β-carbolina que
metaboliza Bacillus para su beneficio y posterior efecto antagonico 18. El ácido
neoaspergílico también se vio involucrado en esta relación crecimiento y desarrollo
cuando se probaba el efecto de alcaloides producidos por Aspergillus sclerotium y
Penicillium citrinum, en donde de forma opuesta aumentó el crecimiento de la
formación y biofilm de Staphylococcus aureus en camarones19.
La especie Pseudomonas putida además de tener una alta eficiencia y capacidad
para usar nicotina como fuente de carbono y nitrógeno tiene un potencial
considerable para aplicaciones biotecnológicas, particularmente en las áreas de
biorremediación, biocatálisis, como agentes de control biológico en la protección de
plantas y para la producción de nuevos bioplásticos20. Pseudomonas putida al ser
un microorganismo metabólicamente muy versátil y actualmente se aplica en
diversos campos además del potencial metabólico de esta bacteria, la capacidad de
P. putida KT2440 para colonizar la rizosfera de plantas de cultivo puede facilitar el
desarrollo de bioplaguicidas y promotores de crecimiento de plantas21.

El género Pseudomonas dentro de las gamma-Proteobacteria, constituye un amplio

grupo de bacterias muy diversas presentes en multitud de entornos del suelo,
acuáticos, así como en plantas y animales, esta ubicuidad refleja una capacidad
muy desarrollada para adaptarse a ambientes contaminados o sin contaminar, con
condiciones fisicoquímicas diferentes y en continuo cambio debido a que han
desarrollado mecanismos para aprovechar el nitrógeno de compuestos que lo
tengan en su composición, cuando las fuentes más fácilmente asimilables son
escasas. Mediante una aproximación de genómica funcional, se caracterizó el
sistema NtrC como el regulador global que controla la asimilación de distintas
fuentes de nitrógeno. NtrC no solo actúa activando rutas de asimilación de fuentes
alternativas de nitrógeno, cuando este elemento se encuentra limitante en el medio,
sino también es capaz de actuar reprimiendo de forma directa o indirecta, la
expresión de algunos genes implicados en el metabolismo de carbono 22.

Por lo tanto, la amplia capacidad de asimilación de compuestos nitrogenados para

aprovechar el nitrógeno y lograr así un crecimiento adecuado nos da la posibilidad
de probar diversas fuentes de nitrógeno, más allá de los convencionales
aminoácidos, por comparación con estudios realizados anteriormente en donde se
aplicó nicotina en concentraciones de 1.8 g /l como única fuente de carbono y
nitrógeno para evidenciar la asimilación realizada por Pseudomonas putida8 se ha
creído conveniente evaluar el efecto de la Psilocibina a concentraciones de 0.5%,
1% y 1.5% en el crecimiento de Pseudomonas putida.
Justificación:

Debido a la capacidad de diversas bacterias, en especial Pseudomonas putida para

producir metabolitos de interés económico y aplicaciones en diversos campos como
biorremediación y agricultura, que en la actualidad están sumando mucho interés
por el beneficio económico que aportan y la contribución amigable con el medio
ambiente, se propone aplicar Psilocibina como fuente nitrógeno para estimular el
crecimiento de Pseudomonas Putida, ya que la Psilocibina por su similitud
estructural con el triptófano y además mayor proporción de carbonos, sumado a su
alta sensibilidad de degradación, se presenta como una buena alternativa de factor
estimulante del crecimiento, pudiendo facilitar la obtención de nitrógeno y fosforo
con un menor gasto de energía a comparación de fuentes convencionales,
repercutiendo así en la efectividad del mismo de tal manera que se pueda acortar
el tiempo de producción de biomasa y así optimizar costos en futuros procesos,
obteniendo de esta manera un mayor beneficio. Por tal razón, el objetivo de esta
investigación es determinar el efecto de la Psilocibina a concentraciones de 0.5%,
1% y 1.5% en el crecimiento de Pseudomonas putida en condiciones de laboratorio.

Problema:

¿Cuál es el efecto de la Psilocibina a concentraciones de 0.5%, 1% y 1.5% en el

crecimiento de Pseudomonas putida?

Variables:

V.D: Crecimiento de P. putida

V.I: Concentraciones de 0.5%, 1% y 1.5% de Psilocibina

Hipótesis:

A medida que se incrementa la concentración de Psilocibina de 0.5% - 1.5% se

incrementa el crecimiento de Pseudomonas putida
  Gallardo Paredes Denis R.
 Lavado Enco Alessandra S.

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