ABSTRAK

Agen antijamur Azole mengganggu sintesis jamur ergosterol yang penting

untuk pembentukan jamur membran sel dengan mencegah enzim 14-α-
demethylase dari mengikat ke substratnya. Clotrimazole adalah salah satunya
generasi pertama agen antijamur azol. Untuk menemukan agen antijamur azole
baru, turunan bifenil disintesis bersama dengan klotrimazol dengan sintesis linier
multistep. Struktur azole yang disintesis agen telah divalidasi oleh analisis
spektral dan aktivitas antijamur potensial dari kedua senyawa tersebut ditentukan
pada ragi, E.coli dan M.luteus dengan menggunakan metode difusi cakram.
Clotrimazole dan bifenilnya derivatif aktif terhadap ragi tetapi senyawa baru
menghasilkan aktivitas kurang dari clotrimazole. Efek antibakteri tidak diamati
untuk agen azol.
Kata kunci: Clotrimazole, derivatif bifenil, antijamur azole

PENGANTAR
Azole antijamur, termasuk clotrimazole, bertindak sebagai inhibitor ke
jalur sintetis ergosterol jamur. Ergosterol adalah senyawa penting untuk sel jamur
integritas dinding dan mengharuskan kelompok metil C-14 sterol untuk dihapus
jika ingin mempertahankan integritasnya dan fungsi normal. Antifungi Azole
menargetkan protein haeme, yang merupakan situs katalitik aktif dari 14- Enzim
α-demethylase (CYP51) yang mengkatalisis 14-α- demetilasi lanosterol dalam
ergosterol rute sintetis. Penghambatan 14-α-demethylase enzim menyebabkan
akumulasi demethylated senyawa, sehingga menghasilkan kematian sel jamur
[1 - 3]. Clotrimazole adalah, salah satu generasi pertama obat azole, pertama kali
diperkenalkan oleh Bayer Ag (Jerman) pada tahun 1967. Sejak saat itu senyawa
ini telah dipelajari secara ekstensif. Clotrimazole memiliki spektrum aktivitas
yang luas dan efektif terhadap Spesies Candida dan Aspergillus.
Karena resistensi antijamur berkembang pada jamur dan lainnya faktor
terjadi yang mempengaruhi hasil infeksi jamur pengobatan, para ilmuwan
menemukan antijamur baru. SEBUAH jumlah studi hubungan struktur-aktivitas
agen antijamur telah dilakukan selama masa lalu tahun. Target utama dari
antijamur azole adalah CYP51 (14-α-demethylase) dari p450 enzim dan banyak
studi difokuskan pada struktur dibantu komputer pemodelan enzim ini dalam
kaitannya dengan aktivitas antijamur. Beberapa hubungan struktur-aktivitas studi
turunan azole dengan bantuan molekuler pemodelan situs aktif enzim CYP51 dan
mode pengikatan substrat menunjukkan konjugasi gugus aromatik, termasuk
bifenil dan residu pyrrolylphenyl, memberikan antijamur yang lebih baik aktivitas
karena interaksi sterik yang menguntungkan dalam rongga situs aktif enzim.
Juga, jika penarikan sebuah kelompok elektron ditempatkan dalam posisi
para kelompok fenil, kemudian aktivitas antijamur meningkat [6]. Dalam
penelitian ini kami bertujuan untuk merancang novel agen antijamur azole
berdasarkan inti clotrimazole struktur.
EKSPERIMENTAL
Umum : Semua reaksi dilakukan di bawah nitrogen. Konsentrasi pelarut dilakukan
pada Buchi rotary evaporator R-210. Kolom Flash kromatografi dilakukan pada
silika 40-60 μ, 60 Е dengan etil asetat dan bensin sebagai eluen kecuali ditentukan
sebaliknya. Titik lebur ditentukan oleh Stuart SMP11 apparatus. Spektrum IR
diperoleh pada Varian 800 FT-IR. 1H dan 13C NMR spektra diperoleh pada
BRUKER AVANCE-300 dan JEOL ECS-400. Spektrum massa dicatat pada
Waters LCT-Premier ESI massa resolusi tinggi spektrometer.
Persiapan (2-chlorophenyl) diphenylmethanol (2)
Bromobenzene (1,6 g, 10,5 mmol) ditambahkan ke magnesium turnings (0,25 g,
10,5 mmol). Reaksinya campuran diaduk pada refluks dan kemudian di kamar
suhu selama 6 jam lebih. Keton (1) (1,5 g, 7 mmol) ditambahkan dan campuran
reaksi dibiarkan aduk pada suhu kamar untuk semalam. Itu Campuran reaksi
dipadamkan dengan jenuh larutan amonium klorida (30 mL). Aqueous lapisan
dipisahkan. Gabungan lapisan organik adalah dicuci dengan air dan dikeringkan
diatas MgSO4 lalu dihapus. Massa berminyak kuning kasar yang diperoleh adalah
dimurnikan dengan kromatografi flash untuk memberikan 0,75 g alkohol (2)
(hasil 36%) sebagai kristal putih. mp 83-850C (menyala 83 0C) [7]; Rf = 0,45; IR
(rapi) νmax / cm-1 3566, 3058, 1466, 1010; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ
(ppm): 7,40 (dd, 1H, J = 1.6, 8.8 Hz), 7.24-7.35 (m, 11H), 7.01 (dt, 1H, J = 1,2,
6,3 Hz), 6,70 (dd, 1H, J = 1,5, 6,3 Hz), 4,46 (s, 1H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3)
δ (ppm): 145,6, 143.8, 133.3, 131.4, 131.3, 128.9, 127.9, 127.7, 127.2, 126.3,
82.5; m / z calcd untuk C19H14Cl [M-OH] + 277.0784, ditemukan 277.0782.
Persiapan 1 - ((2-chlorophenyl) difenilmetil) - 1H-imidazole (4): Thionyl
chloride (0,82 g, 6,9 mmol) ditambahkan ke dalam larutan alkohol (2) (0,69 g, 2,3
mmol) dan campuran diaduk pada 0 0C selama 1 jam. Itu Campuran reaksi
dibiarkan pada pengadukan refluks untuk semalam. Pelarut organik diuapkan dan
residu dicuci dengan asetonitril (2 x 20 mL) sampai membeli senyawa (3) sebagai
massa berminyak kuning itu diajukan untuk reaksi lebih lanjut secara langsung
tanpa pemurnian dan penjelasan struktur. Imidazole (0,3 g, 4.4 mmol) dengan
Et3N (0,6 g, 6,6 mmol) ditambahkan kelarutan senyawa (3) (0,7 g, 2,2 mmol). Itu
Campuran reaksi dibiarkan pada suhu kamar pada pengadukan refluks selama 72
jam. Pelarut organik adalah dihapus dan EtOAc (20 mL) dengan air (20 mL)
adalah ditambahkan ke residu. Lapisan berair itu diekstraksi dengan EtOAc (2 x
20 mL). Gabungan organik lapisan dicuci dengan air dan dikeringkan diatas
MgSO4 sebelum evaporasi. Produk mentah itu dimurnikan dengan kromatografi
flash untuk menghasilkan 0,69 g compound (4) sebagai kristal putih
(menghasilkan 91%). mp 130-133 0C; Rf = 0,37; IR (rapi) νmax / cm-1 3064,
1489, 1443, 1210, 750; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ (ppm): 7.48 (s, 1H), 7.41-
7.44 (m 1H), 7.32-7.37 (m, 7H), 7.26-7.29 (m, 1H), 7.19-7.23 (m, 4H), 7.07 (s,
1H), 6.92 (dd, 1H, J = 1,5, 6,3 Hz), 6,76 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3)
δ (ppm): 151,1, 150,5, 148,9, 144,5, 140,3, 138,0, 137,7, 137,3, 135,5, 135,2,
135,1, 133,8, 127,0, 68,9; m / z calcd untuk C19H14Cl [M-Imid] + 277.0784,
ditemukan 277.0780.
Persiapan [1,1'-biphenyl] -4-yl (fenil) metanol (6): Bromobenzene (3,14 g,
20 mmol) ditambahkan ke magnesium turnings (0,48 g, 20 mmol). Reaksinya
campuran diaduk pada refluks, kemudian di kamar suhu selama 4 jam tambahan.
Aldehid (5) (1,82 g, 10 mmol) ditambahkan ke reaksi dan campuran yang tersisa
diaduk pada suhu kamar untuk semalam. Campuran reaksi dipadamkan dengan a
larutan amonium klorida jenuh (40 mL). Itu lapisan berair dipisahkan dan
diekstraksi dengan Et2O. Lapisan organik gabungan dicuci dengan air kemudian
dikeringkan di atas MgSO4 dan kemudian dihapus. Minyak mentah Kristal
kuning yang diperoleh dimurnikan dengan flash kromatografi untuk memberikan
1,34 g Alkohol (6) (73% hasil) sebagai kristal kuning yang lemah. mp 79-83 0C
(menyala 90-92 0C) [8]; Rf = 0,21; IR (rapi) νmax / cm-1 3256, 3028, 1487,
1016; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ (ppm): 7.57-7.60 (m, 3H), 7.28-7.49 (m,
10H), 5.92 (d, 1H, J = 3.0 Hz), 2,25 (d, 1H, J = 3,0 Hz); 13C NMR (100 MHz,
CDCl3) δ (ppm): 143,8, 142,9, 140,8, 140,5, 128,8, 128,6, 127,7, 127.4, 127.3,
127.2, 127.0, 126.6, 76.1; m / z calcd for C19H15 [M-OH] + 243.1174, ditemukan
243.1165.
Persiapan [1,1'-biphenyl] -4-yl (phenyl) metana (7): Larutan alkohol (6) (1
g, 3,8 mmol) ditambahkan ke pyridinium chlorochromate (1,2 g, 5,7 mmol) dan
celite (4 g) dan campuran reaksi diaduk pada refluks selama 3 jam pada suhu
kamar. Itu Campuran reaksi disaring dan dikumpulkan larutan organik
dikeringkan diatas MgSO4 dan terkonsentrasi untuk menghasilkan 1,11 g (100%
hasil) keton (7) sebagai kristal putih. mp 87-90 0C (lit 99-100 0C) [9], Rf = 0,47;
IR (rapi) νmax / cm-1 3052, 1643, 1597, 1445; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ
(ppm): 8,58-8,62 (m, 2H), 8.51-8.55 (m, 2H), 8.35-8.38 (m, 2H), 8.21-8.31 (m,
3H) 8,06-8,13 (m, 4H), 7,97-8,02 (m, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ
(ppm): 196,4, 145,3, 140,0, 137,8, 136,3, 132,4, 130,8, 130,1, 129,0, 128,4, 128,2,
127,4, 127.0; m / z calcd untuk C19H15O [M] + 259.1123, ditemukan 259.1130.
Preparasi [1,1'-biphenyl] -4-yl (4-fluorophenyl) (Fenil) metanol (8):
Larutan 4-fluoro-1- bromobenzene (0,9 g, 5,4 mmol) ditambahkan ke magnesium
turnings (0,13 g, 5,4 mmol). Reaksinya campuran diaduk pada refluks, kemudian
di kamar suhu lebih lanjut 6 jam. Larutan keton (7) (0,7 g, 2,7 mmol)
ditambahkan dan reaksi campuran yang tersisa diaduk pada suhu kamar untuk
semalam. Campuran reaksi dipadamkan dengan a larutan amonium klorida jenuh
(30 mL). Itu lapisan berair dipisahkan dan diekstraksi dengan Et2O
(2 x 20 mL). Lapisan organik gabungan itu dicuci, dengan air kemudian
dikeringkan diatas MgSO4 dan menguap. Pemurnian produk mentah adalah
dilakukan dengan kromatografi flash untuk memberikan 0,73 g alkohol (8)
sebagai minyak tanpa warna (hasil 76%). Rf = 0,35; IR (rapi) νmax / cm-1 3477,
3030, 1600, 1506, 1224, 1158; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm): 8.34-8.37
(m, 2H), 8.26-8.30 (m, 2H), 8.11-8.16 (m, 2H), 7.95-8.05 (m, 10H), 7.54-7.62 (m,
2H) 2.91 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ (ppm): 179,1, 176,1, 158,6,
157,2, 153,6, 150,8, 150,3, 137,5, 137,4, 136,3, 135,8, 135,7, 135,3, 135,1, 134,7,
134,5, 134,1, 133,6, 118,7, 118,5,77.2; m / z calcd untuk C25H18F [M-OH] +
337.1393, ditemukan 337.1401.
Persiapan 1 - ([1,1'-biphenyl] -4-yl (4-fluorophenyl) (phenyl) methyl) -1H-
imidazole (10): Thionyl chloride (0,7 g, 6 mmol) dengan dimetil formamida (0,1
mL) adalah ditambahkan ke larutan alkohol (8) (0,7 g, 2 mmol) di diklorometana
anhidrat (20 mL) dan campurannya diaduk pada 00C selama 1 jam. Campuran
reaksi tersisa pada 400C pada pengadukan refluks untuk semalam. Organik
pelarut diuapkan di bawah tekanan yang dikurangi dan residu dicuci dengan
asetonitril (2 x 20 mL) untuk membeli senyawa (9) sebagai massa berminyak
kuning dan diajukan untuk reaksi lebih lanjut segera tanpa pemurnian dan
penjelasan struktur. SEBUAH larutan imidazol (0,2 g, 3,5 mmol) dengan Et3N
(0,5g, 5,2 mmol) disiapkan di anhidrat asetonitril (20 mL) pada 00C dan perlahan
ditambahkan ke a larutan senyawa (10) (0,7 g, 1,7 mmol) dalam aneton asetonitril
(20 mL). Campuran reaksi dibiarkan pada 800C pada pengadukan refluks selama
72 jam. Itu pelarut organik diuapkan dan EtOAc (20 mL) dengan air (20 mL)
ditambahkan ke residu. Itu lapisan berair diekstraksi dengan EtOAc (2 x 20 mL).
Lapisan organik gabungan dicuci dengan air asin larutan (30 mL) kemudian
dikeringkan selama MgSO4 sebelum penguapan. Produk mentah itu dimurnikan
dengan flash kromatografi untuk membeli 0,3 g senyawa (10) sebagai kristal putih
(hasil 47%). mp 97-99 0C; Rf = 0,38; IR (rapi) νmax / cm-1 3031, 1735, 1600,
1507, 1233, 1164; 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ (ppm): 8.17-8.24 (m, 4H), 8.11
(s, 1H), 8.01-8.06 (m, 2H), 7.91-7.96 (m, 4H), 7.66 -7,73 (m, 6H), 7,62 (s, 1H),
7,49-7,57 (m, 2H), 7,30 (s, 1H); 13C NMR (100 MHz, CDCl3) δ (ppm): 179,3,
176,2, 152.9, 151.6, 151.2, 149.9, 148.7, 148.0, 139.6, 139.5, 137,7, 136,2, 135,7,
135,4, 135,3, 134,7, 133,9, 133,4, 127,1, 119,0, 118,7, 68,3; m / z calcd untuk
C25H18F [MImid] + 337.1393, ditemukan 337.1401.
Evaluasi aktivitas antijamur senyawa 4 dan 10: Sampel uji (10 mg) dilarutkan
dalam DMSO (1 mL) untuk menyiapkan 1 mg / mL solusi, masing-masing. Uji
mikroorganisme E.coli, M.luteus dan ragi tersuspensi dalam larutan Ringer (1,5
mL) dalam suatu tabung eppendorf (1,5 mL) menggunakan loop inokulasi. UV
spektra dikalibrasi dengan standar McFarland solusi No. 0,5 (dijelaskan di
bawah). Penangguhan diencerkan sampai absorbansi spektroskopi UV
ditunjukkan sekitar 0,1. Uji bakteri dan suatu ragi diinokulasi dengan
menggunakan kapas kapas swab steril pada Mueller Hinton agar (MHA) dan
dextrose kentang Agar (PDA) piring (90 mm), masing-masing. Solusi dari
senyawa uji ditempatkan pada filter disk kosong kertas (7 mm) dan disk
dipindahkan ke piring. Bakteri dan ragi diizinkan tumbuh 24 dan 48 jam, masing-
masing. Penghambatan zona uji sampel dan obat standar diukur dalam milimeter.
McFarland Standard No. 0.5:
a. 1,0% Barium klorida (ml) 0,05
b. 1.0% Asam sulfat (ml) 9.95
c. Kira-kira kepadatan sel (1 x 108 CFU ml-1) 1.5
d. % Transmisi 74,3
e. Absorbansi 0,132

HASIL DAN DISKUSI

Agen antijamur clotrimazole (4) disintesis dalam tiga langkah (Skema-1).

Sintesis dimulai dengan tersedia secara komersial keton (1) dan persiapan
alkohol (2) adalah sukses (hasil 36%). Senyawa terklorinasi (3) memiliki
disiapkan dan diserahkan untuk substitusi lebih lanjut reaksi segera tanpa
pemurnian, karakterisasi dan penjelasan struktur karena ketidakstabilan senyawa
terklorinasi (3) seperti ini dilaporkan sebelumnya [10]. Karakterisasi clotrimazole
(4) dicapai dengan analisis spektral termasuk 2D (1H-1H) COZY NMR, MS dan
IR untuk konfirmasi struktur.
Sintesis turunan azole bifenil baru (10) adalah dilakukan dalam 5 langkah
rute sintetis linier (Skema 2). Hasil keseluruhan dari keseluruhan sintesis rendah
26%. Tidak ada data analitik sebelumnya tentang struktur senyawa (10), analisis
spektral mendukung pembentukan senyawa baru.
 Aktivitas antijamur dari derivatif bifenil (10, Z-6.1) bersama-sama dengan
clotrimazole (Z-1.6) ditentukan dengan menggunakan metode difusi agar Kirby-
Bauer. Flukonazol - 25 μg (FCN) sampel uji standar dan a DMSO dissolved disk
digunakan sebagai agen kontrol. Zona inhibisi serupa diamati untuk disk derivatif
bifenil (10) dan DMSO tidak termasuk clotrimazole dan flukonazol pada ragi
sesudahnya tumbuh 24 jam (Gambar 1, A). Hasil ini ditemukan terkait dengan
pelarut yang kami gunakan untuk melarutkan pengujian kami sampel untuk
bioassay dan oleh karena itu kami memutuskan untuk tumbuh ragi lebih lanjut 24
jam. Setelah tumbuh 48 jam, zona inhibisi yang berbeda diamati seperti yang
ditunjukkan pada Tabel 1 (Gambar 1, B).

Turunan azole baru (10) memiliki yang tertinggi aktivitas pada 200 μg, di
mana sebagai clotrimazole menunjukkan lebih banyak aktivitas pada konsentrasi
dua kali lebih sedikit dibandingkan ke novel azole. Apalagi, senyawa (10) itu
tidak aktif melawan M.Luteus dan E.coli setelah 24 jam tumbuh.

KESIMPULAN
Kami berhasil mensintesis clotrimazole (4) dan a novel bifenil derivatif
sebagai 1 - ([1,1'-biphenyl] -4-yl (4- fluorophenyl) (phenyl) methyl) -1H-
imidazole (10) melalui sintesis multistep. Hasil keseluruhan novel derivatif
clotrimazole (10) adalah relatif rendah pada 26 31 % Kami menemukan bahwa
senyawa (10) aktif terhadap ragi tetapi kurang dari senyawa (4). DMSO diyakini
tidak menjadi pelarut yang tepat untuk pengujian antijamur berdasarkan sifat
fisiknya (titik didih tinggi). Oleh karena itu, mustahil untuk melakukannya
senyawa uji dalam konsentrasi lebih tinggi karena penyerapan terbatas dari disk
yang kami gunakan. Yang baru senyawa yang disintesis (10) telah terbukti tidak
menjadi kandidat potensial untuk agen antijamur lebih lanjut pengembangan.

PENGAKUAN
Kami berterima kasih kepada Dr. Stephen Hobson dan Dr. Michael Hall (School
of Chemistry of Newcastle Universitas, Inggris) untuk bimbingan dan saran
mereka. Kita juga berterima kasih kepada Newcastle University untuk
menyediakan kesempatan untuk mengimplementasikan proyek.

DAFTARUSTAKA
Ghannoum M.A. and Rice L.B., (1999) Clin. Microbiol. Rev., 12, 501-517.

Maertens J.A. (2004) Clin. Microbiol. Infect., 10,1-10.

Kathiravan M.K., Salake A.B., Chothe A.S., Dudhe P.B., Watode R.P., Mukta
M.S. Gadhwe S. (2012) Bioorgan. Med. Chem., 20, 5678-5698.

K.H., Plempel M., Draber W. and Regel E. (1972) Arzneim.-Forsch., 22, 1260-
1272.

Fromtling R.A. (1988) Clin. Microbiol. Rev., 1, 187-217.

Tafi A., Anastassopoulou J., Theophanides T., Botta M., Corelli F., Massa S.,
Artico M., Costi R., Di Santo R., Ragno R. (1996) J. Med. Chem., 39,
1227-1235.

Wang F., Good J.A.D., Rath O., Kaan H.Y.K., Sutcliffe O.B., Mackay S.P.
Kozielski F. (2012) J. Med. Chem., 55, 1511-1525.

Harris M.R., Hanna L.E., Greene M.A., Moore C.E., Jarvo E.R. (2013) J. Am.
Chem. Soc., 135, 3303-3306.
Kumbhar A., Jadhav S., Kamble S., Rashinkar G., Salunkhe R. (2013)
Tetrahedron Lett., 54, 1331- 1337.

Horn M. and Mayr H. (2012) J. Phys. Org. Chem., 25, 979-988.