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ESCUELA DE MEDICINA
BIOQUÍMICA MED 300
TERCER AÑO
LABORATORIO 9
DESHIDROGENASA SUCCINICA DEL HÍGADO
FACILITADORA: YOLANDA TEM
INTEGRANTES: AILYN RODRÍGUEZ 9-749-1910, NELSON DELGADO 8-921-2137, EIBAR
CAMARENA 4-778-2000 Y JONATHAN LEZCANO 4-770-475.
RESUMEN:
OBJETIVOS:
MARCO TEORICO:
MATERIALES Y REACTIVOS:
Tabla N.1 Materiales
2,6-diclorofenolindofenol Carcinógeno
0,02% 15mL irritante
C₁₂H₆Cl₂NNaO₂ * 2
H₂O,
PROCEDIMIENTO:
2. Pruebas Cualitativas:
• 0.5 mL de amortiguador, 0 mL de sustrato, 1mL de agua destilada, 1mL de
Tubos homogenizado y 1mL de DICPIP (1) y 1mL de Azul de metileno (2)
1y1
RESULTADOS:
DISCUSIÓN:
En el tubo N.3 se emplearon las mismas cantidades de reactivo, pero se usó una
enzima calentada previamente a 52°C; esto produce la desnaturalización de la enzima
en el hígado, esto es algo observado en previos laboratorios, la estructura proteica de
la enzima pierde su forma y esto provoca que su función se vea disminuida o detenida
en su totalidad según Macarulla (1994) que nos dice que el aumento de velocidad de
la reacción debido a la temperatura es contrarrestado por la pérdida de actividad
catalítica debida a la desnaturalización térmica, y la actividad enzimática decrece
rápidamente hasta anularse.
Por otro lado, en los tubos 4, 5, 6 el tiempo necesario para el cambió de coloración se
vio afectados debido a que se añadió 3 inhibidores diferentes a cada uno, malonato
de sodio, azida de sodio y cianuro de sodio respectivamente para evaluar su efecto en
la reacción, se observó que el tubo # 6 con cianuro de sodio fue el primero en cambiar
de color por lo que demuestra ser un mal inhibidor para esta enzima. Mientras que el
tubo 5 decoloró menos y el 4 demostró que, si se había inhibido la reacción, tomando
en cuenta que el inhibidor en este tubo (ósea el más efectivo) según el resultado fue
el malonato de Sodio. Y lo comprobamos según Voet (2013) que nos dice que la
deshidrogenasa succínica es fuertemente inhibida por el malonato, un análogo
estructural del succinato, uniéndose al sitio activo de la enzima, por lo que es conocido
como un ejemplo de inhibidor competitivo. No obstante, los otros inhibidores (cianuro
y la azida de sodio) actúan como tóxico a través de la inhibición del complejo citocromo
c-oxidasa que según Voet (2013) se encuentra formando parte del complejo IV del
sistema de transporte de electrones y por ende bloqueara la cadena transportadora de
electrones, pero que no actúan directamente sobre el sitio activo de la enzima se
obtuvo un cambio de coloración demostrando la acción sobre el sustrato de la enzima.
Además, debemos saber que el succinato añadido se puede convertir en oxalacetato
por medio de los enzimas del ciclo y, por tanto, estimula la oxidación del piruvato, pero
el malonato es un inhibidor competitivo de la reacción del succinato deshidrogenasa y
bloquea la transformación del succinato a fumarato. Por esta razón Voet (2013)
bloquea el flujo de metabolitos a través del ciclo, porque se une al sitio activo del
succinato deshidrogenasa en el ciclo del ácido cítrico, pero no reacciona, compitiendo
con el succinato. Aunado a esto en la reacción de fosforilación oxidativa, según Voet
(2013) el malonato es un inhibidor del complejo II que, nuevamente, contiene succinato
deshidrogenasa, deteniendo completamente la oxidación del piruvato y esto fue
comprobado ya que el color de este tubo no cambio y siguió azul completamente dando
como resultado y comprobando su acción como inhibidor más efectivo.
Con lo que respecta al azul de metileno el resultado fue mucho más lento, pero los
cambios fueron similares al 2,6-diclorofenolindofenol. Y de esta manera
experimentalmente se comprobó cómo los inhibidores son substancias que se enlazan
a alguno de los componentes de la cadena de transporte de electrones bloqueando su
capacidad para cambiar de una forma reversible desde la forma oxidada a la forma
reducida y viceversa, según Horton (2008) lo que hace que no se libere energía y la
síntesis de ATP también se detenga.
CONCLUSIONES:
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:
Voet, D. (2013). Fundamentos de Bioquímica. España: Médica Panamericana.
Azañero, C. (2009). Ciclo de Krebs. Recuperado el 23 de mayo de 2017 de:
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Macarulla. J y Goñi. F. (1994). Bioquímica humana. Recuperado el 23 de mayo de
2017 de:
https://books.google.com.pa/books?id=4h_IosytGvkC&pg=PA229&dq=fermentacion+
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alse.
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González, M. (2010). Química. Indicador redox. Recuperado el 23 de mayo de 2017
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Fornaguera, J., & Gómez, G. (2005). Bioquímica. Costa Rica: Universidad Estatal a
Distancia.
Horton, H. (2008). Principios de Bioquímica. México: Pearson Education
CUESTIONARIO: