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PROTEÍNA NITRÓGENO KJELDAHL DETERMINACIÓN POR

CROMATOGRAFÍA IÓNICA Y LA DIGESTIÓN

La determinación de la proteína total en la industria farmacéutica, biológica, alimentos,


medio ambiente, y otros materiales se lleva a cabo ampliamente por el método Kjeldahl. 1-
5 El método indirecto cuantificado es el contenido total de proteína a partir de la medición
de nitrógeno y consiste en 3 pasos principales: digestión, destilación y valoración. El
método original ha sido objeto de muchas modificaciones de cationes y mejoras. En su
forma más reciente, las muestras se digirieron en sulfato ácido de potasio / sulfúrico en
presencia de un catalizador para convertir cuantitativamente nitrógeno en proteínas a
sulfato de amonio. La solución se destila a continuación en presencia de un exceso de
hidróxido de sodio y el amoníaco liberado se absorbe en un ácido, que se tituló para
cuantificar amoníaco. El método es mucho tiempo y requiere grandes cantidades de
muestra.

Por otro lado está la cromatologia iónica el uso de la cromatologia ionicaI para determinar
el nitrógeno total en forma de ión amonio después de la digestión de Kjeldahl puede
significativamente mejorar la velocidad, exactitud y precisión del análisis mediante la
eliminación de destilación y valoración pasos. Además, debido a que sólo cantidades nano
molares de amonio son necesarios para el análisis, 6,7 la cantidad de muestra necesaria
para la digestión puede ser significativamente reducida, lo que es de importancia crítica
para las muestras biológicas y ambientales. El método de cromatologia iónica para la
determinación de iones de amonio implica típicamente la separación por cromatografía de
intercambio catiónico utilizando una solución diluida de un ácido fuerte seguido por la
detección de conductividad con supresión usando un supresor de cationes
electrolíticamente regenerada.

SOLUCIÓN DE DIGESTIÓN KJELDAHL

mediante la adición de 10 ml de una solución saturada de sulfato de cobre (II) a 500 ml de


ácido sulfúrico concentrado, incubando durante 7 días a temperatura ambiente de modo
que el sulfato de exceso de cobre se precipita, y la recolección de la solución transparente
de la parte superior.

EQUIPO

La cromatografía se realizó utilizando un sistema de cromatografía de iones, IonPac CS16


de intercambio catiónico columna analítica (5 ICS-3000 250 mm),
IonPacCG16guardcolumn (5 50 mm), CERS500 (4 mm) y software Chromeleon para la
systemoperation y análisis de datos. El supresor de ion, RCE-500, se inserta en línea entre
la salida de la columna y el detector. La unidad de destilación Micro-Kjeldahl Digestor y
RapidStill que eran de Labconco (Kansas City, MO). Un Agilent (Santa Clara, CA) 8453
UV-Visible espectrofotómetro fue utilizado para medir la absorbancia a 280 nm.

RESULTADOS

LA DIGESTIÓN DE KJELDAHL

Los resultados indicaron que, para el análisis de cantidades de microgramos de proteínas,


es fundamental para optimizar la digestión Kjeldahl para evitar la pérdida de
amoníaco.digestión Micro-Kjeldahl requiere 3-4 h para asegurar una conversión
cuantitativa de la proteína a amonio. 2 También se observó un cambio de color, de
esencialmente incoloro a amarillo claro / marrón / púrpura (dependiendo de la
concentración de proteínas) y luego de vuelta a transparente e incolora. Los cambios de
color, también la formación de humos era claramente visible.

CROMATOGRAFÍA IÓNICA

Los resultados muestran que el 10 metro ácido oxálico M, cuando se incluye en la Kjeldahl
digerir, así como en el eluyente, es suf fi ciente para convertir los iones de cobre presentes
en el Kjeldahl digieren a la bioxalate cobre cargado negativamente, que se elimina a
continuación por el CER. No había cobre ha convertido en bioxalate cobre por completo, el
cobre no convertido precipitaría como hidróxido de cobre en el CERS.

En conclusión se usó un método simple, rápido, preciso y exacto para la determinación de


muestras de concentración de proteína, que combina la digestión Kjeldahl y IC del digerido
con detección de conductividad suprimida. A pesar de que el método requiere cantidad
nano molar de nitrógeno en las muestras, los resultados son comparables a los obtenidos
por el método de micro-Kjeldahl. Además, que reduce el tiempo de digestión de menos de
1 h y elimina la necesidad de las etapas de destilación y rectificación de los métodos de
Kjeldahl, reduciendo así el tiempo de análisis al tiempo que mejora significativamente la
exactitud y precisión. El método es particularmente útil para muestras biológicas donde la
limitación de la muestra es un problema. El método puede ser aplicable también en
alimentos, medio ambiente, y otras áreas.