UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO

FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN

ALIMENTOS
INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

DATOS INFORMATIVOS:
TEMA: USO DEL HEMOCITÓMETRO

NOMBRE: Raquel Jurado

CARRERA: Ingeniería Bioquímica
CICLO ACADÉMICO: septiembre 2017 - febrero 2018
ASIGNATURA: Microbiología II
NIVEL: Cuarto
PARALELO: Único
PROFESOR: Dr. Carlos Rodríguez
PRÁCTICA DE LABORATORIO N: 6
FECHA DE REALIZACIÓN: 01/12/2017
FECHA DE PRESENTACIÓN: 11/12/2017

1. OBJETIVOS
1.1 Objetivo General
 Reconocer el uso del hemocitómetro mediante el cálculo de la
concentración de esporas
1.2 Objetivos Específicos
 Determinar la concentración en esporas por litro mediante el conteo de
esporas presentes en una solución
 Establecer el uso correcto del hemocitómetro así como las utilidades y
características del mismo.

2. RESULTADOS Y CÁLCULOS
 Cuatro celdas
 4+12+14 +12+33+16+8+ 6
=13.125=13
8
13 colonias
C oncentración= −9
=2.08× 109 colonias/litro
6.25× 10 litro s
 Cinco celdas
6 +8+39+ 43+22
=23.6=24
6
24 colonias
C oncentración= −9
=6 ×109 colonias /litro
4 × 10 litro

Tabla 1. Concentración de colonias por litro

Celda Esporas Volumen (litros) Concentración Concentración Promedio
s
9
4 4 – 12 – 14 - 12 2.08 ×10 colonias /litro
9
4 33 – 16 – 8 - 6 6.25 ×10
−9
4.04 × 10 colonias/litro
9
5 6 – 8 – 39 – 43 - 22 4 × 10
−9
6 ×10 colonias /litro

3. DISCUSIÓN
En la práctica de laboratorio se utilizó el hemocitómetro, para lo cual se colocó la muestra
entre el portaobjetos y el cubreobjetos del mismo, se dejó reposar sobre la plataforma del
microscopio unos minutos y se procedió a contar el número de esporas en varias celdillas,
se obtuvo varios datos de los cuáles se obtuvo un promedio del número de esporas obtenido
en las celdas de 4 y otro promedio de las celdas de 5, se dividió para un volumen de
6.25 ×10
−9
y 4 × 10−9 litros respectivamente y se obtuvo la concentración en
esporas/litro.

El hemocitómetro es un portaobjetos especializado en el cual una retícula es grabada con

láser, su construcción permite conocer el volumen de cualquier líquido colocado sobre él y
por debajo de su cubreobjetos, la retícula se encuentra compuesta por nueve cuadros de 1
mm2 cada uno. Los cuatro cuadros de 1 mm2 localizados en cada esquina poseen a su vez
16 cuadros de 0.0625 mm2. El cuadro central (también de 1 mm2) se encuentra compuesto
por 25 cuadros de 0.04 mm2, estos cuadros a su vez se encuentran compuestos por cuadros
menores de tan solo 0.0025 mm2. Dada la profundidad de la cámara de tan solo 0.1 mm,
cada una de estas unidades corresponde a volúmenes fijos conocidos, dependiendo del tipo
de muestra a medir, se ha de preparar una muestra con una concentración apta para su
recuento. Típicamente, el rango de concentraciones que permite contar el hematocitómetro
está entre 250.000 células y 2,5 millones de células por ml. Intentaremos que la muestra
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tenga una concentración en torno a 10 (1 millón) aplicando las diluciones
correspondientes. Por debajo de 250.000 células / ml (2,5 * 105 ) la cantidad de células
contadas no es suficiente para poder dar una estimación lo suficientemente fiable de la
concentración celular. La concentración óptima para conteo en hematocitómetro es de 1
millón de células por ml = 106 células /ml. Por encima de 2,5 millones (2,5 * 106 ) la
probabilidad de cometer errores de conteo crece demasiado, y también el tiempo y esfuerzo
necesario para realizar un recuento con fiabilidad. Por encima de esta concentración es
conveniente diluir la muestra para acercar la concentración al rango óptimo [CITATION
Cel08 \l 12298 ], [CITATION Bas04 \l 12298 ].

La ventaja principal del uso del hemocitómetro es que es un método muy rápido y muy
eficaz para las células relativamente grandes, las desventajas son que sólo sirve para
suspensiones celulares relativamente concentradas puesto que si se tiene una concentración
muy elevada no se realizará un conteo adecuado y resultará muy complicado, no hace
distinción entre células vivas y células muertas puesto que simplemente se realiza el conteo
de las células observadas y, con respecto a bacterias móviles, se debe inmovilizarlas
previamente para poder realizar el conteo correctamente. Pueden existir errores de hasta
20% y 30% con este método de recuento, a los errores estadísticos por ser la muestra poco
representativa, errores del volumen de muestra realmente introducido en la cámara, etc. Sin
embargo, el hematocitómetro sigue siendo uno de los métodos más ampliamente utilizados
en los laboratorios de todo el mundo [CITATION Pam14 \l 12298 ], [CITATION Aqu10 \l
12298 ].

4. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
4.1 Conclusiones
 La concentración de esporas se obtuvo mediante el conteo de las mismas, el
cálculo del promedio de esporas y su división con respecto al volumen
utilizado respectivamente, dando una concentración de 4.04 × 109
esporas/litro.
 El hemocitómetro es un portaobjetos especializado utilizado para realizar el
conteo de células (esporas), su ventaja principal es que es un método muy
rápido y muy eficaz, las desventajas son que sólo sirve para suspensiones
celulares relativamente concentradas, no hace distinción entre células vivas
y células muertas, y con respecto a bacterias móviles, se debe inmovilizarlas
previamente para poder realizar el conteo correctamente. Sin embargo, este
sigue siendo uno de los métodos más ampliamente utilizados en los
laboratorios de todo el mundo

4.2 Recomendaciones
 Se recomienda realizar una limpieza del hemocitómetro antes de ser
utilizado
  Es recomendable diluir la solución a utilizar, para evitar errores en el caso
de existir un gran número de esporas.
 Realizar una correcta utilización del microscopio al momento de mover la
placa para el conteo de esporas para así obtener datos fiables.

5. BIBLIOGRAFÍA
Aquiahuatl, M., Volke, T., Ramírez, F., Salazar, M., Prado, L., & Matsumoto, k.
(2010). MANUAL DE PRÁCTICAS DEL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
GENERAL. Recuperado el 10 de Diciembre de 2017, de
http://sgpwe.izt.uam.mx/files/users/uami/crl/Microbiologia/16P/Manual_Micro-
16P.pdf
Bastidas, O. (2004). Conteo Celular con Hematocitómetro. Recuperado el 10 de
Diciembre de 2017, de
http://www.celeromics.com/es/resources/docs/Articles/Conteo-Camara-
Neubauer.pdf
Gonzáles. (2008). Conteo celular y evaluación de viabilidad. Life Science, 230-231.
Pamo, M. (11 de Septiembre de 2014). Recuento Microbiano. Recuperado el 10 de
Diciembre de 2017, de https://prezi.com/_mhvyohrhmiq/recuento-microbiano/