UNIVERSIDAD NACIONAL SAN AGUSTÍN

FACULTAD DE INGENIERÍA DE PROCESOS

ESCUELA DE INGENIERIA QUIMICA

LABORATORIO DE INGENIERIA DE BIOPROCESOS

PROYECTO:
EVALUACION DEL pH ADECUADO PARA EL CULTIVO DE
SPIRULINA

ALUMNOS:

 CARPIO CHAVEZ ORIALIZ MARITEE

 SUERO ITO CECILIA
 ARAGON ROMERO SAYDA
 PERALTA ASPUR JOHANA

DOCENTE: ING. PALMA

Arequipa-Perú
2018

INDICE
1. INTRODUCCION................................................................................................................. 3
2. MARCO TEORICO .............................................................................................................. 4
2.1. GENERALIDADES DE LAS CIANOBACTERIAS. ............................................................. 4
2.2. ASPECTO NUTRICIONAL ............................................................................................ 4
2.3. REPRODUCCIÓN Y CICLO DE VIDA............................................................................. 5
2.4. CONDICIONES DE CRECIMIENTO............................................................................... 6
CINÉTICA DE CRECIMIENTO .............................................................................. 7
TEMPERATURA .................................................................................................. 7
ILUMINACIÓN.................................................................................................... 8
AGITACION ........................................................................................................ 8
NUTRICIÓN ........................................................................................................ 8
pH ...................................................................................................................... 9
CO2 .................................................................................................................... 9
MEDIO DE CULTVO .......................................................................................... 10
SIEMBRA .......................................................................................................... 11
COSECHA ......................................................................................................... 11
COMO MANTENER EL MEDIO DE CULTIVO ..................................................... 12
CUIDADO DEL CULTIVO ................................................................................... 13
CONSERVACION .............................................................................................. 14
SECADO ........................................................................................................... 15
CONSUMO ....................................................................................................... 15
3. DEFINICION DEL PROBLEMA ........................................................................................... 16
4. HIPOTESIS ........................................................................................................................ 16
5. JUSTIFICACION ................................................................................................................ 16
5.1. SOCIAL ..................................................................................................................... 16
5.2. ECONOMICA ............................................................................................................ 17
6. OBJETIVOS ....................................................................................................................... 17
6.1. Objetivo General ..................................................................................................... 17
6.2. Objetivos específicos .............................................................................................. 17
7. VARIABLES ....................................................................................................................... 17
8. MATERIALES Y METODOS ............................................................................................... 17
8.1. CANTIDADES PROPORCIONALES ................................. Error! Bookmark not defined.
8.2. MATERIALES ................................................................ Error! Bookmark not defined.
8.3. METODO ..................................................................... Error! Bookmark not defined.
8.4. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES ............................................................................ 22
 EVALUACION DEL pH ADECUADO PARA EL
CULTIVO DE SPIRULINA

1. INTRODUCCION
La spirulina es una cianobacteria filamentosa, autótrofa, reconocida también como alga verde-azul que
deriva su nombre de la naturaleza helicoidal o en espiral de sus filamentos, su alto contenido nutricional,
justifica que se analice su producción en cantidades suficientemente altas para permitir su comercialización
e un ámbito regional y nacional.

Una spirulina lograda al máximo contiene entre 50 y 60% de proteína bruta. El espectro de sus aminoácidos
es similar a otros patrones proteicos tales como huevos o leche, “aun cuando es deficiente en metionina,
cisteína y lisina (ciferri 1983), la spirulina es una fuente importante de vitaminas tal como la B12 y
carotenos ;también de minerales como el hierro y de ácidos grasos esenciales como gama-linoleico.

Puede cultivarse fácilmente en biorreactores, sistemas acuosos abiertos, naturales y artificiales, en lo que
el medio de cultivo liquido contiene sales como bicarbonato de sodio y nitratos que contribuyen a la
alcalinidad del medio, uno de los factores más importantes en la producción, la utilización de esta
cianobacteria como fuente potencial de alimento es lo q hace relevante el estudio de crecimiento y
producción.

La iluminación también es importante al ser un organismo fotoautotrofico y lograr una adecuada

distribución de nutrientes, se mantiene agitado por medio mecánico o burbujeo.

Una instancia previa es el cultivo experimental para obtener conocimiento de las condiciones adecuadas
más favorables al crecimiento del cultivo.

Este trabajo busca evaluar a escala de laboratorio el PH como principal factor determinante en el proceso
de producción, estableces alternativas de estabilización y así mejorar la cinética de su crecimiento.
 2. MARCO TEORICO

2.1. GENERALIDADES DE LAS CIANOBACTERIAS.

Las cianobacterias son organismos desprovistos de membrana nuclear y mitocondrias; difieren de otros
procariotes en la composición de sus ácidos grasos, ya que frecuentemente presentan ácidos grasos no
saturados con dos o más enlaces dobles. Poseen solamente clorofila-a y un fotosistema II (PS-II). Este
fotosistema, así como los pigmentos fotosintéticos, los pigmentos accesorios y los componentes del
transporte de electrones, están incluidos en los tilacoides (sistemas membranosos fotosintéticos).
Íntimamente ligados al sistema clorofílico se encuentran unos agregados llamados ficobilisomas o
ficobilinas. Estos gránulos contienen en particular, un pigmento esencial para el transporte de energía hacia
el PS-II, la ficocianina, proteína que posee un grupo prostético del tipo polipirrol, el cual le confiere un
magnífico color azul, así como una fluorescencia roja de excepcional eficiencia. Las cianobacterias asimilan
el carbono a través del ciclo de Calvin y almacenan energía y carbono en forma de glucógeno.

Las cianobacterias poseen diferentes esquemas metabólicos que tienen en común, la ausencia del ciclo de
Krebs completo. Muchas de ellas, sobre todo las filamentosas, son capaces de reducir (fijar) el nitrógeno
atmosférico, gracias a unas estructuras llamadas heterocistos.

La mayoría de las cianobacterias son capaces de desplazarse en los líquidos, debido a vesículas gaseosas,
o en el caso de las cianobacterias filamentosas, por deslizamiento de hasta 25 micras por segundo mediante
microfibras. La reproducción en estos organismos se efectúa por escisión simple o múltiple, por gemación
o por fragmentación. Algunas de sus especies producen células especializadas (acinetos), resistentes a la
sequedad y a la congelación, que pueden germinar cuando las condiciones se vuelven favorables.

2.2. ASPECTO NUTRICIONAL

La espirulina aporta vitalidad y energía a la vez que numerosos micronutrientes para el ser humano. Se le
atribuyen muchas propiedades, por ejemplo: propiedades anticancerígenas, refuerza del sistema
inmunitario, actúa como antioxidante, controla la diabetes, el colesterol, la anemia, favorece la eliminación
de los metales pesados y la radioactividad, ayuda a la recuperación del esfuerzo físico, combate la fatiga,
el estrés, etc. Si quieres saber más sobre les aportes nutricionales de la espirulina, existen más de 500
publicaciones científicas sobre los efectos del consumo de espirulina. No en vano se la ha atribuido la
etiqueta de “uno de los mejores alimentos del mundo.”

POR CADA 10 GR DE ESPIRULINA

2.3. REPRODUCCIÓN Y CICLO DE VIDA

Un aspecto fundamental de la biología de Spirulina spp. es su ciclo vital, enmarcado por su ubicación
taxonómica, su fisiología e implicaciones ambientales de cultivo. Todas las células dispuestas en filamentos
o en rosario, tienen la facultad de multiplicarse por bipartición. Hacia los extremos de los filamentos, la
división es más frecuente que en la zona intercalar. Este es un período que se puede resumir en tres etapas
fundamentales:
  Fragmentación de tricomas.
 La ampliación de células del hormogonio y procesos de maduración.
 Alargamiento de tricoma.

El tricoma maduro se divide en varios filamentos u hormogonios pequeños, gracias a la formación previa
de células especializadas, las llamadas células de necridio, que se caracterizan por tomar un aspecto
granuloso, sus tabiques transversales se abomban fuertemente y la célula se vuelve bicóncava, la materia
de la célula se reabsorbe para permitir la fragmentación. La ruptura celular ocurre por zonas conocidas
como disyuntores. Para este proceso, el tricoma crece longitudinalmente y toma su forma típica helicoidal.

Ciclo de vida Spirulina sp

2.4. CONDICIONES DE CRECIMIENTO

La mayoría de las investigaciones de laboratorio propuestas tienen como inicio la utilización del medio
Zarrouk clásico para el crecimiento y desarrollo de Spirulina spp., aunque en ocasiones se experimenten
variables en su composición para la obtención de resultados específicos, como pueden ser: la obtención de
pigmentos , ácidos orgánicos como el gama-linoleico, clorofila, carotenoides y desde luego biomasa como
fuente proteica.

El trabajo a escala de laboratorio es importante independientemente de la aplicación que se quiera tener con
Spirulina spp. (industrial o farmacológico), ya que lo que busca es obtener beneficios y conocimientos en
el área industrial y medico-científica.(BOGOTA,2006)
 CINÉTICA DE CRECIMIENTO

El crecimiento de Spirulina spp. en un cultivo por lotes, bajo condiciones pre- establecidas por cada
investigador o productor, presenta las siguientes fases de desarrollo: (Becker, 1982)

 Fase de adaptación
 Fase de crecimiento exponencial
 Fase de crecimiento lineal
 Fase estacionaria
 Fase de muerte.

Durante la primera fase (fase de adaptación) el cultivo de Spirulina spp. se acopla a las condiciones
establecidas, la tasa de crecimiento específico es baja y se incrementa paulatinamente con el tiempo del
cultivo y la capacidad biológica de adaptación de la cepa utilizada. En la segunda fase (fase exponencial),
el cultivo de Spirulina spp. se ha adaptado a las condiciones de crecimiento. La intensidad lumínica no es
una limitante, y los cambios en la concentración de nutrientes causada por la adaptación de Spirulina spp.
son tan bajos que el efecto en el crecimiento del cultivo no es significativo. En un cultivo, sin luz ni
nutrientes limitados, el incremento en la biomasa de la microalga (expresada como peso seco, número de
células, densidad óptica etc.) por unidad de tiempo, es proporcional a la biomasa inicial del cultivo.

El crecimiento de Spirulina spp. continua hasta la tercera fase (fase de crecimiento lineal), en la cual la
multiplicación celular se extiende, hasta llegar a ocultarse una célula sobre la otra, lo que produce una
disminución de luz. Este efecto reduce la tasa de crecimiento específico y el incremento de biomasa de
Spirulina spp. llega a ser lineal. Esta fase lineal continúa hasta llegar a una inhibición del crecimiento debido
al agotamiento de nutrientes; el cultivo alcanza un estado, en el cual la respiración celular llega a ser una
interferencia. Si el cultivo se mantiene rico en nutrientes, esta fase lineal puede permanecer varios días.

Durante la cuarta fase (fase estacionaria), con una disminución de la tasa de crecimiento, el suplemento
lumínico en las células de Spirulina spp. es limitado y la respiración aumenta. El metabolismo oxidativo de
síntesis de sustancias llega a reducir el constante aumento de biomasa. En este punto del crecimiento, la
curva de crecimiento presenta el valor aproximado máximo de concentración de biomasa de Spirulina spp.,
aquí se alcanza el equilibrio entre la concentración máxima de biomasa y la pérdida debida a los procesos
de degradación.

Durante la quinta fase (fase de muerte) las células de Spirulina spp. mueren, liberando materia orgánica.
Esta fase es causada por las condiciones desfavorables del ambiente, sobre el cultivo y el limitado
suplemento de luz y nutrientes o la contaminación de otros microorganismos, este tipo de crecimiento
ocurre en sistemas cerrados.

El monitoreo y seguimiento del desarrollo del cultivo de Spirulina spp. es llevado a cabo por
espectrofotometría, el método más utilizado para la estimación de concentración de sólidos suspendidos
(células) en una muestra. La exactitud de esta metodología es alta y confiable, siempre y cuando se tenga
en cuenta elementos como: tamaño celular, forma, y presencia de precipitados. La lectura para cultivos de
Spirulina spp. se lleva a cabo a una longitud de onda de 560 nm(BOGOTA,2006)

TEMPERATURA
La temperatura del líquido de cultivo tiene una influencia directa con la velocidad de crecimiento de
Spirulina spp., y es necesario tener como referencia dos tipos de temperatura a escala de laboratorio: la
primera, la del medio ambiente y la segunda se refiere al medio líquido de cultivo; esta última es importante
ya que, Spirulina spp. no inicia su crecimiento de una manera considerable por debajo de 20°C. La máxima
velocidad de crecimiento se alcanza entre los 35 – 38 ºC, por encima de esta temperatura, hay riesgo de la
destrucción rápida del cultivo. En general los cambios bruscos de temperatura en el cultivo disminuyen el
rendimiento de la biomasa. (BOGOTA,2006)

ILUMINACIÓN

La iluminación es indispensable para el crecimiento de Spirulina spp. debido al proceso de la fotosíntesis,

determinante para su constitución estructural. Un filamento individual de Spirulina spp. no puede soportar
una exposición prolongada a la iluminación ya que podría ser destruido por fotolisis. De ahí, la necesidad
de mantener la iluminación controlada en foto-períodos regulados de tiempo 12/12 (día/noche); cada
período genera reacciones particulares: en el día, se favorece la asimilación de CO2 a través del ciclo de
Calvin, lo que permite la formación de glicógeno como material de reserva en la célula. En la noche ocurren
reacciones bioquímicas de síntesis de material proteico. La intensidad lumínica a escala de laboratorio,
puede variar entre 2000 y 5000 luxes, dependiendo de la densidad de los cultivos, para lo anterior es
necesario tener en cuenta la siguiente equivalencia, 1 lux = 0.01953umolquanta/m2.s (microeistein).
(BOGOTA,2006)

AGITACION

Es indispensable agitar el cultivo de Spirulina spp., buscando favorecer la dispersión homogénea de la

cianobacteria en el líquido y la exposición a la luz por parte de todos los filamentos, para tener activo su
mecanismo fotosintético. Una agitación muy brusca puede estropear la Spirulina spp. provocando la
aparición de espuma, que obstaculiza la penetración de la luz y el intercambio gaseoso del cultivo. Ciertas
bombas centrifugas y cascadas de agua que salpican, son especialmente nefastas. En caso de cultivos
pequeños (menos de 10 litros), la agitación puede realizarse a través de una inyección de aire con un
compresor de acuario y/o ser complementada con la adición de CO2. Con este último se puede lograr un
doble objetivo: proporcionar agitación y enriquecer el cultivo con más carbono disponible para el
metabolismo celular. (BOGOTA,2006)

NUTRICIÓN

Ocho factores influyen en la productividad del cultivo de Spirulina spp.: luminosidad, temperatura, tamaño
de inoculo, velocidad de agitación, sólidos disueltos, pH, calidad de agua, presencia de macro y
micronutrientes

Los cultivos por lotes, el agotamiento de un elemento en el medio de cultivo, posibilita la deficiencia del
mismo en la cianobacteria. Por esta razón, la concentración de minerales en el medio debe ser determinada
con frecuencia, con el objetivo de adicionar el nutriente limitante, sin embargo, la tecnología necesaria para
realizar las continuas mediciones aumenta el costo de producción, lo que lleva a limitar a empresas
pequeñas.
La concentración de sales en el medio de cultivo varía entre 20 y 90 g L-1, siendo la principal fuente de
carbono el bicarbonato (HCO- ). Esta sal se disocia en CO iones OH- y agua. El CO2 es fijado mediante el
3
ciclo de Calvin para la síntesis de compuestos orgánicos y los iones hidroxilo elevan el valor de2 pH hasta
11, el cual es tolerado por la cianobacteria. El crecimiento de Spirulina spp. lleva el agotamiento del
bicarbonato, el cual puede ser restablecido mediante la adición continua de CO2 gaseoso, lo que permite
mantener estable el valor óptimo de pH (9.2 +/- 0.2) y suministrar una fuente continua de carbonato para el
crecimiento.

Aniones como PO4 -3 , SO4 –2, Cl- y cationes como Na+, K+, Mg+2, Ca+2, son importantes en el medio
de cultivo para el crecimiento de la cianobacteria, por que son requeridos en funciones estructurales y
metabólicas. Se ha determinado que la relación entre algunos de estos iones, debe mantenerse en el medio,
para evitar antagonismo en la asimilación de nutrientes, este es el caso de la relación Na : K que oscila entre
10:1 y 5:1.

Los micronutrientes son requeridos en cantidades de miligramos o microgramos, actuando

fundamentalmente como catalizadores, mediadores o reguladores de reacciones enzimáticas y procesos
fisiológicos. Se ha demostrado que la formulación de EDTA (ácido etilendiamino tetracético) en el medio
de cultivo, aumenta la solubilidad de iones metálicos como B, Fe, Mn, Co, Cu, Zn, V, Ni, W y Te, lo que
permite que estén disponibles como nutrientes para Spirulina spp. (BOGOTA,2006)

pH

La medida de pH en el medio de cultivo es una referencia clave para el desarrollo del cultivo de Spirulina
spp.. El medio de cultivo se alcaliniza por el consumo de la fuente de carbono, lo que genera bases como
el NaOH. La medición del pH, puede convertirse en una evaluación cuantitativa de la cantidad de biomasa
en el medio: A mayor biomasa, mayor degradación de bicarbonato y por consiguiente se eleva la
concentración de grupos hidroxilos en el medio, aumentándose así el pH.

El valor del pH determina entre otros factores la solubilidad del CO2 y algunos minerales que inciden
directamente en el crecimiento de Spirulina spp.. El rango de pH óptimo de este microorganismo esta entre
8 – 11. El desarrollo del pH en el cultivo se ve modificado por factores como:

 La capacidad buffer del medio utilizado.

 La cantidad de CO2 disuelto.
 La temperatura que afecta los gases disueltos.
 La actividad metabólica de Spirulina spp.

En cultivos Industriales el pH es mantenido por encima de 9.4, ya que por encima de este valor se evita la
contaminación por parte de otros microorganismos, y en especial de otras algas. (BOGOTA,2006)

CO2

La adición de CO2 al medio de cultivo de Spirulina spp., genera la siguiente reacción:

La adición de CO2 es propuesta para la regulación del pH, ya que este parámetro aumenta si la fuente de
carbono es insuficiente. Lo que se logra con la adición de este gas es acelerar la asimilación de carbono.
El CO2 que ingresa al medio tiene un paso rápido, ya que sale para equilibrarse con el atmosférico.
Alrededor del pH 10.5 se inicia la retención en el medio líquido del CO2. En general la concentración de
este gas es importante, ya que disminuye la alcalinidad y amortigua el pH.

Se aconseja que la concentración de CO2 en los cultivos de Spirulina spp. varíe entre 0.05 – 5% (v/v), y
que este material, gaseoso, se suministre a cultivos de laboratorio, por burbujeo y mezclado con aire.
También se han propuesto mezclas con otros gases, como el nitrógeno. (BOGOTA,2006)

MEDIO DE CULTVO
El agua utilizada para hacer el medio de cultivo debe estar limpia, o filtrada para eliminar las algas
contaminantes. El agua potable es conveniente. Si contiene demasiado cloro, se debe airear. Si el agua es
muy dura, provocará la formación de depósitos desagradables pero no peligrosos. La utilización de agua
salobre puede ser interesante pero es necesario analizarla antes de utilizarla.

Algunas aguas contienen bastante o demasiado magnesio y/o hierro. El agua de mar, muy rica en magnesio,
puede ser utilizada pero con precauciones o tratamientos que no están incluidos en este documento.

El medio de cultivo puede obtenerse disolviendo los productos químicos siguientes en el agua:

 g/litro
 Bicarbonato de sodio 8
 Sal 5
 Nitrato potásico (o salitre) 2
 Sulfato dipotásico 1
 Fosfato monoamónico 0,1
 Sulfato de magnesio (MgSO4,7H2O) 0,2
 Solución de hierro (10 g de Fe/l) 0,1
 Cal (si el agua es muy poco dura) 0,02

Si se utiliza sal no refinada, no se necesita el sulfato de magnesio.

La solución de hierro se prepara disolviendo 50 g de sulfato de hierro (FeSO4, 7H2O) y 50 ml de ácido

clorhídrico concentrado en un litro de agua. Se puede también utilizar una solución saturada de hierro
(clavos) en vinagre con un poco de jugo de limón o carambola. Este medio de cultivo se utiliza para iniciar
nuevos cultivos o para completar el nivel de los estanques luego de vaciarlos parcialmente.

La composición arriba mencionada puede variar en amplias proporciones. Así, en lugar de los 8 g de
bicarbonato, se puede utilizar una mezcla de 5 g de carbonato de sodio y 1 g de bicarbonato, obteniendo un
pH de 10,4. Ciertos iones pueden ser introducidos en cualquier concentración, aunque limitada por la
salinidad total que no debe sobrepasar de 25 g/l. Se trata de los iones: sulfato, cloruro, nitrato y sodio. Los
iones fosfato, magnesio y calcio no pueden ser utilizados en concentraciones muy elevadas pues provocan
la formación de depósitos minerales y desequilibrios en la fórmula.

La concentración en potasio puede ser aumentada a voluntad, mientras no supere 5 veces la concentración
de sodio (se trata de concentraciones en peso). Esto permite utilizar la potasa extraída de la ceniza de
madera, con la lejía como sustituyente del bicarbonato/carbonato de sodio (es necesario dejar la lejía
expuesta al aire el tiempo suficiente, para que se carbonate hasta que su pH descienda por debajo de 10,8,
antes de utilizarla como base del medio de cultivo).
En caso de necesidad (o situación de supervivencia) es posible reemplazar nitrato, fosfato y sulfato con la
orina de personas o animales en buena salud y que no consuman medicamentos como antibióticos. La dosis
es de 4 ml/l de medio.

El nivel normal del medio de cultivo en un estanque es alrededor de 20 cm, aunque es posible cultivar con
10 cm hasta 40 cm.

SIEMBRA

Hay que escoger una simiente (cepa) de espirulina con forma helicoidal, con pocos o sin filamentos rectos
(al menos 50 % en espiral). Una simiente concentrada se obtiene fácilmente a partir de un cultivo sano,
tomándola de la nata (sobrenadante), o diluyendo con medio de cultivo una masa de espirulina fresca recién
cosechada pero sin exprimir. A la concentración máxima de 3 g de espirulina (peso seco) por litro, la
simiente se puede guardar y transportar durante una semana sin que se degrade, ésto a condición de que el
recipiente esté a medio llenar y se ventile al menos dos veces al día. Si la ventilación se hace con burbujas
contínuas de aire, la concentración puede llegar a ser hasta de 10g/l.

La siembra consiste simplemente en mezclar la simiente con el medio de cultivo. Es recomendable

mantener el nuevo cultivo inicialmente y en curso de crecimiento (dilución progresiva con medio de cultivo
nuevo) con una concentración de espirulina alrededor de 0,3 g/l (bien verde).

Se puede esperar una tasa de crecimiento de 30 % por día si:

 La temperatura es correcta,
 El medio de cultivo es a base de bicarbonato,
 Si se aumenta la superficie del estanque ( diluciones progresivas) manteniendo la
profundidad del cultivo a bajo nivel (no superando 10 cm) y la concentración de espirulina
alrededor de 0,3 g/l.

Cuando la superficie final del estanque es la deseada, aumentar el nivel y la concentración del cultivo al
nivel deseado hasta la concentración óptima de 0,4 g/l antes de iniciar la cosecha.

COSECHA
El mejor momento para la cosecha es por la mañana.temprano porque ::

 La baja temperatura hace el trabajo más agradable,

 Habrá más horas de sol para secar el producto,
 El porcentaje de proteínas tiene su máximo por la mañana,
 La filtración es más rápida.

La cosecha está dividida esencialmente en dos etapas:

 La filtración, para obtener una biomasa con un 10 % de materia seca (1 litro = 100 g de
peso seco),
 El exprimido, para eliminar el medio de cultivo residual y obtener la "espirulina fresca",
lista para ser consumida o secada, conteniendo alrededor de 20 a 25 % de materia seca
según las cepas y la salinidad del medio.
La filtración se efectúa simplemente por gravedad a través de una malla sintética (poliéster o poliamida) de
aproximadamente 40 μ (0,04 mm) de poro o malla. El filtro puede ser un saco colocado encima del estanque
para reciclar directamente lo filtrado. Antes de ser filtrado, el cultivo debe ser pasado por un colador o un
tamiz con malla de 0,3 mm para eliminar los cuerpos extraños como insectos, trozos de vegetales, etc. Se
puede hacer uso de un recipiente con bordes rectos, evitando mover el fondo donde se encuentran los
depósitos. La filtración se puede acelerar moviendo o raspando suavemente la malla. Una vez que la mayor
parte del agua ha sido eliminada, la espirulina (la biomasa) se junta formando como una "bola" gracias al
movimiento de la malla. A veces, la bola no puede formarse bien o se pega.

El prensado final se hace simplemente por presión: la biomasa se extiende en forma de torta de unos
centímetros de espesor, en una malla (puede ser la misma utilizada para la filtración, preferiblemente
redoblada por una tela sólida de algodón) entre dos placas ranuradas con pesos encima (piedras, ladrillos,
bloquetas, etc.), o en una prensa o un lagar. Una presión de 0,2 kg/cm2 durante un cuarto de hora es
suficiente para eliminar el agua intersticial, aunque a veces la presión y/o el tiempo deben ser más largos
para obtener una torta prensada suficientemente consistente.

Detener la presión cuando el "jugo" se vuelve demasiado verde.

Este sistema es más adecuado que el lavado con agua para eliminar los restos del medio de cultivo sin
destruir la espirulina, salvo que el exprimido sea muy difícil o imposible debido a una biomasa de calidad
inferior (100 % de filamentos rectos por ejemplo). En este ultimo caso el lavado debe hacerse de preferencia
con agua potable ligeramente salada y acidificada.

COMO MANTENER EL MEDIO DE CULTIVO

El principio consiste en reemplazar, después de cada cosecha, los elementos nutritivos tomados del medio
de cultivo por la espirulina cosechada, a fin de mantener la fertilidad del medio de cultivo. En la práctica
los nutrientes se pueden añadir regularmente cada día según la productividad media.

El mayor elemento nutritivo es el carbono, que el medio de cultivo absorbe espontáneamente del aire bajo
la forma de anhídrido carbónico (CO2) cuando su pH es mayor de 10. Como el aire contiene muy poco
CO2, la absorción de éste corresponde a una productividad máxima (cuando el pH llega a 11) de 4 g de
espirulina por día y por m2 de estanque. Es posible inyectar CO2 suplementario para aumentar la
productividad, bajo la forma de gas de fermentación alcohólica o de una botella de CO2 líquido: el gas
burbujea en el medio de cultivo cubierto por un plástico con soporte de madera (con una superficie de
alrededor de un 4 % de la del estanque) que lo retiene como una campana durante el tiempo que tarde en
disolverse. Una dosis de CO2 conveniente es de 1 kg por kg de espirulina producida.

El azúcar puede reemplazar al CO2 como fuente de carbono (medio kg de azúcar = 1 kg de CO2).

Además del carbono, la espirulina consume los nutrientes habituales en agricultura: N,P,K, S, Mg, Ca, Fe
y oligoelementos. En la mayoría de los casos, los oligoelementos y el calcio son aportados por el agua y las
impurezas de las sales utilizadas. En ciertos casos el agua contiene demasiado calcio, magnesio o hierro, lo
cual produce depósitos minerales que pueden ser molestos.

No hay que utilizar los fertilizantes agrícolas granulados de disolución lenta ("slow release"), ya que
contienen muchas impurezas. Utilizar los fertilizantes solubles cristalizados que se venden para las
soluciones nutritivas hortícolas.

En Chile el salitre potásico es la fuente preferida de nitrógeno pero en la mayoría de países la urea es la
fuente de nitrógeno más económica. La urea es excelente para la espirulina a condición de limitar su
concentración en el medio a 50 mg/litro. La urea en exceso puede transformarse en nitrato o en amoniaco.
Si en el cultivo se percibe un poco de olor a amoniaco no hay peligro, pero si el olor es fuerte, al menos una
parte de la espirulina morirá.

He aquí una fórmula clásica de alimento por kilogramo de espirulina (seca) cosechada:

 Urea 300 g
 Fosfato monoamónico 50 g
 Sulfato dipotásico 40 g
 Sulfato de magnesio (SO4Mg,7 H2O) 40 g
 Cal 10 g
 Solución de hierro (10 g/l) 50 g

En caso de necesidad, todos los nutrientes salvo el hierro pueden ser proporcionados por la orina de personas
o animales en buena salud y que no toman medicamentos como antibióticos. La dosis a utilizar es alrededor
de 17 ml/g de espirulina cosechada.

CUIDADO DEL CULTIVO

Además de la cosecha y del mantenimiento de los elementos nutritivos del medio, un cultivo de espirulina
requiere de otros cuidados para mantenerse sano.

La agitación es necesaria pero no de forma contínua. Una vez al día, justo después de la cosecha, es bueno
agitar el fondo del estanque para evitar la fermentación anaeróbica de los depósitos orgánicos. La agitación
superficial debe realizarse una vez cada dos horas, o más frecuentemente si hay gran iluminación.

Si la espirulina decanta al fondo del estanque (caso anormal pero que puede producirse por ejemplo después
de una brusca dilución por la lluvia), es necesario agitar frecuentemente para evitar la asfixia del cultivo.

La capacidad fotosintética de la espirulina se satura a la luminosidad correspondiente a un tercio de pleno

sol. El sombreado es benéfico para la salud de la espirulina y además útil para reducir la evaporación del
agua, la temperatura (< 40°C) o el pH (< 11). En la práctica es muy raro que la temperatura sea demasiado
alta en estanques al aire libre, pero el pH puede subir mucho si el aporte de carbono es insuficiente.

El nivel de agua del estanque debe mantenerse alrededor del nivel deseado. La evaporación puede
compensarse agregando agua. Un exceso de lluvia puede ser rectificado vaciando una parte del medio para
luego agregar los nutrientes contenidos en el volumen del medio arrojado.

Si se acumulan muchos depósitos en el fondo del estanque, podemos reducirlos mediante bombeo o
sifonado del medio de cultivo cerca del fondo, allí donde encontramos el depósito en mayor cantidad.
Después hay que agregar medio de cultivo nuevo en cantidad igual al del volumen eliminado. Otro método
para sacar los depósitos, más radical, consiste en transvasar el cultivo a otro estanque y limpiar el fondo.

En las grandes empresas industriales productoras de espirulina, el contenido en nutrientes e incluso en

oligoelementos del medio de cultivo, se determina por análisis químico, teniendo así la posibilidad de
agregar la cantidad exacta de los elementos que faltan. Este método resulta demasiado costoso para
pequeños cultivos; en éstos, lo adecuado es renovar parcialmente el medio de cultivo de vez en cuando (por
ejemplo 10 % cada mes).

Para evitar la formación de grumos con la cepa Lonar, es recomendable mantener el pH por encima de 10,2
así como un buen aporte de nitrógeno bajo forma de urea.
El cultivo es un ecosistema en el que diversos organismos viven en simbiosis: bacterias adaptadas al medio
que se nutren de los deshechos orgánicos y zooplancton (como paramecios) que se nutre de bacterias,
transformándolas en nutrientes minerales y CO2 para la espirulina. Las bacterias y el zooplancton consumen
además el oxígeno producido por la espirulina, lo que favorece el crecimiento de la espirulina. Estos
procesos biológicos son bastante lentos, de manera que si el nivel del medio de cultivo es bajo y/o de alta
productividad, podría haber acumulación de deshechos que enturbiarían el cultivo y dificultarían la cosecha.
Para mejorar está situación, basta con renovar el medio parcialmente o bajar la productividad sombreando
el estanque o dejando subir la concentración de espirulina; la mejora se produce normalmente al cabo de
una o dos semanas.

El cultivo puede ser colonizado por pequeños animales que viven a expensas de la espirulina, como larvas
de moscas Ephydra, o de mosquitos, rotíferos o amebas (generalmente no tóxicas). Según nuestra
experiencia, estas invasiones únicamente provocan una reducción de la productividad. Para eliminar estos
animales físicamente, podemos utilizar un colador (para larvas) y para eliminarlos biológicamente,
podemos aumentar momentáneamente la salinidad, el Ph o la temperatura del cultivo. Incrementar la
temperatura hasta 42°C parece ser el de más fácil realización (con un invernadero) y también muy eficaz.
Frecuentemente estos depredadores desaparecen por sí mismos al cabo de algunas semanas.

Un cultivo en que la salinidad o la concentración de espirulina son muy bajas, puede ser invadido por una
alga verde monocelular (comestible): la clorela; felizmente la clorela cae al fondo del estanque cuando se
para la agitación, quedando en la oscuridad donde muere al cabo de unos días. Lo mismo ocurre con las
diatomeas.

Las algas verde-azules tóxicas como Anabaena, Anabaenopsis arnoldii y Microcystis, no se desarrollan en
un cultivo de espirulina bien cuidado, pero por seguridad es recomendable hacer controlar
microscópicamente el cultivo por un microbiólogo una vez al año. Un cultivo de larvas de artemia en agua
salada (30 g de sal por litro) puede ser utilizado para verificar la ausencia de algas tóxicas: se agrega al
cultivo de artemias un poco del cultivo de espirulina y se observa el comportamiento de las larvas: si al
cabo de seis horas o más éstas siguen vivas y en plena forma, significa que no hay una concentración
peligrosa de algas tóxicas. Podemos adquirir huevos de artemias en las tiendas de acuariofilia.

Normalmente las bacterias patógenas habituales no pueden sobrevivir en el medio de cultivo si el pH es

superior a 9,5, lo que es el caso durante la producción de espirulina. Sin embargo es recomendable hacer
controles bacteriólogicos de la espirulina cosechada al menos una vez al año y en caso de epidemia (el
vibrio del cólera puede sobrevivir hasta un pH de 11).

CONSERVACION

Es cierto que la espirulina fresca (la biomasa prensada), tanto desde el punto de vista organoléptico como
por su valor nutritivo y de coste, es superior a toda otra forma de espirulina. Puede conservase dos días en
el refrigerador a 7°C o diez días a 1°C. Además se congela fácilmente.

Para quienes no disponen de refrigerador ni congelador, el salado puede ser otra solución. Agregando un
10 % de sal fina a la biomasa prensada y añadiendo una ligera capa de aceite, se asegura una conservación
de aproximamente un mes. El salado modifica el producto: su consistencia se vuelve más fluida, su color
más oscuro (la ficocianina azul es liberada) y el gusto se parece al de la pasta de anchoas.

El secado es el único modo de conservación comercial. Convenientemente embalada y almacenada la

espirulina seca puede conservarse hasta cinco años; pero el secado es costoso y frecuentemente da al
producto un gusto y olor que pueden ser juzgados desagradables por el consumidor.
 SECADO

En la industria, la espirulina es casi siempre secada por atomización en aire a muy alta temperatura, durante
un tiempo muy corto; este proceso da un producto de extrema fineza y poca densidad aparente pero es
imposible de ser utilizado en pequeña escala. La liofilización es un proceso ideal para la calidad, incluso en
pequeña escala, pero de coste tremendo.

El secado solar es frecuentemente utilizado por los pequeños productores, pero requiere de algunas
precauciones. Si se realiza por exposición directa al sol, que es la forma más rápida, debe ser de muy corta
duración ya que si no la clorofila será destruida en la superficie y el producto aparecerá grisáceo o azulado.

Sea cual fuere la fuente de calor, la biomasa fresca debe ser expuesta bajo una forma suficientemente
delgada que permita su secado antes de que empiece a fermentar. Dos fórmulas para ello: la pasta puede
ser esparcida en capa delgada sobre una lámina de plástico o formando “tallarines“cilíndricos de pequeño
diámetro ("spaghetti" de 2 mm de diámetro) sobre un plato perforado. En la primera fórmula, el aire caliente
pasa horizontalmente sobre la lámina, mientras que en la segunda, el aire sube verticalmente a través del
plato perforado. En teoría y en la práctica, la extrusión es el mejor método, si el diámetro de los tallarines
frescos no sobrepasa los 2 mm. Pero al mismo tiempo hace falta que los cilindros tengan la resistencia
mecánica suficiente para guardar su forma durante el secado y no "derretirse"; ésto es lo que impide el uso
de este proceso de secado cuando la biomasa prensada es de calidad inferior y carece de la firmeza
suficiente. De todas formas un buen flujo de aire es el factor más importante para evitar accidentes de
secado.

Antes y después del secado, la espirulina debe ser protegida del polvo y de los insectos y no debe ser tocada
con las manos.

La temperatura de secado debe ser limitada a 65°C y el tiempo de secado a 6 horas (aunque una vez secada
la espirulina puede quedar más tiempo al calor en el secador sin problema). Si se seca a baja temperatura,
es preferible terminar con 15 minutos a 65 °C para conseguir un buen grado de esterilización y también
bajar la humedad del producto a 5 % de agua.

Si la fermentación ha comenzado durante el secado, la podemos detectar por su olor durante y después del
secado.

Las escamas o tallarines secos son generalmente convertidos en polvo por molido para aumentar su
densidad aparente y facilitar su almacenamiento.

CONSUMO

Las personas que dicen no poder soportar el gusto ni el olor de la espirulina han estado expuestas,
ciertamente un día, a un producto seco de calidad mediocre. La espirulina fresca y de buena calidad es
neutra, de tal forma que puede reemplazar la mantequilla sobre las tostadas y puede servir para enriquecer
prácticamente cualquier alimento; deliciosas bebidas heladas pueden ser preparadas mezclando la
espirulina, especialmente fresca, con zumo de frutas.
La espirulina fresca es una pasta fácil de diluir, mezclar o esparcir. Hay literalmente miles de recetas
posibles para utilizar la espirulina fresca, congelada o seca, cruda o cocida.

Añadiremos que en agua a unos 70°C, el bello color verde de la espirulina (clorofila) a veces se vuelve
marrón.

3. DEFINICION DEL PROBLEMA

 No se han llevado a cabo muchos proyectos o investigaciones en Peru sobre el inpacto del pH en
la spirulina, es por eso que tomamos un rango amplio para poder tener un resultado más acertado.

 Se desconoce la cinética de crecimiento de la spirulina según los factores climatológicos en el país.

 No hay empresas industrializadas de gran impacto que produzcan spirulina en el país lo que es
una ventaja y a la vez un inconveniente para ver que demanda en el mercado podemos satisfacer.

4. HIPOTESIS
 El rango de pH seleccionado fue adecuado acertando en más de 2 medios un mayor crecimiento.

 La cinética de crecimiento de la spirulina según los factores climatológicos del Peru fue lo
esperado ya que los factores no tuvieron un impacto negativo en el desarrollo del cultivo.

 Se hizo una proyección positiva de una empresa enfocada en la elaboración de spirulina

encontrando factible la opción de hacer una industria.

5. JUSTIFICACION

5.1. SOCIAL

Con tasas de anemia de 51,1% en niños de zonas rurales, la situación del Perú pide que más empresas se
unan a la lucha contra el hambre. Una de las opciones más rentables es justamente donar alimentos.

Las cifras que describen la situación alimentaria del país –y que afectan la productividad de su fuerza
laboral- son variadas: si, por un lado, encontramos que en los últimos cinco años la desnutrición
crónica bajó en 6,4 puntos porcentuales en menores de cinco años (hoy en 13,1%); por el otro lado, también
tenemos que aún el 51,2% de los niños de 6 a 35 meses en áreas rurales tiene anemia, según el Ministerio
de Agricultura.
 5.2. ECONOMICA

6. OBJETIVOS

6.1. Objetivo General

Determinar el valor de pH más adecuado para el mejor desarrollo de la cinética de crecimiento en Spirulina
spp., bajo condiciones de laboratorio en el departamento de Arequipa, Perú.

6.2. Objetivos específicos

 Analizar los cultivos de spirulina con los pH 8.0, 8.5 9.0, 9.5 y de 10.0 para poder determinar el
medio adecuado en Perú.
 Determinar cinética de crecimiento de la spirulina según el pH optimo encontrado.
 Determinar si es factible hacer una empresa de este producto.

7. VARIABLES

8. MATERIALES Y METODOS
8.1. MATERIALES

 Manual de cultivo
 Cepa de Espirulina
 Bicarbonato sódico
 Sal
 Agua sin cloro
 Recipiente de Vidrio
 Bomba de aire
 Tubos de conexión
 Temporizador analógico.
 Termómetro Difusor de aire
 Nutrientes para el cultivo
 Tela de filtro de 40 micras (200 hilos/cm²)
 Báscula de cocina
 Tela para sombrear
 Medidor de pH
 Microscopio
 Medidor de nitratos
 Medidor de nitritos
8.2. METODO EMPLEADO
 a) Preparación del estanque
Vamos a trabajar con un estanque de vidrio de dimensiones (50x30x40 cm) el cual lo
vamos a revestir de una bolsa de plástico, le incorporaremos una bomba de aire para
mantener ventilado nuestro sistema aireado en esta experiencia trabajaremos con la luz
del día y por la noche con unos fuente lumínica.

b) Medio de cultivo
El agua utilizada debe estar limpia y filtrada sin cloro, algunos iones pueden estar presentes
pero en concentraciones limitadas sin sobrepasar 25 g / l; estos son: sulfato, cloruro,
nitratos, y sodio.

En nuestro recipiente de vidrio le incorporaremos el agua seguidamente de nuestro medio

cultivo que consta de (10 litros de agua +100 g de bicarbonato sódico +50 g de sal) y lo
dejaremos hay toda la mezcla conectado a la bomba de aire por 2 días.

Es importante que tomemos la medida de la temperatura y el pH en todo momento en un

transcurso de cada 4 horas para poder evaluar su comportamiento.

c) Incorporación Del Alimento y el Sirope de hierro para la Spirulina.

Pasado los dos días pasaremos a alimentar nuestro cultivo cuya tasa de crecimiento se
estima que será del 30% al día en la temperatura adecuada en esta etapa alimentaremos
a nuestro cultivo le añadiremos 200 ml de alimento (agua , Nitrato de Potasio, Fosfato
Mono amónico, fosfato de Potasio , Fosfato de Magnesio ) , Como el crecimiento es
proporcional a la superficie del cultivo expuesto a la luz, se recomienda aprovechar al
máximo esta zona en todo momento (es decir, utilizar la mínima profundidad ).

Seguidamente le incorporaremos 20 ml del sirope de Hierro que consta de (sulfato de

hierro, vinagre y agua) en las proporciones que se muestran en la tabla de arriba.

La cantidad de gas, azúcar o bicarbonato a ser alimentado se ajusta a fin de controlar el

pH alrededor de 10.4. Un pH inferior a 10.2 puede causar un exceso de reacciones, pero
no es peligroso.

Además de carbono, la spirulina requiere importantes nutrientes biológicos, como lo

son: N, P, K, S, Mg, Ca, Fe, además de una serie de micronutrientes. En muchos casos,
los micronutrientes y el calcio no necesitan ser adicionados al cultivo, pues se
suministran de manera natural como impurezas contenidas en la composición del agua
y los productos químicos utilizados como alimentos para la spirulina.

d) Cosecha
La mejor época para la cosecha es temprano en la mañana por varias razones:

 Bajas temperaturas hacen el trabajo más fácil, Más horas de sol se pondrá a disposición
el secado del producto.
 El % de proteínas de la spirulina es más alto en la mañana.

Existen básicamente dos pasos de la cosecha:

 Filtración para obtener una "biomasa" que contiene alrededor del 10% de materia seca y el
50% de residuos. Esto se logra simplemente con pasar el cultivo a través de un fino tejido
de tela, usando la gravedad como la fuerza motriz. Dicha tela debe ser de fibra sintética (en
 especial de poliamida o poliéster), con un tamaño de malla preferido de unos 30 a 50
micrones.

 El cultivo para ser cosechado debe ser transmitido a través de un tamiz (malla alrededor de
200 μ) para eliminar cualquier materia extraña, tales como insectos, larvas, hojas y trozos
de polisacáridos o de barro. No se recomienda para la cosecha de la capa flotante.

 El desagüe final se logra presionando la biomasa encerrada en una pieza de filtración de

una tela más fuerte, ya sea a mano o en cualquier tipo de prensa.
 El "zumo", que es expulsado sale primero incoloro, más tarde, se pone verde.
 El pH de la biomasa se encuentra cerca de 7 (neutralidad).

 El lavado con agua dulce puede provocar la ruptura de la pared celular de la spirulina,
debido a shock osmótico, dando lugar a una pérdida de valiosos productos.

La filtración se hace en un filtro de 30 μ malla de tela. Cuando la mayor parte del agua se
ha filtrado a través de la biomasa el aglomerado se convierte en una "bola" en virtud del
movimiento de la tela de filtro, dejando la tela limpia; en esta etapa la biomasa contiene

e) Cuidados del cultivo

 La agitación es un requisito. Sin embargo, la agitación continua no es necesaria.

 Una tercera parte de pleno sol satura la capacidad fotosintética de la spirulina, pero es
sombreado no es obligatorio, excepto para reducir el consumo de agua (evaporación) o la
temperatura (<38 ° C) o el pH (<11,3). La temperatura casi nunca es demasiado alta.

 La profundidad del cultivo de Spirulina debe mantenerse entre 10 y 20 cm. La evaporación

debe ser compensada por la adición de agua. Las lluvias deben ser compensadas, ya sea por
evaporación o drenaje.

 Si demasiado barro se acumula en el fondo del estanque, puede ser destituido por bombeo
o envío (de preferencia, mientras que la spirulina es flotante, con el fin de reducir la
pérdida).

f) Secado
La liofilización se presenta como la mejor manera de secado, pero resulta demasiado
costosa y complicada. El secado del sol es el más popular entre los pequeños productores,
pero requiere algunas precauciones, como es tener en cuenta que la clorofila es destruida
cuando lleva cierto tiempo al sol, de esta manera el producto solo parecerá azulado.

Cualquiera que sea la fuente de calor, la biomasa debe ser lo suficientemente delgada para
secar antes de que se inicie la fermentación.

21
 8.3. CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES

FECHAS
abril mayo junio
ACTIVIDADES 26 3 10 17 24 31 7
Primer avance del proyecto
Segundo avance del
proyecto
Parte experimental
Entrega y exposición del
primer proyecto

22