Medio Fundamento Componentes Resultados Indicador

de cultivo
El almidón es una macromolécula que necesita Extracto de carne 3g Halo incoloro alrededor del inóculo indica la
una hidrólisis previa para ser utilizado por los Peptona 5g hidrólisis del almidón, por lo tanto, el
microorganismos. Este medio se utiliza para Almidón soluble 2g microorganismo es amilasa positivo. Una
identificar microorganismos que producen la Agar-agar 15g coloración azul-parda significa que el almidón no
Agar enzima amilasa, que hidroliza el almidón en Agua destilada 1L ha sido hidrolizado por el microorganismo, es Solución de
Almidón glucosa y restos de maltosa. decir, es amilasa negativo. Lugol

Las proteínas que se producen naturalmente son Peptona 10,0 g Un halo incoloro alrededor del inóculo indica la
demasiado grandes para entrar en la célula Cloruro de sodio 5,0g hidrólisis de la gelatina, el microorganismo es
bacteriana, primero deben ser degradadas a Extracto de carne 5,0g gelatinasa positivo. Si existe formación de un Reactivo de
polipéptidos y finalmente hasta aminoácidos. Gelatina 4,8g precipitado blanco alrededor del cultivo se Frazier que
La gelatina, es un colágeno desnaturalizado que Agar 15,0g considera negativo, ya que esto corresponde a la contiene
Agar
tiene poco valor nutritivo, se usa para detectar la Agua destilada 1000 mL reacción de la el microorganismo no posee la Cloruro de
Gelatina
actividad proteolítica. Con este test se determina pH 7,2 enzima gelatinasa. Mercurio, HCl y
la capacidad de un organismo para producir agua destilada.
enzimas de tipo proteolítico, gelatinasas, que
licúan la gelatina

La caseína es una proteína encontrada en la leche. Peptona 5,0 g La proteólisis se evidencia por halos claros
Cuando la leche es mezclada con un medio de Extracto de levadura 3,0 g transparentes alrededor de las colonias (debidos a
cultivo, éste pierde su transparencia y se vuelve Leche en polvo descremada la degradación de la caseína).
turbio debido a que la caseína reacciona con los 1,0 g
iones calcio formando complejos coloidales Agar-agar 12,0 g
Agar
insolubles de caseínato de calcio, cuando la Agua destilada 1,0 L
Leche
enzima caseinasa cataliza la hidrólisis de la pH = 7,2±0,2
Descremada
caseína, los aminoácidos resultantes se disuelven
en el medio acuoso y el medio se vuelve de nuevo
transparente alrededor de la colonia del
microorganismo. Permite detectar la degradación
de la proteína.
Algunos microorganismos producen lecitinasa que Pectina 20,0 g Una prueba de lecitinasa positiva, consiste en la
Agar
hidroliza la lecitina (fosfolípido). Se utiliza el agar Fosfato disódico 2,5 g aparición de una zona opaca alrededor del
Yema de
yema de huevo. Las colonias productoras de Cloruro de sodio 1,0 g crecimiento microbiano, como resultado de la
Huevo
lecitinasa forman una zona opaca a su alrededor. hidrólisis de la lecitina de la yema de huevo.

La infusión de músculo de corazón y la peptona,
otorgan al medio un alto valor nutritivo, que
permite el crecimiento de una gran variedad de
microorganismos, aún de aquellos
Gelosa nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio
Sangre mantiene el balance osmótico.
El agregado de sangre al medio de cultivo, en
concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes
para el crecimiento bacteriano, y permite detectar
hemólisis.
Permite diferenciar organismos sobre la base de
sus múltiples reacciones metabólicas en un medio
lácteo. El tornasol incorporado a la leche es un
indicador de pH y de oxidación-reducción que
hace que el medio pueda indicar diversas
funciones metabólicas. La leche contiene
lactosa, caseína, lactalbúmina y lactoglobulina, un
organismo puede mostrar una o varias
propiedades metabólicas en la leche tornasolada
ayudando así a la identificación bacteriana.
Leche
Tormasolada
Solución al 0,5% p/v de
sulfato de magnesio 0,1 mL
Glucosa 1,0 g
Agar 12,5 g
Agua destilada 500 mL
Infusión de músculo de
corazón 375 g
Peptona 10 g
Cloruro de sodio 5 g
Agar 15 g
pH 7.3
Leche descremada en polvo
100 g
Clorhidrato de cisteína 0,3 g
Agar-agar 0,5 g
Tornasol (Litmus) 0,75 g
Agua destilada 1,0 L
E. coli sin hemólisis
S. aureus hemólisis beta
S. pyogenes hemólisis beta
S. pneumoniae hemólisis alfa
Fermentación de lactosa: la leche tornasolada
presenta un color purpúreo a pH = 6,8. Si el
microorganismo fermenta la lactosa con
producción de ácido láctico, el descenso de pH
hace virar el indicador a color rojo rosado. Si la
bacteria no fermenta la lactosa, y por su
metabolismo se alcaliniza el medio, el indicador
vira de púrpura a púrpura azulado.
Formación y digestión del coágulo
(peptonización): La coagulación puede deberse a
la precipitación de la caseína por la formación de
ácidos, o por la conversión de la caseína en para-
Tornasol
caseína por la enzima renina. En el primer caso, el
coágulo es firme y gelatinoso, no se separa de las
paredes del tubo y se disuelve en medio alcalino.
En el segundo caso, el coágulo es blando, se
separa de las paredes del tubo dando un líquido
grisáceo (suero). La peptonización o digestión del
coágulo se produce si la bacteria posee la enzima
caseasa.
Formación de gases: se generan como producto
final de la degradación de la lactosa. Se produce
una fermentación turbulenta que puede llegar a
descomponer el coágulo ácido.

Medio Fundamento
de cultivo
Este medio de cultivo se utiliza para el
crecimiento y multiplicación de
diversos microorganismos. Como no
contiene más hidratos de carbono que
Caldo Glucosado la glucosa, el medio es adecuado para
la demostración de fermentación de
glucosa cuando se agrega previamente
un indicador de pH.
Para diferenciación de coliformes y
otros microorganismos en especial
Enterobacter y Escherichia coli,
basándose en el consumo de malonato.
Caldo Malonato
El extracto de levadura proporciona
vitaminas. La dextrosa es la fuente de
energía. El cloruro de sodio ayuda a
mantener el equilibrio osmótico.
El caldo rojo de fenol es usado
para observar la fermentacion de algún
carbohidrato como puede ser maltosa,
Caldo Base Rojo de glucosa, sacarosa, lactosa, trealosa, etc.
Fenol El caldo rojo de fenol solo lleva un
carbohidrato a la vez.
Medio empleado para la diferenciación
de cultivos puros de bacilos Gram
negativos en base a su capacidad para
fermentar la dextrosa y la lactosa y a la
Medio Inclinado producción de sulfuro de hidrógeno.
Kligler
CARBOHIDRATOS
Componentes Resultados Indicador
Peptona de caseína 10 g Viraje del medio de un color naranja al
Extracto de carne 3 g amarillo, indica que hubo degradación
NaCl 5 g de glucosa, degradación en un
Glucosa 10 g ambiente anaeróbico, podemos afirmar
Agua destilada 1 L que su metabolismo de los azúcares es
pH = 7,3 ± 0,1 fermentativo.
Azul de nromotimol 0.025g La degradación del malonato origina Azul de
Cloruro de sodio 2g alcalinización del medio que se bromotimol
Dextrosa 0.25g manifiesta por vire del indicador de pH
Extracto de levadura 1g azul de bromotimol de verde a azul
Fosfato dipotásico 0.6g (reacción positiva). Cuando no se utiliza
Fosfato monopotásico 0.4g el malonato no hay cambio de color y
Maldonado de sodio 3g es una reacción negativa.
Sulfato de amonio 2g
Peptona de caseina, 12g Si hay fermentación del carbohidrato el Rojo de fenol
Extracto de carne, 1g caldo tornara de color rojo a amarillo,
Cloruro sódico, 5g puede observarse gas en forma de
Rojo fenol, 0.018g burbujas, estas burbujas se pueden ver
Carbohidrato,10g mucho mejor en una campana de
Agua destilada, 1000ml Durham. Si no hay fermentación el
caldo tiene una coloración naranja-
rojiza.
Mezcla de peptonas 20g Una superficie roja y un fondo amarillo Rojo de fenol
Lactosa 10g indica fermentación de dextrosa.
Dextrosa 1g Superficie y fondo amarillo indica
Rojo de fenol 0.025g fermentación de dextrosa y lactosa.
Cloruro de sodio 5g Superficie y fondo rojo indica que no
Tiosulfato de sodio 0.5g hubo fermentación de ningún tipo.
Citrato de hierro y amonio Presencia de burbujas o fracturas indica
0.5g una producción de gas.
Agar 15g Presencia de precipitado negro indica
producción de sulfuro de hidrógeno.
 Este medio se utiliza para la
identificación de microorganismos,
especialmente enterobacterias, y
Medio Inclinado ciertos hongos, basado en el empleo de
Citrato de Simmons citrato como única fuente de carbono.
Citrato de sodio 2g El empleo de citrato por ciertos Azul de
Cloruro de sodio 5g microorganismos da lugar a una bromotimol
Fosfato dipotásico 1g alcalinización del medio de cultivo, lo
Fosfato monoamónico 1g que se manifiesta por un viraje al azul
Sulfato de magnesio 0.2g oscuro del indicador de pH Azul de
Azul de bromotimol 0.08g bromotimol.
Agar 15g
PH 6.9
 AMINOACIDOS
Medios Fundamento Composición Resultado Indicador
de cultivo
LIA Medio de cultivo utilizado para diferenciar Peptona de gelatina 5g Decarboxilación de la lisina: Púrpura de
microorganismos, especialmente Salmonella Extracto de levadura 3g Positiva: Pico violeta/fondo violeta. bromocresol.
spp., basado en la decarboxilación / Glucosa 1g Negativa: Pico violeta/fondo amarillo.
desaminación de la lisina y en la producción de Lisina 10g Desaminación de la lisina:
ácido sulfhídrico. Citrato de hierro y amonio 0.5g Pico rojizo/fondo amarillo. Esto sucede
Tiosulfato de sodio 0.04g con cepas del género Proteus,
Púrpura de bromocresol 0.02g Providencia y alguna cepas de Morganella
Agar 75g spp.
pH 6.7 Producción de ácido sulfhídrico:
Positiva: Ennegrecimiento del medio
(especialmente en el límite del pico y
fondo).
SIM Medio de cultivo de ensayo para comprobar la Tripteína 20g Cepas móviles: producen turbidez del
formación de sulfuro, de indol y la motilidad de Peptona 691g medio.
Enterobacteriáceas. Sulfato de hierro y amonio 0.2g Cepas inmóviles: el crecimiento se
El triptófano es un aminoácido constituyente de Tiosulfato de sodio 0.2g observa solamente en la línea de
muchas peptonas, y particularmente de la Agar 3.5 siembra.
tripteína, que puede ser oxidado por algunas pH 7.3 Cepas SH2 positivas: ennegrecimiento a
bacterias para formar indol. En el proceso lo largo de la línea de siembra o en todo
interviene un conjunto de enzimas llamadas el medio.
triptofanasa. El indol producido se combina con Cepas SH2 negativas: el medio
el aldehido del reactivo de Kovac´s o de Erlich, permanece sin cambio de color.
para originar un compuesto de color rojo. Cepas indol positivas: desarrollo de color
rojo luego de agregar el reactivo de
Kovac´s o de Erlich.
Cepas indol negativas: sin cambio de
color.
Triptona Medio líquido recomendado para Triptona 10g Se agrega el reactivo de Kovacs, en los Reactivo de
enriquecimiento y para verificar la producción Cloruro de sodio 5g microorganismos indol positivo la capa de Kovacs
de indol por los microorganismos. pH 7.5 reactivo toma un color rojo-cereza al
El agua triptona, por su base nutritiva, permite cabo de pocos minutos.
el desarrollo de diversas especies bacterianas, y
debido a su alto contenido de triptofano, es un
buen sustrato para la producción de indol.
Referencias

 Roberto Alarcón Luis, Olivas E. Evangelina, (2004), Manual de Prácticas de Microbiología Básica y Microbiología de Alimentos,
Academia de Microbiología y Parasitología, Universidad Autónoma de Ciudad Juárez.
 Universidad Técnica Federico Santa María, Departamento de Ingeniería Química y Ambiental, Laboratorio de Introducción a la
Microbiología, Prácticas 5: Pruebas bioquímicas y aislamiento.