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DATOS INFORMATIVOS:
NOMBRE: EDWIN MANUEL TOCTO MACAS
CARRERA: Medicina Veterinaria y Zootecnia
CICLO/NIVEL: 2do ciclo
FECHA: 28/11/17
DOCENTE RESPONSABLE: Dr. Luis Hurtado Flores
Disponibilidad de nutrientes.
Consistencia adecuada del medio.
Presencia o ausencia de oxígeno y otros gases.
Condiciones adecuadas de humedad (mantener en frigorífico).
Luz ambiental.
pH adecuado.
Temperatura.
Esterilidad.
Importancia
En microbiología, los cultivos son muy importantes ya que éstos ayudan a estudiar la
conducta de las bacterias que cultivamos como son: capacidad de adaptación, proceso de
multiplicación, entre otros; por tanto así se podrá conocer cuál es la facilidad de un
microbio para adaptarse y multiplicándose y de esta manera propagándose produciendo
enfermedades.
Un cultivo es empleado como un método fundamental para el estudio de las bacterias y
otros microorganismos que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria. Por
tanto a partir de un cultivo se puede aislar un microbio, que puede ser patógeno o no, con
lo cual se puede proceder a realizar un antibiograma que sirve para analizar que
antibiótico es el más competente para combatir tal enfermedad causada por dicho
microbio cultivado y aislado.
Es por tanto que los cultivos microbiológicos son de vital importancia al momento de
rastrear un microbio y al mismo encontrarle un antibiótico que cause la muerte o en caso
de que sea muy resistente por lo menos disminuya sus efectos contra el organismo que
está atacando.
REALIZACIÓN DE LOS ANTIBIOGRAMAS BACTERIANOS
Antibiograma
El antibiograma es la prueba microbiológica que se realiza para determinar la
susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibióticos. Las
técnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiología para
estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de
las infecciones.
Se considera como antimicrobiano cualquier sustancia con capacidad de matar o al menos
de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de utilización
como tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintéticos o semisintéticos
(modificación química de un compuesto natural). La historia moderna de los antibióticos
comienza con el descubrimiento de sustancias presentes en unos microorganismos
capaces de matar a otros microorganismos. La utilización de antibióticos supuso un
avance enorme en la esperanza de vida de las personas que padecían procesos infecciosos,
aunque también supuso un aumento en los niveles de resistencia antibiótica.
Los métodos fenotípicos (antibiograma) son los más utilizados. Consisten en enfrentar
un inóculo bacteriano estandarizado a una única o a diferentes concentraciones de
antibiótico. La interpretación de los resultados obtenidos permite clasificar a los
microorganismos en categorías clínicas: sensibles, intermedios o resistentes. Hay que
tener en cuenta que no siempre un valor de CMI más bajo indica mayor actividad de este
antimicrobiano, ya que las CMI que definen la sensibilidad o resistencia son diferentes
para cada especie bacteriana y cada antimicrobiano. Si un microorganismo es sensible
indica que con las dosis habituales se espera una evolución favorable de la infección,
siempre que se alcancen valores adecuados en el lugar de la infección, lo que en ocasiones
no es posible (p. ej., en el sistema nervioso central). Por el contrario, si el microorganismo
es intermedio o resistente, es probable que la evolución sea desfavorable. La
interpretación de la sensibilidad predice mejor el fracaso (cuando es resistente) que el
éxito de un tratamiento.
Entre los métodos fenotípicos, las técnicas de dilución determinan la CMI utilizando un
medio líquido (dilución en caldo) o un medio sólido (dilución en agar) para disolver las
diferentes concentraciones del antimicrobiano. El medio estandarizado para la realización
del antibiograma es el medio Mueller-Hinton, al que se le añade sangre u otros
suplementos para bacterias que no crecen en él. La CMI es la dilución más baja de
antimicrobiano en la que no se observa crecimiento bacteriano. La dilución en caldo suele
realizarse en micro método (microdilución), en paneles multipocillos, y es el sistema
mayoritariamente adoptado por los sistemas automáticos comerciales para determinar la
sensibilidad a los antimicrobianos. En estos sistemas, la lectura de los valores de CMI y
la interpretación de resultados se realizan de forma automática.
Las técnicas de difusión emplean discos de papel impregnados con una solución
estandarizada de antibiótico que se disponen sobre la superficie de un medio sólido
previamente inoculado en su superficie con una suspensión bacteriana. Tras un período
de incubación de 18 h, el diámetro del halo formado está en relación con el grado de
sensibilidad del microorganismo. La carga del disco está ajustada para que los halos de
inhibición permitan diferenciar los microorganismos sensibles de los resistentes y pueda
establecerse una correlación con los valores de CMI: halos pequeños se relacionan con
valores altos de CMI (resistentes) y halos grandes con CMI bajas (sensibles). Otra técnica
de difusión es el E-test, que además permite la determinación directa del valor de la CMI.
Utiliza tiras de plástico impregnadas con un antibiótico en concentraciones decrecientes.
Al contacto de la tira con el agar, el antibiótico difunde e impide el crecimiento del
microorganismo.
Los métodos bioquímicos consisten en la determinación del mecanismo por el cual una
bacteria es resistente a un antimicrobiano. Los más utilizados son la detección de b-lacta
masa con discos impregnados con una cefalosporina cromo génica que cambia de color
cuando se hidroliza (método que se utiliza para la detección rápida de la resistencia a
ampicilina en Haemophilus spp., Neisseria spp. y Moraxella spp.), o la detección de la
PBP2a responsable de la resistencia a cloxacilina en Staphylococcus aureus, por una
técnica de aglutinación con látex.
Finalmente, los métodos genéticos detectan genes de resistencia, generalmente mediante
técnicas de PCR, como en el caso del gen mecA que codifica la producción de la PBP2a.
Interpretación de un Antibiograma
Resistencia bacteriana
El antibiótico no crea resistencia, pero selecciona las bacterias resistentes eliminando las
sensibles. Es lo que se conoce con el nombre de presión de selección. El aumento de la
frecuencia de las cepas resistentes va unido casì siempre al uso intensivo del antibiótico
en cuestión.
Evolución, en general, de algunas Evolución, en hospital, de algunas
resistencias bacterianas resistencias bacterianas
La resistencia natural es un carácter constante de todas las cepas de una misma especie
bacteriana. El conocimiento de las resistencias naturales permite prever la inactivìdad de
la molécula frente a bacterias identificadas (después del crecimiento) o sospechosas (en
caso de antiboterapia empírica). En ocasiones, constituye una ayuda para la
identificación, puesto que cìertas especies se caracterizan por sus resistencias naturales.
Ejemplos: Resistencia natural del Proteus mirabilis a las tetraciclinas y a la colistina.
Resistencia natural de la Klebsiella pneumoniae a las penicilinas (ampicilina,
amoxicilina).
Referencias bibliográficas
Sham D. The role of clinical microbiology in the control and surveillance of antimicrobial
resistance. ASM News. 1996;62:25-9.
Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). Performance standards for antimicrobial
susceptibility testing;eighteenth informational supplement. CLSI document M100-S19.
Wayne, PA: CLSI;2009.
European Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing (EUCAST): Expert rules
in antimicrobial susceptibility testing, 2008. Disponible en:
http://www.srga.org/eucastwt/MICTAB/index.html
Webgrafía
http://www.danival.org/microclin/antibiot/_madre_antibiot.html
http://www.srga.org/eucastwt/MICTAB/index.html
UNIVERSIDAD TÉCNICA DE MACHALA
UNIDAD ACADÉMICA DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
INFORME DE PRÁCTICA DE MICROBIOLOGÍA
DATOS INFORMATIVOS:
NOMBRE: EDWIN MANUEL TOCTO MACAS
CARRERA: Medicina Veterinaria y Zootecnia
CICLO/NIVEL: 2do ciclo
FECHA: 28/11/17
DOCENTE RESPONSABLE: Dr. Luis Hurtado Flores
FUNDAMENTACIÓN
OBJETIVOS
MATERIALES E INSUMOS
PROCEDIMIENTO
Antes que nada se debe tener los tubos con medio de cultivo previamente estériles.
1. Colocamos los tubos dentro del vaso de precipitación y llevamos al reverbero hasta
que el medio de cultivo se licue (vuelva líquido).
2. Para preparar en placas Petri: Con el mechero encendido procedemos a colocar
el medio en las cajas Petri manteniendo el diámetro de esterilidad.
3. Luego movemos el medio para que se homogenice en la caja.
4. Para preparar tubo inclinado pico de flauta: lo único es colocar el tubo a cierta
inclinación.
5. Esperamos el secado de los medios.
Procedimiento para sembrar en caja Petri
1. Esterilizamos el asa y tomamos una muestra
2. Acercamos al radio de esterilidad y con práctica abrimos la caja Petri.
3. Realizamos las estrías con el asa.
4. Colocamos en la incubadora con la tapa hacia abajo
Procedimiento para sembrar en tubo inclinado
1. Con l ayuda del asa tomamos una muestra
2. Tomamos el tubo y lo acercamos al radio de esterilidad, realizamos el estriado y
el piquete.
3. Cerramos y colocamos en la incubadora
CUADRO DE RESULTADOS
- El medio se licuo al someterlo a la temperatura.
- Al colocarlo en las cajas Petri y dejarlo reposar se seco
- El tubo inclinado pico de flauta se solidificó cuando se dejó reposar y tomo
cierta inclinación.
- Las asas sirvieron para sembrar realizando las estrías correspondientes.
- La incubadora servirá para darle las condiciones térmicas al cultivo
CONCLUSIONES
Luego de haber realizado el cultivo pude constatar que las buenas particas al momento de
sembrar bacterias nos darán buenos resultados, pero antes de aquello algo muy importante
es que el agar al solidificarse el medio de cultivo no debe arrugarse.
Puedo concluir que para sembrar no necesito tener muestras de algún tipo extraño sino
utilizar para una práctica cualesquiera que esté a nuestro alcance como puede ser: agua
de charco, agua de retrete, entre otros.
RECOMENDACIONES
- Se recomienda esterilizar el área de trabajo todas las veces que se lo vaya a
utilizar
- Utilizar con cuidado el mechero de Bunsen
- Manipular cuidadosamente el vaso de precipitación antes y después de que pase
por el reverbero.
- No abrir las cajas Petri ni los tubos en un área muy lejana al radio de esterilidad
del mechero de bunsen.
- al momento de realizar la estría tener cuidado de no arrugar el medio ya que no
sirve para sembrar si está en esas condiciones.
BIBLIOGRAFÍA