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Microbiología
PRÁCTICA ENZIMAS:
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD AMILASA Biotecnología
CON APLICACIÓN EN LA HIDRÓLISIS DEL Industrial
ALMIDÓN
Laboratorio de
Biotecnología
1-207
Profesora: Luisa Fernanda Rojas Hoyos
INTRODUCCIÓN
Las amilasas son unas de las enzimas más utilizadas en los procesos de hidrólisis del almidón,
uno de los polímeros más abundantes en el reino vegetal. La α-amilasa en particular, cataliza los
enlaces α 1-4 de la amilosa y la amilopectina, que son los polisacáridos lineales y ramificados,
respectivamente, que conforman el almidón. Por su parte la amiloglucosidasa, es uno de los
catalizadores más antiguos en la industria de alimentos y cataliza la ruptura tanto de los enlaces
α 1-4 como α 1-6, dando como producto un jarabe glucosado con un porcentaje de conversión
superior al 90% en equivalentes de dextrosa (Kumar y Satyanarayana, 2009). Estas enzimas
pueden ser obtenidas a partir de diferentes fuentes vegetales y microbianas, en especial
microorganismos del género Aspergillius, Trichoderma, así como levaduras (Castaño et al.,
2011).
En los últimos años, se ha incrementado el interés en los procesos de hidrólisis enzimática del
almidón obtenido a partir de diferentes fuentes (maíz, yuca, banano, entre otros, etc.), utilizado
para la producción de glucosa, la cual es empleada como sustrato para procesos microbiológicos
orientados a la biosíntesis de metabolitos para la industria de alimentos (Whitaker et al., 2003),
productos farmacéuticos y biocombustibles entre otros (Rojas et al., 2003; Castaño et al., 2011)
Con el fin de incrementar la eficiencia de los procesos de hidrólisis enzimática del almidón, se
vienen comercializando una diversidad de enzimas del tipo α-amilasas y mezclas de ellas. En este
sentido es importante adquirir destreza en procesos de caracterización y selección de las
enzimas adecuadas para la realización de estos procesos. Por lo anterior, surge una pregunta,
¿Cuáles son los criterios para seleccionar una enzima aplicable a un proceso industrial? Dentro
de estos criterios, se encuentra la validación de la actividad enzimática, reportada por el
fabricante de la enzima y en combinación con la información reportada en la ficha técnica, es
posible iniciar un proceso de selección adecuado.
OBJETIVOS
General
Adquirir destreza en el proceso de selección de una enzima del tipo α-amilasa con aplicación en
la hidrólisis del almidón.
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Específicos
REACTIVOS
10 g Almidón de yuca, arroz, maíz o banano (Solicitar a los estudiantes el mismo tipo de
almidón para todos).
5 mL de amilasas de cada una de las siguientes referencias (Se solicitan en el grupo de
Biotransformación):
Termamyl®,
Gzyme480®
StargenTM
Optidex TM L-400
200 mL Agua destilada
50 mL de Reactivo DNS con curva de calibración
Soluciones para ajustar pH.
EQUIPOS
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PROCEDIMIENTO
2. Incubar a 70°C, cada solución de almidón de acuerdo a la enzima asignada (ver Tabla 1).
Cuando la solución alcance la temperatura adecuada, adicionar 300 μL de la enzima
(Verificar que el almidón no se gelifique). Registrar el tiempo en calentamiento y tomar
una muestra de cada ensayo. Marcarla como E1(t=x) y E2(t=x), donde x es el tiempo que
demoró en alcanzar la temperatura de 70°C, aproximadamente 10 min).
RESULTADOS
2. Calcule para cada tratamiento la actividad enzimática (AE) en unidades (U). Defina la
actividad enzimática para las amilasas trabajadas.
3. Obtener las fichas técnicas de las enzimas trabajadas y en combinación con AE obtenida,
seleccionar la enzima o el tratamiento apropiado para el proceso de hidrólisis
enzimática del almidón.
4. Solicitar al equipo que corresponda, los datos con los cuales debe hacer la comparación.
PREGUNTAS
1. Cuáles son las condiciones de operación que afectan la actividad enzimática de las
amilasas?
2. Con relación a las fichas técnicas consultadas, cual enzima o mezcla de enzimas
compraría? Justifique
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3. Cual información relevante debe estar consignada en una ficha técnica en general? Esta
completa la información de las fichas consultadas?
DIAGRAMA DE TRABAJO
BILBIOGRAFÍA
Castaño, H.; Cardona, M.; Mejía, C.; Acosta, A. 2011. Producción de etanol a partir de harina de
yuca en un sistema de hidrólisis enzimática y fermentación simultánea. Dyna, 78 (169),
158-166.
Rojas L. F., Mazo J. C., Sánchez C. P., Ríos R. y Figueroa C.2003. Efecto del Ca2+ sobre la actividad
catalítica de glucosa isomerasa inmovilizada durante la producción de jarabes fructosados
a partir de almidón de yuca. Alimentación, Equipos y Tecnología. 184: 49-54
Whitaker J.; Voragen A.; Wong, D. 2003. Handbook of Food Enzymology, Publisher: Marcel
Dekker