Tema 8 Envoltura Celular Bacteriana

Envoltura celular de bacterias y arqueas
y máquinas transenvoltura
PROF. BERNAL GERARDO GARRO MORA

ESCUELA DE BIOLOGÍA
UNIVERSIDAD DE COSTA RICA
Contenidos
Envoltura celular
Máquinas transenvoltura y flagelos
Biosíntesis de la pared celular
Capas S
Overview of bacterial ultrastructure. The main image shows successive cutaway views of the S layer, outer membrane,
peptidoglycan, inner membrane, protein-rich cytoplasm, and supercoiled DNA. Clockwise from top left, the zoom boxes depict a
Otras estructuras superficiales en arqueas lipid bilayer (constructed with the membrane plugin in VMD [Visual Molecular Dynamics]); a possible organization of the
peptidoglycan; a chemoreceptor cluster imaged by electron cryotomography (reproduced from Zhang, P., et al. 2007. PNAS
104:3777–3781); a cartoon representation of the flagellar motor (modeled after an image provided by Keichi Namba); a
proposed organization of supercoiled domains on the bacterial chromosome (modeled after Trun, N.R., and Marko, J.F. 1998.
ASM News 64:276–285); the structure of an MreB protofilament (constructed in VMD, with atomic coordinates provided by Jan
Antibióticos y mecanismos de resistencia Löwe).
From Morris, D.M., and Jensen, G.J. 2008. Annual Review of Biochemistry 77: 583–613. © 2008 Annual Reviews.
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BIOL. UCR
Envoltura celular bacteriana
Estructura compleja multicapa que envuelve y protege
a la bacteria.
Según la estructura básica de la envoltura, las bacterias

son Gram positivas o Gram negativas.
Tinción de Gram: desarrollada por Christian Gram en

1884.
Las células bacterianas se enfrentan a medios diluidos y

en ocasiones hostiles, lo que se refleja en la
complejidad de sus estructuras superficiales.
Los componentes de las envolturas tienen

localizaciones no azarosas.
Hans Christian Joachim Gram, 1852-1938
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Dentro de los modelos bacterianos mejor estudiados están E. coli como Gram negativa y S. aureus y B. subtillis como
Gram positivas.
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Cápsula
Capa S
Membrana
externa
Peptidoglicano
y periplasma
Membrana
interna
No todas las bacterias tienen todos los componentes citados en sus envolturas. Asociadas a
las envolturas están las máquinas transenvoltura como las bombas de eflujo, sistemas de
secreción y el cuerpo basal flagelar
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Máquinas transenvoltura: bombas de eflujo
Estructura trans-envoltura.
Expulsan substancias tóxicas para la

bacteria hacia el exterior (ejemplo
antibiótico).
Constituidos por las proteínas TolC,

AcrA y AcrB.

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Flagelos y ensamblaje
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Máquinas transenvoltura:
flagelos
Según la distribución y número de flagelos las bacterias son:
1. monotricas: un flagelo en un extremo o polo celular (Vibrio cholerae,

Pseudomonas aeruginosa, Idiomarina loihiensis, Caulobacter crescentus foto b)
2. lofotricas: varios flagelos en un extremo de la bacteria que forman un penacho al

nadar ( Vibrio fischeri (c), Spirillum spp.)
3. peritricas: diversos flagelos distribuidos por toda la superficie (Escherichia coli ,

Salmonella enterica serovar Typhimurium foto d).
4. endoflagelares: o de filamentos axiales; flagelos especializados se ubican en el

espacio periplásmico en torno a la célula y causan el movimiento a semejanza de
un sacacorchos (en espiroquetas como Borrelia foto e, Treponema, Leptospira).
E. anfitricas: un flagelo en sendos polos.

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Máquinas transenvoltura: flagelos
Estructura básica del flagelo bacteriano. El filamento puede alcanzar 15 micras de longitud.

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Múltiples estructuras y tipos de
proteínas hacen al flagelo
bacteriano una máquina muy
compleja. Se compone de los
módulos básicos: filamento,
codo, pistón, cuerpo basal. El
cuerpo basal posee un estator
(que lo fija a la envoltura) y un
rotor o motor que permite el
movimiento.

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Flagelos bacterianos

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Salmonella enterica serovar typhimurium: componentes flagelares bacterianos.
1. Componentes citoplásmicos solubles:

Complejo ATPasa FliH–FliI–FliJ: ayuda en la entrega de componentes secretados y en el
ordenamiento del proceso de secreción de los mismos.
2. Filamento: compuesto de las flagelinas FliC o la FljB (se transcriben de manera

alternativa).
3. Cápside del filamento: compuesto de FliD
4. Cápside del pistón: compuesto de FlgI.
Ambas proteínas se asocian durante la polimerización del filamento y del pistón.
5. FliK: es secretada durante la polimerización del pistón-gancho y regula la longitud del

filamento en crecimiento.

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Cuerpo basal:
Comienza con la formación de una estructura anular integral en la membrana (anillo MS).
El anillo MS se ancla al rotor, que es un complejo de anillo que mira hacia el citosol.
Se piensa que el sistema de secreción tipo III (T3SS) ensambla el centro del anillo MS. Luego se
ensambla el pistón en el periplasma.
Los anillos P y L no son secretados por el T3S sino por el sistema Sec.
Anillo MS: 26 copias de FliF.
Pistón proximal: 6 subunidades de FlgB, FlgC y FlgF.
Pistón distal: 26 FlgG

FliE: proteína asociada al pistón necesaria para la secreción de subunidades flagelares.
Cepas carentes de FlgE no pueden hacer swarming.
FliL: necesaria para mantener la integridad de la unión proximal-distal del pistón, sin ella el flagelo
se quiebra en dicha unión.

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Generadores de fuerza motora y rotación flagelar:
Un motor iónico es el causante de la rotación. Compuesto por los complejos proteicos del rotor y el estator.
Proteínas integrales de membrana: MotA y MotB (forman el canal iónico o estator que participa en la
rotación pero no en el ensamblaje del flagelo).
La rotación a favor y en contra de las manecillas del reloj se alterna por la interacción entre P-CheY
(componente del sistema de quimiotaxis) y las tres proteínas del rotor: FliG, FliN y FliM.
FliG. La principal responsable de la rotación del motor.
FliG interactúa con MotA y la proteína FliF del anillo MS.
FliM: actúa en el cambio de sentido de la rotación uniéndose a CheY fosforilada.
FliN: también participa en la rotación y cambio de dirección y probablemente en la secreción, al interactuar

con FliH.

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Filamento flagelar
Dimensiones: 20 nm de ancho; 10-15 µm de longitud.
Es un tubo hueco que puede contener aproximadamente 20,000 subunidades de
flagelina (FliC or FljB en Salmonella).
Impulsado por el motor. Si el motor rota en contra de las manecillas del reloj: los
filamentos flagelares levógiros forman un penacho que impulsa a la bacteria.
Rotación a favor de las manecillas del reloj: se deshace el penacho y la bacteria
bambolea y cambia de dirección de desplazamiento.
Gancho
Estructura muy flexible.
Permite que los flagelos peritricos formen el penacho para permitir el avance de
la bacteria.
Se compone de 120 copias de FlgE, estructura similar al filamento.
FlhB y FliK (del aparato de secreción) regulan la longitud del gancho.

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Proteínas de la cápside terminal.
La proteína terminal FliD es central en la

polimerización del filamento.
Selecciona el paso y polimerización de las proteinas

del filamento.
5 FliD se ensamblan en una estructura anular

pentamérica aplanada en su dominio apical y al cual
se unen dominios flexibles en forma de patas.
Al inicio del ensamblaje, se forma una estructura

terminal de FlgD, en el extremo del gancho.

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La cápside y sus proteínas terminales permiten el paso y polimerización de la flagelina del filamento
Formación de un penacho de flagelos, que impulsa a bacteria hacia adelante

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ESC. BIOL. UCR Molécula de flagelina mostrando sus cuatro dominios
Máquinas transenvoltura:
Proteínas de unión al gancho.
flagelos
Son adaptadores entre el gancho y el filamento.
FlgD forma la cápside del gancho pero es eliminada cuando éste

alcanza su longitud final.
FlgD es substituida entonces por tres regiones de proteínas:
1. FlgK (proteína de unión gancho-filamento)

2. FlgL (proteína de unión gancho-filamento)
3. FliD (proteína de la cápside del filamento)
Al irse polimerizando las subunidades de flagelina, FliD es movida

hacia afuera empujada por el filamento creciente y cubre su
ápice, en tanto que las dos proteínas de unión con el gancho
permanecen en su sitio.

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El operón flhDC (promotores flagelares de clase I y II)
El operón flhDC es llamado operón máster flagellar: es regulado por variedad de

factores, que encienden o apagan la expresión de los genes del flagelo.
La inducción del operón (activación de la clase I) produce FlhD y FlhC.
Estas proteínas forman un complejo heteromultímero FlhD4C2.
Este complejo induce la transcripción de los promotores flagelares de clase II,

transcripción que depende de la subunidad sigma 70.
Esto conlleva a la autorepresión de los promotores flhDC, con lo que la clase I se

apaga y la clase II se enciende.
Los promotores de clase II controlan la expresión de los genes del ensamblaje del
complejo cuerpo basal-gancho (HBB).

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Una vez sintetizado el complejo HBB la bacteria secreta
productos de secreción tardía y, al mismo tiempo, se
producen las proteínas chaperonas de las mismas.
FliT: factor del complejo FlhD4C2. Previene la autorepresión

del complejo FlhD4C2 y la activación de los promotores de
clase II.
Factor de transcripción (TF) sigma28: controla la

transcripción de promotores de clase III.
Promotores de clase III: genes estructurales del filamento y

genes de la vía de quimiotaxis (que funciona con el patrón
clase I encendida- clase II apagada- clase III encendida).
La reactivación de los promotores de la clase I reinicia al

regulón flagelar, con lo que comienza de nuevo el programa
de ensamblaje de nuevos flagelos.

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Maquinas de secreción en
bacterias Gram negativas

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Máquinas transenvoltura: principales sistemas de secreción en bacterias Gram
negativas

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MORA-ESC. BIOL. UCR
negativas
Sistemas de secreción de tipo I (TISS)
Un ejemplo clásico del T1SS es el sistema de secreción de la hemolisina de Escherichia coli.

Sistemas simples de tres componentes para el paso de proteínas de varios calibres a través de
la envoltura.
Componentes:
1. Cassette de unión de ATP (transportador ABC) o bien un antipuerto para protones;

2. Proteína adaptadora que comunica a los componentes que se ubican en la membrana
externa con los de la interna;
3. Una proteína que forma un poro en la membrana externa.
Estos sistemas secretan proteínas en un solo paso y sin intermediarios periplásmicos. Son
independientes de Sec.
Los T1SSs secretan entre otros: citotoxinas de la familia RTX (repeats-in-toxin), proteasas,
lipasas, proteínas de las surface layers (capas S), bacteriocinas, etc.

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MORA-ESC. BIOL. UCR
negativas
Sistemas de secreción tipo II (T2SS)
Son máquinas multiméricas que realizan un sistema de translocación

de dos pasos.
Dependientes de Sec.
Ejemplificado por la vía general de secreción (Gsp).
Primer paso: la proteína precursora a ser secretada es translocada por

el translocón Sec o por la vía Tat a través de la membrana interna.
Segundo paso: del periplasma el T2SS toma a la proteína y la
transloca a través de la membrana externa.
El translocón del T2SS tiene 12–16 proteínas ubicadas en citosol,
periplasma y las dos membranas.
El sistema de tipo II se relaciona evolutivamente con la maquinaria de

ensamblaje del pilus tipo IV.

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negativas
Sistemas de secreción tipo III (T3SS)
Estos sistemas de tipo III se denominan inyectisomas.

Utilizan un solo paso en la secreción.
Ejemplo: el inyectisoma de Salmonella enterica subsp. enterica serovar
typhimurium (usa proteínas de invasión –Inv- y proteínas Prg).
Usados por muchas bacterias patógenas de plantas y animales (ejemplo los

géneros Salmonella, Shigella, Yersinia, así como las cepas enteropatógenas
y enterohemorragicas de Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa).
Las proteínas efectoras secretadas por los T3SS pasan por un sistema
independiente de Sec a las células del hospedero eucarionte.
Los sistemas T3SSs se componen de al menos 20 proteínas, atraviesan toda
la envoltura y están relacionados genética, estructural y funcionalmente con
los flagelos bacterianos.

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BIOL. UCR
negativas
Sistemas de secreción tipo IV
Ejemplificados por el sistema VirB/D de Agrobacterium tumefaciens.
En bacterias Gram positivas y Gram negativas.
Muy versátiles: secretan gran variedad de moléculas.
Entre sus substratos de secreción están:

Proteínas individuales
Complejos proteína-proteína
Complejos proteína-DNA
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negativas
Sistemas de secreción tipo V
Los T5SS incluyen autotransportadores y sistemas de secreción de dos componentes.

Translocación ocurre en dos pasos. El primer dominio transloca al Segundo (pasajero)
Ejemplo: los autotransportadores como NalP de Neisseria meningitidis son proteínas multidominio
translocadas a través de la membrana interna de forma dependiente de Sec. Cuando el dominio
translocador de la proteína a secretarse pasa la membrana interna, facilita la translocación del
dominio pasajero en la membrana externa.
En los sistemas de translocación de dos componentes un translocador independiente (como TpsB)

ejecuta la secreción de la proteína efectora (como TpsA).
Muchas proteínas conocidas (varios cientos) usan este sistema de dos componentes: proteínas de
citotoxicidad, de agregación, resistencia sérica, adhesión, enzimas proteolíticas, etc.
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MORA-ESC. BIOL. UCR
negativas
Sistemas de secreción tipo VI
Los T6SS son de descubrimiento reciente.
Localizados en algunas bacterias patógenas como P. aeruginosa,

S. typhimurium, Vibrio cholerae, Yersinia pestis y E. coli
enteroagregante.
Son sistemas complejos compuestos de 12-25 subunidades.
Su estructura y función no se conoce con detalle.

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BIOL. UCR
negativas

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MORA-ESC. BIOL. UCR
Pared celular bacteriana:
biosíntesis

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MORA-ESC. BIOL. UCR
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ESC. BIOL. UCR
Incorporación de pared nueva en bacterias con diversas morfologías
Bacilos:
A. El peptidoglicano nuevo se
incorpora de manera helicoidal y
alarga la pared lateral.
B. Otra manera: la mureína va

formando un anillo de oclusión
en el sitio del futuro septo
divisorio.

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Bacterias ovoides:
Bacterias elongadas como S. pneumonia

agregan la nueva pared en estructuras
anulares ecuatoriales.
Se forma un sobre crecimiento de la

pared que va rodeando toda la bacteria.
Después se produce un segundo anillo y

la separación de ambos marca el sitio
del septum divisorio.

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Bacterias redondas:
En los cocos parece no haber un proceso de

elongación (indicado por el color rojo) de la
pared.
El peptidoglicano nuevo se agrega en el sitio

del septum ecuatorial.

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MORA-ESC. BIOL. UCR
Incorporación de pared nueva en En las bacterias Gram positivas la pared celular
nueva se forma en un solo punto en torno al
bacterias con diversas morfologías anillo de FtsZ.
Sin importar el patrón de agregación del material de

pared nuevo, el peptidoglicano pre-existente debe ser
cortado para permitir integrar las cadenas nuevas.
Bandas de
crecimiento de
la pared
Autolisinas. Enzimas similares en función a las
lisozimas, que abren espacios en la pared en la zona
del anillo FtsZ.
Rompen los enlaces β-1,4 entre la N-

acetilglucosamina y el ácido N-acetilmurámico,
abriendo el espacio por donde se inserta el material
nuevo recién sintetizado.

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MORA-ESC. BIOL. UCR
Actividad
autolisina
Bandas de pared: son los rebordes que se

forman en el sitio donde el peptidoglicano
viejo y el nuevo son unidos.
Actividad glicolasa
cierra los enlaces
La acción autolisina rompe los enlaces y la

actividad glicolasa los resintetiza.

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Peptidoglicano y pared bacteriana

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Componentes en la biosíntesis
del peptidoglicano
La subunidad estructural de la mureína es un disacárido
pentapéptido.
Este disacárido contiene los aminoazúcares N-
acetilglucosamina y N-acetilmuramato.
Ambos están unidos por un enlace β-1,4 glicosídico.
Un pentapéptido se une al grupo lactil del muramato.
La composición de aminoácidos varía con la especie de
bacteria.
Hay un aminoácido dibásico que facilita la formación del
enlace peptídico: en E. coli y B. subtilis es ácido
mesodiaminopimelico y en S. aureus es L-lisina.
Precisamente en esa Lys está ubicada la cadena de
pentaglicina característica de las bacterias Gram positivas.
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MORA-ESC. BIOL. UCR
Componentes en la biosíntesis del
peptidoglicano
El bactoprenol actúa como molécula lipídica
transportadora de los precursores de la pared.
Es un alcohol hidrófobo de 55 carbonos.
La unión del bactoprenol al precursor (N-

acetilmuramato-N-acetilglucosamina-pentapéptido)
lo hace muy hidrófobo, de manera que ahora los
precursores pueden atravesar la membrana
citoplásmica.
Bactoprenol (undecaprenol difosfato)
En el periplasma el bactoprenol se une con las
glicosilasas que insertan los precursores en el
peptiglicano.

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ESC. BIOL. UCR
peptidoglicano
Transglicosilación y transpeptidación
Son las dos reacciones que permiten la

polimerización del peptidoglicano.
Transglicosilación: el extremo reductor del

ácido N-acetilmurámico (M) de la cadena
naciente unida a lípido se transfiere al C4 de la
N-acetilglucosamina (G) del precursor de
peptiglicano unido a lípido (PG).
Se elimina entonces el undecaprenilpirofosfato

(ppB).

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MORA-ESC. BIOL. UCR
peptidoglicano
Transpeptidación:
Las enzimas PBPs (penicillin binding proteins) efectúan la

reacción de entrecruzamiento.
Inicia cortando el enlace D-Ala-D-Ala del precursor donador,

lo que forma un intermediario substrato de la enzima.
Se elimina la D-Ala terminal.
El intermediario peptidilo se transfiere al aceptor (por

ejemplo la última Gly del puente pentaGly en este ejemplo
de S. aureus).
Luego la PBP se libera.

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MORA-ESC. BIOL. UCR
Biosíntesis y ensamblaje
de la pared bacteriana
La síntesis de precursores ocurre en el citosol y produce UDP-
MurNAc–L-Ala–D-iGlu–L-Lys–D-Ala–D-Ala (nucleótido de
Park):
Los aminoácidos se van agregando de manera secuencial (L-
Ala, D-Glu, L-Lys o ácido mesodiaminopimélico), y finalmente
las D-Ala terminales se añaden como dipéptido.
La energía para la formación de los enlaces peptídicos
proviene del ATP (pero no se usan ribosomas ni tRNAs en este
paso).
El NAM-pentapéptido pasa del UDP al bactoprenol en la
membrana citoplásmica, formándose el lípido I.
En este punto se inserta N-acetilglucosamina (GlcNAc)
proveniente de UDP-GlcNAc, formándose el lípido II.
Puente pentalicina: si la bacteria requiere de este Puente
(Gram positivas), se agregan las Gly al lípido II, provenientes de
glicil-tRNAs (sin uso de ribosomas).
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ESC. BIOL. UCR
Biosíntesis y ensamblaje de la pared
bacteriana
El precursor (unido al lípido) es translocado a la cara externa de la membrana
citoplasmática.
Posteriormente, el precursor sufre las reacciones de transglicosilación y

transpeptidacion, que lo incorporan en la pared en crecimiento.
En la transpeptidación la ruptura de los enlaces D-Ala-D-Ala generan la energía

necesaria para la transpeptidación, en ausencia de ATP.
El nuevo enlace peptídico se forma entre la penúltima D-Ala del donador y el

grupo amino del aminoácido dibásico o la última Gly del puente (si éste existe
en la bacteria en cuestión).
En el proceso de incorporación se remueve el acarreador lipídico

(undecaprenol pp-C55-PP).
Al volver a la membrana el undecaprenol pierde un P quedando como

bactoprenol-P, que puede aceptar un nuevo NAM-pentapéptido y seguir con
el ciclo.

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MORA-ESC. BIOL. UCR
bacteriana

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bacteriana
Tanto las PBPs como las hidrolasas son necesarias para ir
incorporando el nuevo peptidoglicano en el sáculo de la pared
bacteriana.
Hidrolasas de la pared bacteriana implicadas: amidasas,

endopeptidasas, muramidasas, glucosaminidasas,
carboxipeptidasas.
Funciones: se consideran fundamentales en el crecimiento de la

pared y en procesos como la esporulación, reciclaje del
peptidoglicano, separación de las bacterias hijas después de la fisión
binaria.
Se han propuesto varios modelos por los cuales la bacteria controle

la actividad de estas múltiples enzimas para impedir la autolisis.
04/07/2017 48
bacteriana
Para bacterias Gram positivas:
Teoría del estrés de superficie (crecimiento de dentro hacia

afuera):
En este modelo el peptidoglicano nuevo se agrega cerca de la

cara interna de la pared, donde están ubicadas las PBPs.
Conforme se va agregando nuevo material la pared es

empujada hacia afuera y va siendo estirada.
Debido al estiramiento habrá más autólisis en las capas

externas de la pared, pero el sáculo de la bacteria no se
debilita debido a que constantemente se van agregando capas
nuevas en la cara interna cerca de la membrana celular.

04/07/2017 49
MORA-ESC. BIOL. UCR
bacteriana
Para bacterias Gram-negativas:
Modelo de 3 a 1:
Por cada 3 cadenas de peptidoglicano que se agregan a la pared 1 cadena

antigua debe ser removida.
Este proceso obedece a la estrategia de ‘unir antes de romper’, de forma

que no se autolise la pared bacteriana.
Este modelo concuerda con las altas velocidades de recambio del

peptidoglicano que se observan en E. coli durante su crecimiento y división.
Como este proceso requiere la coordinación de la actividad de muy

diversas enzimas en el tiempo y en el espacio, se ha propuesto la existencia
de complejos multienzimáticos en Escherichia coli.

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Biosíntesis y ensamblaje
de la pared bacteriana
Inserción del peptidoglicano en bacterias Gram
negativas como E. coli
A. Mecanismo 3 a 1: tres cadenas nuevas en estado relajado y

entrecruzadas (círculos blancos), se ligan a los grupos amino libres
de los péptidos donadores ubicados a ambos lados de la cadena
de anclaje (círculo rayado), que es sustituida por las cadenas
nuevas.
B. Un complejo enzimático iría sintetizando las cadenas

entrecruzadas y uniéndolas a la cadena de anclaje y removiéndola
una vez colocadas las cadenas nuevas en la pared.
C. Las peptidoglican-sintasas van frente a las hidrolasas.
D. Componentes del complejo multienzimático: EP: endopeptidasa;

LT: transglicosilasa lítica; TP: transpeptidasa; TP/TG:
transpeptidasa-transglicosilasa bifuncional; TG: transglicosilasa.

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ESC. BIOL. UCR
bacteriana
La hipótesis de los complejos es apoyada por
evidencias como:
Descubrimiento de interacciones proteína-

proteína entre PBPs bifuncionales
(transglicosidasas-transpeptidasas),
transpeptidasas monofuncionales,
endopeptidasas, transglicosilasas líticas y
proteínas estructurales.
Descubrimiento de complejos de PBPs en

Haemophilus influenzae, que se unen por
puentes iónicos.
Interacciones entre PBPs en especies como E.

coli, C. crescentus y B. subtilis.
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Capas S (Surface-layers)

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Capas S (Surface layers)
Son capas cristalinas de proteínas superficiales
de la envoltura celular.
Se encuentran en muchas bacterias pero son más

abundantes y características de las arqueas.
Las proteínas de capa S tienen la capacidad de

autoensamblarse en arreglos monocapa de dos
dimensiones, en suspensión y sobre membranas
lipídicas.
Se ensamblan con la misma estructura que tenían

in vivo.
Thermoanaerobacter thermohydrosulfuricus y
su armadura de proteínas de capa S de simetría
hexagonal (p6) 'F’ flagelos. barra = 100 nm

04/07/2017 54
Criba o
cedazo
molecular
Protección Factores de
celular virulencia
Funciones
de las
capas S
Adaptación Moléculas
a medios de
extremos adhesión
Captura de
iones

04/07/2017 55
Normalmente se componen de un solo tipo de proteína o
glicoproteína.
Fueron las primeras proteínas procariontes glicosiladas

descubiertas.
Mayormente proteínas acídicas leves (pH 4-6) con muchos

aminoácidos hidrófobos.
Las proteínas van de 40 a unos 200 kD, cada especie tiene

proteínas específicas.
Bacterias: la capa S tiene hasta unos 20 nm de grosor.
Arqueas: la capa S tiene hasta unos 70 nm de grosor.
BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL Capa S de Bacillus sphaericus
04/07/2017 56
Porosidad de la capa S: alta (30-
70%).
Poros uniformes.
Simetría: hexagonal, cuadrada,

oblicua.
Hasta un 20% del contenido

proteico de la célula corresponde a
la capa S si está presente.
04/07/2017 57
En algunas bacterias se ha descrito la
presencia de dos capas S
superpuestas, cada una conformada
por un tipo de proteína.
Algunas veces puede haber poros de

dos diámetros distintos.
Las proteínas se orientan centro a

centro, normalmente la superficie lisa
da hacia afuera de la célula y la cara
interna de la proteína es más
texturizada.

04/07/2017 58
Capas S (Surface layers): bacterias
En las bacterias Gram positivas que poseen capas S, las proteínas se asocian a la pared de peptidoglicano. En las Gram
negativas se asocian a los lipopolisacáridos. Se muestran los sistemas de secreción de las proteínas S.

04/07/2017 59
Capas S (Surface layers): arqueobacterias
En las arqueas la capa S puede
ser el único elemento presente
como pared, o puede estar
asociada a la pseudomureína.
El látex o cedazo de la capa S se
organiza en unidades
repeptitivas (bordes en rojo,
poros en blanco y proteínas en
gris).
N: N-glicosilación
O: O-lglicosilación

04/07/2017 60
Hay gran diversidad de tipos de envoltura celular entre las arqueas. Los taxones que se muestran en el dominio fueron determinados por secuenciación del rRNA 16S.
04/07/2017 61
Methanocaldococcus villosus (a), una Euryarqueota. Metallosphaera prunae (b), una Crenoarqueota. C y d,
Ignococcus hospitalis en criofractura y TEM.

04/07/2017 62
Vista lateral esquemática de envolturas celulares de algunas arqueas.

04/07/2017 63

04/07/2017 64
En arqueas sin pseudomureína:
las capas S actúan dando forma
a la arquea y participan en la
fisión.

04/07/2017 65
Aplicaciones biotecnológicas

04/07/2017 66
Ejemplo de aplicación biotecnológica:
liposomas S ingenierizados
1. con proteínas funcionales en el lumen
2. con proteínas integrales
3. como vehículo de inmovilización directa de

anticuerpos
4. con inmovilización mediante proteínas Fc
5. con inmovilización mediante la técnica de

la estreptavidina-biotina
6. con proteínas S genéticamente modificadas

con dominios funcionales incorporados
04/07/2017 67
Otras estructuras de la superfice
celular de las arqueobacterias

04/07/2017 68
Flagelos de arqueas (arquelos)
Pese a cumplir idéntica función ,
la estructura molecular difiere
de la de los flagelos del
Dominium Bacteria.
No obstante, presentan
semejanzas con los pili tipo IV
bacterianos.

04/07/2017 69
Ensamblaje del flagelo crenarqueota
Las proteínas principales de la base
flagelar en las membranas son FlaJ y FlaI.
FlaK/PibD procesan las flagelinas, que son

luego ensambladas en el filamento.
Las proteínas accesorias de las

crenarqueotas son proteínas asociadas a
membrana.
No obstante, FlaH es citosólica y parece

modular la actividad de FlaI.

04/07/2017 70
Ensamblaje del flagelo euriarqueota
Las proteínas principales de la base flagelar
en las membranas son FlaJ y FlaI.
FlaK/PibD procesan las flagelinas, que son

luego ensambladas en el filamento.
En las euriarqueotas, FlaCDE es un sistema

que participa en la transducción de señales
(intracelulares y extracelulares), que regulan
la función flagelar.
Varios genes fla del operón euriarqueota

están ausentes del operón en crenarqueotas.

04/07/2017 71
Ensamblaje del flagelo euriarqueota
Los monómeros de FlaI se
organizan en anillos de 6
unidades.
La hidrólisis de ATP provoca

cambios conformacionales en la
proteína que permiten el
ensamblaje y movimiento del
arquelo.

04/07/2017 72
Coco euriarqueota con más de 100 flagelos
(tipo pili).

04/07/2017 73
Hamus (hami)
Los hami son apéndices arqueanos complejos con
microgarfios de sujeción.
Pueden ser cientos por arquea.
Los nanogarfios se ubican en la región distal del

filamento.
Estos nanogarfios (unos 60 nm de diámetro, más

de 1 µm de longitud en promedio) se sujetan a
otros garfios de hami de arqueas vecinas, así como
a las envolturas celulares de otras arqueas.
Por tanto, los hami son importantes en la

formación de biofilmes arqueanos.

04/07/2017 74
Hamus (hamii) Euriarqueota cubierta de hami (recuadros).
Euriarquea cubierta de hamii, teñidos con anticuerpos inmunogold.

04/07/2017 75
Hamus (hami)

04/07/2017 76
En este biofilm de cocos euriarqueotas se nota la
gran cantidad de hami. Las arqueas está recubriendo
a un filamento de células bacterianas.

04/07/2017 77
Hamus (hami)
Los hami protruden en gran número a través de la envoltura

arqueana. El filamento tiene dos regiones: ´prickle´y gancho.
Coco euriarqueota en medio de un biofilm. Se notan claramente la

matriz de la biopelícula, los hami, la membrana celular, el espacio
periplásmico y la membrana externa.
04/07/2017 78
Envoltura celular arqueana
Existen proteasas que participan en la biogenesis de la
envoltura y los appendices de las arqueas (acá como ejemplo
la haloarquea Haloferax volcanii).
LonB participa en la síntesis de bacterioruberina y en control
de la calidad proteica.
Las peptidasas de señal Sec11a/b procesan el péptido señal
de las proteína de membrana y de secreción, las cuales salen
de la célula por la vía Sec.
PibD hace proteólisis sobre las prepilinas y las preflagelinas,
que luego construyen al pili y al arquelo.
La proteasa RhoII participa en la N-glicosilación de las

proteínas de la capa S con un oligosacárido que contiene
sulfoquinovosa.
La arqueosortasa ArtA participa en la modificación de las
glicoproteínas de la capa S, lo cual favoresce su inserción en
dicha capa.

04/07/2017 79
Antibióticos: mecanismos de
acción y resistencia

04/07/2017 80
Procesos celulares bacterianos que son blanco de
acción antibiótica

04/07/2017 81
MORA-ESC. BIOL. UCR
Procesos celulares bacterianos que son blanco
de acción antibiótica
Biosíntesis de la pared bacteriana:
Fosfomicina: inhibe la síntesis del lípido I
Tunicamicina: inhibe la formación del lípido II
Mersacidina. Interrumpe la translocación
Moenomicina, clorobifenilvancomicna: interrumpen la

transglicosilación
Bacitracina: inhibe la pirofosfatasa necesaria para reciclar el

bactroprenol
Vancomicina, penicilinas y cefalosporinas: impiden la

transpeptidación

04/07/2017 82
Proteosíntesis:
Bloqueo de subunidad mayor:

macrólidos, lincosamidas,
estreptograminas, oxazolidonas.
Unión a la subunidad menor:

aminoglicósidos, tetraciclinas.

04/07/2017 83
MORA-ESC. BIOL. UCR
de acción antibiótica Replicación del DNA y
transcripción del RNA:
Rifampina: se une a la
RNA polimerasa y
bloquea su unión a la
plantilla de DNA.
Ciprofloxacina y
novobiocina: se unen a
la DNA girasa,
interrumpiendo los
procesos de
superenrrollamiento.

04/07/2017 84
MORA-ESC. BIOL. UCR
Metabolismo del ácido fólico:
Sulfametoxazola y trimetoprima: inhiben enzimas de la biosíntesis del folato.
El folato es base para la biosíntesis de timina y por ende de la replicación del

DNA.

04/07/2017 85
POSIBLES PROCESOS PARA BLANCO DE
ANTIBIÓTICOS
Decoración de la superficie celular:

inhibición de las sortasas de las bacterias
Gram positivas(enzimas que cortan las
proteínas que pasarán a la superficie
celular).
Vía de síntesis de isoprenoides

bacterianos: la vía de biosíntesis no
clásica presente en bacterias no existe en
eucariontes y por ende las enzimas
implicadas pueden ser blanco de
antibióticos nuevos.

04/07/2017 86
ESC. BIOL. UCR
04/07/2017 87
MORA-ESC. BIOL. UCR
04/07/2017 88
MORA-ESC. BIOL. UCR
Penicilinas, vancomicina y moenomicina interfieren con la
transglicosilación y la transpeptidación
04/07/2017 89
MORA-ESC. BIOL. UCR
04/07/2017 90
ESC. BIOL. UCR
04/07/2017 91
ESC. BIOL. UCR
04/07/2017 92
ESC. BIOL. UCR
Los antibióticos quinolónicos se unen a la topoisomerasa II y IV, con
lo que interfieren el superenrrollamiento.
Ello produce ruptura del DNA bicatenario y muerte celular de forma

dependiente o independiente de la proteosíntesis.
Los antibióticos β-lactámicos inhiben la transpeptidación al bloquear

a las PBPs.
Ello provoca aumento de la autolisis y disminución de la síntesis de

peptidoglicano, con lo que la bacteria muere.
Los antibióticos aminiglicósidos se unen a la subunidad 30S del

ribosoma y provocan la incorporación errónea de aminoácidos en las
proteínas.
Las proteínas erróneas se doblan incorrectamente y en la superficie

celular provocan que la bacteria absorba fármacos fácilmente.

04/07/2017 93
La interacciones entre los antibióticos y sus
blancos moleculares estimulan también la
oxidación del NADH y la generación de especies
de superóxido (O2−).
El superóxido daña los grupos ferrosulfúricos y

libera hierro férrico que es oxidado por la vía de
Fenton.
La reacción de Fenton produce radicales hidroxilo

(•OH), que daña al DNA, lípidos y proteínas.
Las quinolonas, β-lactámicos y aminoglicósidos

también causan la formación de radicales y
muerte celular por medio de los sistemas de
respuesta envoltura (Cpx) y la vía de respuesta
redox de dos componentes (Arc).

04/07/2017 94
MORA-ESC. BIOL. UCR
de acción antibiótica Los antibiótico
aminoglicósidos
causan errores en la
traducción que
terminan generando
proteínas de superficie
mal plegadas.
Esto estimula las

respuestas Cpx y Arc.
Estas dos respuestas

alteran el metabolismo
y el potencial de
membrana de la
bacteria, con lo que se
forman radicales como
el hidroxilo que son
letales a la célula.

04/07/2017 95
Mecanismos de resistencia bacteriana
Regulación del tamaño de porinas que evitan
el ingreso del antibiótico.
Producción de bombas proteicas que sacan el

fármaco.
Enzimas que degradan el antibiótico en el

citosol.
Modificación de la molécula que es el blanco

de acción del antibiótico.
Muchos de los genes de resistencia residen en

plásmidos.

04/07/2017 96
MORA-ESC. BIOL. UCR
Mecanismos de resistencia en bacterias Gram negativas

04/07/2017 97
Antibióticos betalactámicos: acción sobre la
pared y resistencia

04/07/2017 98
MORA-ESC. BIOL. UCR

Tema 8 Envoltura Celular Bacteriana

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Envoltura celular de bacterias y arqueas

PROF. BERNAL GERARDO GARRO MORA

Máquinas transenvoltura y flagelos

Biosíntesis de la pared celular

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G. GARRO MORA-ESC.

Según la estructura básica de la envoltura, las bacterias

Tinción de Gram: desarrollada por Christian Gram en

Las células bacterianas se enfrentan a medios diluidos y

Los componentes de las envolturas tienen

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G. GARRO

Expulsan substancias tóxicas para la

Constituidos por las proteínas TolC,

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G. GARRO

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL

1. monotricas: un flagelo en un extremo o polo celular (Vibrio cholerae,

2. lofotricas: varios flagelos en un extremo de la bacteria que forman un penacho al

3. peritricas: diversos flagelos distribuidos por toda la superficie (Escherichia coli ,

4. endoflagelares: o de filamentos axiales; flagelos especializados se ubican en el

E. anfitricas: un flagelo en sendos polos.

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1. Componentes citoplásmicos solubles:

2. Filamento: compuesto de las flagelinas FliC o la FljB (se transcriben de manera

3. Cápside del filamento: compuesto de FliD

4. Cápside del pistón: compuesto de FlgI.

Ambas proteínas se asocian durante la polimerización del filamento y del pistón.

5. FliK: es secretada durante la polimerización del pistón-gancho y regula la longitud del

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Pistón distal: 26 FlgG

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G. GARRO MORA-

FliG. La principal responsable de la rotación del motor.

FliG interactúa con MotA y la proteína FliF del anillo MS.

FliM: actúa en el cambio de sentido de la rotación uniéndose a CheY fosforilada.

FliN: también participa en la rotación y cambio de dirección y probablemente en la secreción, al interactuar

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G. GARRO MORA-

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G. GARRO

La proteína terminal FliD es central en la

Selecciona el paso y polimerización de las proteinas

5 FliD se ensamblan en una estructura anular

Al inicio del ensamblaje, se forma una estructura

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G. GARRO

Formación de un penacho de flagelos, que impulsa a bacteria hacia adelante

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G. GARRO MORA-

FlgD forma la cápside del gancho pero es eliminada cuando éste

FlgD es substituida entonces por tres regiones de proteínas:

1. FlgK (proteína de unión gancho-filamento)

Al irse polimerizando las subunidades de flagelina, FliD es movida

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G.

El operón flhDC es llamado operón máster flagellar: es regulado por variedad de

La inducción del operón (activación de la clase I) produce FlhD y FlhC.

Estas proteínas forman un complejo heteromultímero FlhD4C2.

Este complejo induce la transcripción de los promotores flagelares de clase II,

Esto conlleva a la autorepresión de los promotores flhDC, con lo que la clase I se

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G. GARRO

FliT: factor del complejo FlhD4C2. Previene la autorepresión

Factor de transcripción (TF) sigma28: controla la

Promotores de clase III: genes estructurales del filamento y

La reactivación de los promotores de la clase I reinicia al

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL G. GARRO

BIOL. CELULAR Y MOLEC. DE BACTERIAS Y ARQUEAS- PROF. BERNAL