Etapes de la transgénèse

La mise en œuvre de la transgénèse

permet un transfert de gène (s) héritable
(s) entre espèces évolutivement plus ou
moins séparées.

Le (s) gène (s) à introduire (d’interêt) peut

(peuvent) provenir de n’importe quel
organisme vivant: plante, animal ou
bactérie (le code génétique est universel).
Après identification d'un gène d'intérêt,
celui-ci doit ensuite être isolé de
l'organisme donneur pour être intégré
dans une construction génétique,
multiplié et introduit dans l’organisme
receveur.
On distingue:
• Les techniques de biologie moléculaire
qui permettent de préparer les
séquences d'ADN qui seront introduites,
on parle alors de construction
génétique.
• Les techniques de transgénèse qui
permettent de transférer le gène.
La possibilité de régénérer une plante
entière à partir de quelques cellules
végétales est d’un grand intérêt lors de la
création d’un organisme génétiquement
modifié.
1- Réaliser une construction génétique:
Pour réaliser une construction génétique
on fait appelle à la technologie de
l’ADN recombinant:
Dans un fragment d’ADN qu’on appelle
vecteur on insert un autre fragment qui
contient le gène d’intérêt. Ce deuxième
fragment est appelé insert.
1- Réaliser une construction génétique:
1- Réaliser une construction génétique:

Vecteur:

Agent de transmission : par exemple,

molécule d'ADN capable d'autoréplication
(plasmide ou virus) dans laquelle on peut
introduire in vitro un ADN étranger.
1- Réaliser une construction génétique:
 2- Multiplier la construction
construction::
Rappel:
Le matériel génétique bactérien est constitué de :
Le chromosome (1) et les plasmides (2) qui sont
des petites molécules d’ADN cytoplasmiques et
extra-chromosomiques, capables de se répliquer
de manière autonome, par rapport au
chromosome bactérien.
 2- Multiplier la construction:

La construction est multipliée (clonée) afin

de disposer d'une quantité suffisante
d'ADN pour son introduction dans les
cellules végétales que l'on veut
transformer.
 2- Multiplier la construction:

Isoler un clone de cellules réceptrices de

l’ADN recombinant: Disposer d’une
méthode de sélection.
Exemple:
Résistance à l’ampicilline + criblage blanc-
bleu.
3- Introduction de la construction dans la
cellule végétale: Transfert

La transformation des plantes s’effectue

selon deux méthodes différentes:
 3- 1- Transfert par méthode naturelle:

La première méthode exploite la capacité

naturelle de certaines bactéries du genre
Agrobacterium à infecter une plante et de
lui transférer de l’ADN, on introduit alors le
gène d’intérêt dans la bactérie qui le
transmet ensuite à la plante par infection.
cette méthode est dite : « naturelle ».
 3- 2- Transfert direct:
La deuxième méthode utilise des procédés
de transfert direct:
• De façon chimique: en provoquant la
fusion entre deux protoplastes, l’un provient
d’une bactérie porteuse du gène d’intérêt
et l’autre d’une cellule végétale
réceptrice.
• De façon physique: en bombardant des
cellules végétales avec des particules
métalliques enrobées d’ADN (gène
d’interêt).