MARCO TEÓRICO

La cromatografía es un método físico o de separación para la caracterización de mezclas

complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia y la física. Es un conjunto
de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los
distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades
de dichos componentes. Las técnicas cromatografías son muy variadas, pero en todas ellas
hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido o fluido supercrítico) que arrastra
a la muestra a través de una fase estacionaria que se trata de un sólido o un líquido fijado
en un sólido. Los componentes de la mezcla interaccionan en distinta forma con la fase
estacionaria. De este modo, los componentes atraviesan la fase estacionaria a distintas
velocidades y se van separando. Después de que los componentes hayan pasado por la
fase estacionaria, separándose, pasan por un detector que genera una señal que puede
depender de la concentración y del tipo de compuesto.
La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas que no se excluyen mutuamente:
 Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser
usados posteriormente (etapa final de muchas síntesis).
 Medir la proporción de los componentes de la mezcla (finalidad analítica). En este
caso, las cantidades de material empleadas son pequeñas.

CLASIFICACIÓN DE LA CROMATOGRAFÍA
Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir según cómo esté dispuesta la fase
estacionaria:

Cromatografía plana.
La fase estacionaria se sitúa sobre una placa plana o sobre un papel. Las
principales técnicas son:

 Cromatografía en papel
 Cromatografía en capa fina

Cromatografía en columna.
La fase estacionaria se sitúa dentro de una columna. Según el fluido empleado como fase
móvil se distinguen:

 Cromatografía de líquidos
 Cromatografía de gases
 Cromatografía de fluidos supercríticos

La cromatografía de gases es útil para gases o para compuestos relativamente volátiles, lo

que incluye a numerosos compuestos orgánicos. En el caso de compuestos no volátiles se
recurre a procesos denominados de "derivatización", a fin de convertirlos en otros
compuestos que se volatilicen en las condiciones de análisis. Dentro de la cromatografía
líquida destaca la cromatografía líquida de alta resolución.

Un Solvente.- es la sustancia que forma parte en mayor cantidad de una solución. La

solución es compuesta por la combinación y tratamiento de un soluto (en menor cantidad,
por lo general solido o liquido pero con mayor concentración) y un solvente (liquido con
propiedades propicias para que ese soluto se disuelva correctamente). El soluto universal
es el agua, por su neutralidad en el proceso y su fácil adaptación a la transformación
de nuevas moléculas de otros elementos.

Benceno.- es un hidrocarburo aromático de fórmula molecular C₆H₆, también es conocido

como benzol.
Denominación de la IUPAC: Benzene
Masa molar: 78,11 g/mol
Frases R: R11, R36/38, R45, R46, R48/23/24/25
Límites de explosividad: 1.3% - 7.9%
NFPA 704: 3 3 2
S0líquido, 1 bar: 150 J·mol-1·K-1

El etanoato de etilo según la IUPAC, también llamado acetato de etilo, y de otras formas
es un éster de fórmula CH₃-COO-CH₂-CH₃. Su nombre antiguo es éter de vinagre. .
Fórmula: C4H8O2
Densidad: 902 kg/m³
Punto de ebullición: 77,1 °C
Masa molar: 88,11 g/mol
Fórmula semidesarrollada: CH3-COO-CH2-CH3
Otros nombres: Acetato de etilo; acetidina
 IMPORTANCIA DE LA CROMATOGRAFÍA
La cromatografía es empleada en la industria petroquímica principalmente en las plantas de gases,
donde se obtienen los productos acabados como son el propano y el butano. En cada uno de estos
gases, además de controlar los procesos de obtención en distintos puntos, es de interés conocer el
grado de pureza de los mismos una vez acabado dicho proceso, para lo cual por medio de la
cromatografía se realiza un análisis cualitativo y cuantitativo de los componentes anterior y posterior
de cada uno de ellos.

También se emplea para saber el porcentaje de reacción de ciertos procesos como son la
eliminación del SH2y SO2por obtención de azufre elemental en el que es muy importante saber la
relación entre ambos componentes a la salida de dicho proceso. En resumen la cromatografía se
emplea en cualquier punto de un proceso en el que se obtenga una mezcla gaseosa y cualquiera
de sus componentes nos sea significativo para controlar la buena marcha del mismo.

TIPOS DE CROMATOGRAFÍA
Cromatografía de columna.- Es la aplicación providente de la cromatografía. Se usa para
conseguir compuestos químicos completamente puros a partir de una mezcla de elementos en un
nivel de microgramos hasta kilogramos usando grandes columnas industriales. La columna básica
de cromatografía providente es un tubo de vidrio con un diámetro de 5 a 50 mm y posee una altura
de 50 cm a 1 m con una llave en la parte inferior.
Cromatografía de papel.- Es un método analítico utilizado para
identificar y separar las mezclas que son pintadas principalmente
con pigmentos fuertes. Este proceso también se puede utilizar en
las escuelas de secundarias o primarias en experimentos de
laboratorio con tinta. Esta técnica ha sido sustituida en gran parte
por cromatografía de capa fina, sin embargo este método sigue
siendo una eficaz herramienta de enseñanza.
La cromatografía en papel bidireccional, es conocida como cromatografía bidimensional, envuelve
la utilización de dos solventes y a la misma vez aplicando una rotación del papel a 90 ° entre ellos.
Esto es ventajoso para lograr separar las mezclas complejas de elementos similares, un ejemplo
particular es la separación de aminoácidos.
Cromatografía de capa fina.- (TLC) es un método de la cromatografía que es eficaz para separar
elementos orgánicos. Envuelve una fase estacionaria que radica en una capa muy delgada del
material absorbente, habitualmente es el óxido de aluminio, gel de sílice o la celulosa paralizada
sobre una lámina puntal inerte completamente plana. La fase líquida radica en obtener una solución
exacta para separar un solvente apropiado en atraída a través de una placa por acción fina, logrando
separar la solución experimental.

Cromatografía líquida de alta resolución.- Es de alta resolución (HPLC) es un tipo de

cromatografía en la columna utilizada diariamente en bioquímica y química analítica. También es
conocida a veces como cromatografía líquida de alta presión y se usa para separar los elementos
de una mezcla mediante la utilización de una diversidad de interacciones químicas entre la sustancia
que se está analizando y la columna de cromatografía.
En este tipo el análisis se fuerza a través de la columna en su fase estacionaria habitualmente el
tubo está lleno de pequeñas partículas circulares con una cierta química en la superficie bombeando
un líquido a alta presión a través de la columna.
OBJETIVOS

 Separar los componentes de una mezcla de compuestos polares por

cromatografía en papel.
 Identificar los componentes de una mezcla, teniendo muestras de comparación
adecuadas.
 Determinar el Rf de los compuestos para unas condiciones dadas.
 Utilizar posteriormente estas técnicas para aplicaciones como: determinar la
pureza de un compuesto, el avance de una reacción, la identidad o la diferencia
de compuestos y de fracciones cromatográficas.
 Explicar los conceptos teóricos fundamentales en los que se basan estas
técnicas. INFORMACIÓN GENERAL Conocer los parámetros de la cromatografía
y sus aplicaciones.

MATERIAL Y MÉTODOS

- Tubo de prueba - Papel filtro

- Beaker - Silicagel G. Actividad
- Capilares - Rejilla
- Mechero - Cámara de Revelado
- Trípode - Lápiz
- Acetato de etilo
- Benceno
- Porta objeto
PROCEDIMIENTO

1. Sobre el cromatofolio, con un lápiz carbón, trazamos una línea y un punto (en el
centro) a 1 cm de la parte inferior, y a 0.5 cm de la parte superior.

0.5 cm

1 cm

2. En un tubo de ensayo, tener preparado Ácido acetil salicílico, y la muestra de

identificación.
3. Encendemos el mechero (en llama azul), Tomamos un capilar por ambos lados con
las dos manos, y lo colocamos sobre la llama, girando y jalando hacia cada extremo,
de tal forma que en cada extremo medio quede en punta para tomar nuestra muestra.
Ojo: Apagarlo una vez terminado este paso.

4. Con una mitad del capilar, con la punta tomamos una muestra del tubo de ensayo y
lo colocamos sobre el cromatofolio (en el punto que hicimos en la parte inferior) –
Este paso se puede repetir de 3 a 5 veces dejando que seque en cada punto que
apliquemos uno sobre otro.
5. Una vez seco lo colocamos en la cámara de saturación que contiene 1 mL de acetato
de etilo y 1 mL de benzeno (solventes eluyentes). Tapamos, y observamos que se
eleva hacia la parte superior el solvente. Ojo: Hay que retirarlo antes que llegue a la
línea trazada de 0.5 cm y lo dejamos en reposo para que se seque.

6. Volvemos a encender el mechero y calentamos un frasco con residuos de yodo (esto

permitirá desprender vapores de yodo, mismo que nos permitirá realizar nuestro
revelado). Y una vez este caliente, colocamos en su interior el cromatofolio, y
después de 10 o 15 segundos lo retiramos y determinamos el Rf de ambas
sustancias.

F. soluto F. solvente
RESULTADO

RELACIÓN DE FLUJO (Rf)

El símbolo Rf significa “Relación de flujo”, es una relación de distancias, y se expresa como el
cociente entre la distancia recorrida por la sustancia y la distancia recorrida por el disolvente hasta
el frente del eluyente:

CÁLCULO DE LA RELACIÓN DE FLUJO

Es la ecuación principal:

Valor obtenido de la muestra patrón de identificación (ac.

Acetilsalicílico + alcohol etílico)

Rf 0.90
CONCLUSIONES
La cromatografía es la separación de una mezcla de 2 o más componentes por distribución en 2
fases (móvil y estacionaria); también se utiliza como medio de identificación de sustancias. El tipo
de cromatografía dependerá de la naturaleza de la fase móvil y estacionaria. La polaridad de
eluyente determinara la efectividad de éste como disolvente en la cromatografía de capa fina.
Si las manchas de la placa aparecen cerca del punto de aplicación será debido a que son más
polares con respecto al eluyente, y si aparecen más cercanas a la frontera del eluyente quiere decir
que son menos polares con respecto al eluyente. Para las cromatografías realizadas se esperaría
un Rf menor que 1, siendo nuestro resultado de Rf= 0. 90, se puede decir que procedimiento es el
correcto.

CUESTIONARIO

1) ¿QUE ES UNA SERIE ELUOTROPICA?

_Una serie eluotrópica es un listado de varios compuestos ordenados según su poder de e
lución para un adsorbente dado.
_ los clasifica en un orden en base a su fuerza.
_Las series Eluotrópicas son clasificaciones semicuantitativas considerando el momento d
ipolar ó la constante dieléctrica.
_La utilización del eluyente puede ser de manera Isocrática (una sola polaridad) ó por Gra
diente (cambiando la polaridad en cierto momento del proceso).
_Se puede utilizar un solo eluyente ó una mezcla de dos ó más que nos den polaridades ó
fuerzas intermedias. Por otro lado, hay que considerar el tamaño de la muestra ya que el p
oder de adsorción disminuye con el tamaño de la muestra.

2) MENCIONE LAS APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFIA POR HPLC Y LA

COMATROGRAFIA DE GASES
1_CROMATOGRAFIA POR HPCL:
La separación cromatográfica en HPLC es el resultado de las interacciones específicas en
tre las moléculas de la muestra en ambas fases, móvil y estacionaria
A diferencia de la cromatografía de gases, la cromatografía de líquidos de alto rendimiento
(HPLC, de high-performance liquid chromatography) no está limitada por la volatilidad o la
estabilidad térmica de la muestra.
APLICACIONES
Campos de Aplicación de HPLC
 Fármacos: Antibióticos, sedantes esteroides, analgésicos
 Bioquímica: Aminoácidos, proteínas, carbohidratos, lípidos
 Productos de alimentación: Edulcorantes artificiales, antioxidantes, aflatoxinas,
aditivos
 Productos de la industria química: Aromáticos condensados, tensoactivos,
propulsores, colorantes
  Contaminantes: fenoles, Pesticidas, herbicidas, PCB
 Química forense: Drogas, venenos, alcohol en sangre, narcóticos
 Medicina clínica: Ácidos biliares, metabolitos de drogas, extractos de orina,
estrógenos.
Algunas aplicaciones importantes de la HPLC preparativa
 Separación y purificación de metabolitos
 Separación y purificación de los metabolitos de las drogas procedentes de muestras
de orina
 Purificación y separación de enantiómeros
 Purificación de compuestos naturales
 Purificación y caracterización de enzimas y proteínas
2_CROMATOGRAFIA DE GASES
 En cromatografía de gases la muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de un
a columna cromatográfica.
 La elución se produce por el flujo de una fase móvil que es un gas inerte, y a difer
encia de la mayoría de los tipos de cromatografía, la fase móvil no interacciona con las mo
léculas del analito; su única función es la de transportar el analito a través de la columna.
 Respecto a la cromatografía líquida, la cromatografía de gases tiene la ventaja de
disponer de detectores mucho más universales (por ejemplo, el de ionización de llama).
 Además, para numerosas aplicaciones, los métodos son más simples, más rápido
s y más sensibles que los correspondientes a la cromatografía líquida de alta resolución.

APLICACIONES:
 Medioambientales: Análisis de pesticidas y herbicidas, análisis de hidrocarburos,
semivolátiles y volátiles, análisis del aire...
 Alimentos y aromas: fragancias y aromas, aceites, bebidas, ácidos orgánicos,
azúcares, FAMES, ésteres metílicos, triglicéridos, alcoholes...
 Química Industrial: alcoholes, ácidos orgánicos, aminas,aldehídos y cetonas,
ésteres y glicoles, hidrocarburos, disolventes, anilinas, gases inorgánicos...
 Biociencia: drogas, fármacos, alcoholes y contaminantes en sangre, disolventes
residuales...
 Derivadas del petróleo: gas natural, gases permanentes, gas derefinería,
gasolinas, gasóleos, parafinas…
3) DIGA QUE ES LA ELECTROFORESIS Y CUAL ES SU FUNDAMENTO E
IMPORTANCIA
_La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según la movilidad de
estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual finalmente las separa
por tamaños moleculares y carga eléctrica, dependiendo de la técnica que se use.
_La electroforesis capilar (CE) es una técnica de separación que se ha desarrollado gracias
a los avances de la cromatografía líquida de alta eficacia junto con los procedimientos más
tradicionales de electroforesis.
La importancia de este proceso para la vida es que fundamentalmente el desprendimiento
del oxígeno e hidrógeno por parte del agua permite el desarrollo de estas vidas.

4) DIGA USTED QUE MÉTODO CROMATOGRÁFICAS SE PODRÍA APLICAR EN SU

CARRERA PROFESIONAL
 La técnica más usada es la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), por su
sensibilidad, fácil adaptación a las determinaciones cuantitativas exactas, su
idoneidad para la separación de especies no volátiles y su aplicación a sustancias
de primordial interés en la industria, como son los aminoácidos, proteínas, ácidos
nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, entre otros.
 Ahora veamos las aplicaciones de la cromatografía:
 Cromatografía en papel: En la actualidad ha entrado en desuso debido a su bajo
poder de resolución, pero en un principio, sirvió para separar compuestos orgánicos
contenidos en mezclas de extractos vegetales que les servían a los antiguos
farmacéuticos.
 Cromatografía en capa fina: Este tipo de cromatografía todavía es muy usada en
investigación para separar compuestos orgánicos como lípidos, colorantes
naturales, etc.
 PRÁCTICA N° 5
IDENTIFICACIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS: CROMATOGRAFÍA

RESULTADOS:

1.- Que precauciones debió tener en cuenta durante el desarrollo del cro
matograma:
 Al partir el capilar con el mechero se debe estirar por los extremos y así sea
más rápido.
 Al usar la manguera para el revelado debe ser desde una cierta distancia y co
nstante

2.- Que debe tener en cuenta para que la muestra pueda ser aplicada en la c
romatografía

 Son diferentes los factores que debemos tener en cuenta:

 El tiempo: es muy importante calcular el tiempo que debe estar sumergida l
a Placa, en la muestra, ya que determinara la cantidad absorbida
 Manipulación: con respecto al trato que se le debe hacer a la placa, pues u
na vez ya absorbida, entonces debemos manipularla con delicado, evitando que
se “contamine”
 Haber hecho las marcas respectivas, para así lograr un buen calculo de las
distancias que serán necesarias en la razon que hallaremos

3- El Rf de la muestra de la cromatografía en capa fina es: Mue

stra estándar:0.33
Muestra problema:

Podemos decir en conclusión que:

 La cromatografia de capa fina (TLC) es una técnica muy simple, que prese
nta una gran utilidad en separaciones de compuestos para llevar a cabo un
análisis cualitativo
 Resulta particularmente útil en la separación de colorantes, puesto que al tr
atarse de sustancias detectables a simple vista, no se requiere la etapa de
revelado de las manchas
 Dado que la cuantificacion de los compuestos separados por TLC presenta
una dificultad notable, los resultados iobtenidos por esta tecnica pueden em
plearse como etapa previa a un estudio por HPL

BIBLIOGRAFIA:
ABBOT D. y Andrews R.S. Introduccion a la cromatografia. 3a. Ed. Alha
mbra, Madrid, 1970.
E. Stall (Editor) “Thin Layer Chromatography. A Laboratory Handbook”.
2nd. De. Springer Verlag, New York, 1969