Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
INTRODUCCION
0.4
RESULTADOS
ABSORBANCIA
0.3
y = 0.0044x + 0.0011
Cromatografía en capa fina
0.2
Reactivo Resultado Rf obtenido 0.1
Molibdato + 0.64
0
Bismuto + 0.60
0 20 40 60 80 100 120
Ninhidrina + 0.68
MICROGRAMOS DE COLESTEROL
Cristales de yodo + 0.53
TABLA 1: Resultados de revelación con reactivos específicos para
fosfolípidos. GRAFICA 1: Absorbancia vs µg de Colesterol 1
DISCUSIONES de estándar de colesterol (80 µg/mL) excepto el tubo
problema y el testigo, posteriormente se les adiciono
Cromatografía en capa fina diferentes volúmenes de cloroformo, el cual efectuara la
función de solvente en la reacción. Después se agrega
Se separaron diferentes fosfolípidos de una yema de únicamente a nuestro tubo problema el extracto de
huevo, esto con una solución no polar de cloroformo- lípidos obtenido en la práctica anterior (separación de
metanol, ya que los fosfolípidos son solubles en fosfolípidos por cromatografía en capa fina), de
soluciones no polares. Posteriormente adicionamos KCl inmediato agregamos 0.40 mL de anhídrido acético a
y agitamos, de inmediato se dejó reposar para la todos los tubos y los agitamos. Por último se adiciona a
formación de 2 fases, en la fase orgánica (inferior) se todos los tubos 50 µL de ácido sulfúrico concentrado, se
encuentra la parte polar del lípido, mientras que la fase agitan y se dejan incubar a temperatura ambiente, es
acuosa (superior) se encuentra la parte no polar (el aquí cuando ocurre la reaccion entre el colesterol, el
grupo fosfato). Después utilizamos la fase orgánica para anhídrido acético y el ácido sulfúrico, dando como
la separación cromatográfica. resultado una mezcla color verde, que proviene de la
formación del ácido 3,3 biscolesta-3,5 dienilsufonico que
Se aplicaron muestras en cuatro cromatogramas presenta un color amarillo, y el ácido 3,3 biscolesta-3,4
diferentes, posteriormente se introdujeron en la cámara dienilsufonico de un color azul.
de cromatografía y se utilizó como fase móvil una
mezcla de cloroformo-metanol-ácido acético-agua. Más Posteriormente se leyeron en el espectrómetro los
tarde se revelaron los cromatogramas con diferentes tubos, y se obtuvo la curva tipo, ya que se utilizaron
reactivos (tabla 1): diferentes concentraciones de la solución estándar de
colesterol, después interpolamos en la gráfica nuestro
La prueba de Molibdato da positiva (imagen 1) en la valor de absorbancia de 0.119 obtenido para nuestro
revelación del cromatograma, ya que se observaron tubo problema, y tenemos que hay 26.79 µg de
manchas azules, y esto nos indica que hay presencia de colesterol. Por ultimo mediante una regla de tres,
fosfolípidos en la yema de huevo. tenemos que en 5 µL hay 26.79 µg de colesterol, por lo
tanto para 1200 µL hay 6 429.6 µg de colesterol.
La prueba de Bismuto da positiva (imagen 1), ya que se
observaron en el cromatograma manchas amarillo-
naranjas que comprueban la presencia de colina en CONCLUSIONES
fosfolípidos.
La yema de huevo contiene aproximadamente
La prueba de ninhidrina indica la presencia de 6,429.6 µg de colesterol.
fosfolípidos que contienen grupos amino, mediante la Se realizó la separación de fosfolípidos en yema
aparición de manchas violeta, esta prueba dio positiva de huevo, se identificó la presencia de estos
en la revelación del cromatograma (imagen 1). mediante la prueba con reactivo de Molibdato.
La yema de huevo contiene fosfolípidos con
Por último, la prueba de Yodo indica la presencia dobles enlaces, colina y grupos amino.
fosfolípidos con dobles enlaces, mediante la aparición
de manchas café, esta prueba dio positiva para la
revelación de nuestro cromatograma (imagen 1). BIBLIOGRAFÍA