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FOSFATASAS

Las fosfatasas son un grupo de enzimas que pertenecen a la hidrolasa, que son
capaces de escindir (dividir, cortar) moléculas diferentes en componentes más
pequeños, por efecto del agua. En el caso de fosfatasa, Estos actúan hidrolizando los
ésteres de ácidos fosfóricos, privándoles de un grupo fosfato. Se obtiene así un ion
fosfato, útil para diversos procesos metabólicos del organismo, esencial para el buen
funcionamiento de las células. Esta reacción se define generalmente como la
desfosforilación, y es exactamente lo contrario de lo que sucede en la fosforilación.
En general la desfosforilación de un sustrato, sea una proteína, un glúcido o una
molécula de ADN, supone la inactivación del sustrato.
Son enzimas con actividad fosfomonoesterasa que se encuentran en las membranas
celulares de numerosos órganos, entre ellos, el hueso, placenta, intestino, hígado,
riñón y en los leucocitos.
Si son activas a un pH inferior a 7 se denominan fosfatasas acidas, y si son activas a
un pH superior a 7 se denominan fosfatasas alcalinas.
FOSFATASA ALCALINA
Su nombre completo es fosfo-mono-esterasa alcalina, puesto que es capaz de romper
un enlace fosfoéster y su mayor actividad la realiza en medios de pH alcalino.
Para su actividad es necesaria una molécula de agua de la que toma un hidrógeno
para intercambiarlo por el fósforo y formar un alcohol en el proceso de liberación o de
transposición del fosfato entre dos sustratos. Estas enzimas necesitan un cofactor
iónico, bien de magnesio (Mg2+) o bien de (Zn 2+).
En humanos, hay cuatro tipos de isoenzimas:
 La no específica a tejido (TNAP) que se encuentra en hueso, hígado y riñón
 La isoenzima placentaria (PLAP)
 La de células germinales (GCAP)
 La intestinal (IAP)
Cada una en su lugar, estas enzimas tienen la capacidad de hidrolizar los enlaces
fosfoéster, es decir de romper los enlaces entre un fosfato y un grupo hidroxilo de una
molécula, por la acción de una molécula de agua.
La fosfatasa alcalina es útil para detectar enfermedades óseas o hepáticas.
Cuando existe daño hepático, las células lesionadas liberan cantidades importantes de
fosfatasa alcalina hacia la sangre.
Cualquier situación que repercuta sobre el crecimiento óseo o genere un aumento de la
actividad de las células óseas puede hacer aumentar los niveles de fosfatasa alcalina
en sangre.
La concentración de fosfatasa alcalina puede aumentar durante el embarazo, y también
durante el proceso de reparación de las fracturas óseas.
Los niños y los adolescentes tienen valores de fosfatasa alcalina más elevados debido a
que sus huesos están creciendo y la concentración de la misma suele ser muy elevada
durante el "estirón", que se da a diferentes edades en chicos y chicas.
Algunos fármacos pueden alterar los niveles de fosfatasa alcalina. Por ejemplo, los
anticonceptivos orales pueden hacerlos disminuir, mientras que los antiepilépticos los
pueden hacer aumentar.
FOSFATASA ACIDA
La denominación fosfatasa ácida comprende un conjunto de enzimas ampliamente
repartidas en el organismo (eritrocitos, suero, plaquetas, leucocitos, bazo, hígado,
osteoclastos y en epitelios glandulares de próstata, mama, estómago y colon) que
pertenecen a las fosfatasas, un tipo de enzima usado para liberar grupos fosfato
adheridos a otras moléculas. Se almacena en los lisosomas y funciona cuando estos se
unen a las endosomas, los cuales tienen un pH ácido. De ahí que su actividad sea
óptima en pH ácidos.
La fosfatasa ácida total en hombres consiste de aproximadamente una parte prostática
y el resto del hígado y se desintegra en las plaquetas y eritrocitos. En mujeres, la
actividad sérica es presumiblemente a partir del hígado, eritrocitos y plaquetas.
La fosfatasa ácida cataliza la siguiente reacción a pH menor a 7 (idealmente de 4 a 6);
Mono éster ortofosfato + H2O = alcohol + H3PO4
Existen dos fracciones:
 Fracción prostática
 Fracción eritrocitaria
Fracción prostática: Que es la más importante y actúa a un pH 4,9 constituye la
mayor parte de la fosfatasa acida.
Fracción eritrocitaria: Actúa a un pH 7.
FOSFATASA ÁCIDA Y ALCALINA (ABSORCIÓN)

FOSFATASA ALCALINA
Se encuentra principalmente en:
 Hígado
 Hueso,
 Intestino
 Placenta
 Riñón
El hígado produce más fosfatasa alcalina que los otros órganos o que los huesos.
Se le considera fosfatasa alcalina, como su nombre lo dice actúa en un medio alcalino,
pH 8,6 a 9.1 es eliminada por la bilis.

VALORES DE REFERENCIA FOSFATASA ALCALINA

Debido al proceso osteoblástico, la isoenzima ósea se encuentra aumentada en la


niñez y adolescencia (hasta los 18 años aproximadamente), proporcionando valores de
fosfatasa alcalina más elevados que en los adultos, habiéndose observado valores de
hasta 700 UI/l en niños sin patología que justificara un origen extra óseo de la enzima.

Si tenemos niveles superiores de fosfatasas alcalinas tendremos:


 Osteopatías
 Cálculos biliares
 Leucemia
 Los niveles inferiores de fosfatasa alcalina se dan por:
 Desnutrición
 Deficiencia de proteínas

El examen de isoenzimas de la fosfatasa alcalina es una prueba de laboratorio donde


se va medir las cantidades de diferentes FA en sangre.

FOSFATASA ÁCIDA
La encontramos en:
 Hígado
 Glóbulos rojos
 Medula ósea
 Plaquetas
 Próstata
Se le considera fosfatasa acida, como su nombre lo dice actúa en un medio acido, pH 5
a 5.6

VALORES DE REFERENCIA
La fosfatasa ácida prostática (PAP) constituye un valioso auxiliar en el diagnóstico
precoz de cáncer prostático, una de las formas neoplásicas de mayor morbilidad. La
determinación de la actividad enzimática de PAP usando α-naftil fosfato como sustrato
ha mostrado sensibilidad y especificidad adecuadas para su utilización en el
diagnóstico de esta enfermedad.
Se encuentran actividades elevadas de Fosfatasa ácida total (ACP) en algunas
enfermedades hematológicas (leucemia mielocítica, trombocitopenia idiopática) y óseas
(enfermedad de Paget, carcinoma óseo), así como en algunos tipos de cáncer,
enfermedades hepáticas (hepatitis, ictericia obstructiva).
VALORES DE REFERENCIA

Fosfatasa Acida Total (ACP): < 9 U/l (a 37o C)


Fosfatasa Acida Prostática (PAP): < 3,5 U/l (a 37o C)
PATOLOGIAS
FOSFATASA ACIDA

En el suero de individuos normales encontramos mayoritariamente dos isoenzimas de FA:


ósea (isoenzima 5) y prostática (isoenzima 2), siendo esta última inhibible en forma química
por tartrato de sodio.
Se ha visto que, en individuos con carcinoma de próstata, se produce una elevación en los
niveles de la enzima en suero, como consecuencia del aumento de isoenzima prostática.
Cuando no se ha producido metástasis y el tumor se encuentra circunscripto a la glándula, el
incremento será pequeño o nulo.
En cambio, éste será importante cuando existe compromiso de otros tejidos, especialmente,
el óseo.
Fosfatasa ácida en su aumento puede señalar:

 Los problemas de próstata, tales como cáncer, inflamación, hipertrofia


 Infarto
 El hiperparatiroidismo
 Enfermedad Gaucher
 Enfermedad de Paget
 Las metástasis óseas
 Mielomas

También parece que hay una correlación positiva entre el aumento de los valores
de fosfatasa y la dependencia en el consumo de cigarrillos.

FOSFATASA ALCALINA

Altos niveles de fosfatasa alcalina pueden detectar diversas enfermedades, que podrán
referirse a los conductos hepáticos y biliares, especialmente si hay un aumento de
otros valores, como la bilirrubina y las transaminasas. Entre estas condiciones somos:

 La obstrucción de la vía biliar o vesícula biliar


 Pancreatitis obstructivo
 Hepatitis
 Mononucleosis
 Cáncer biliar
 Metástasis de hígado
 Cirrosis

Si hay un aumento también en calcio y fósforo séricos, puede haber problemas en el


hueso, tales como:

 Enfermedad de Paget
 Herpes
 Las metástasis óseas
 Artritis Reumatoide
 Hipotiroidismo
 El hiperparatiroidismo primario o secundaria a daño renal o deficiencias nutricionales
 Osteomalacia
 Malabsorción
 Fractura ósea
 La deficiencia de vitamina D
 Osteomielitis
 Raquitismo

Las posibles razones de un aumento de la concentración de la fosfatasa alcalina

 Embarazo continuó más allá del plazo, dado que la placenta es uno de los sitios de
producción de fosfatasa alcalina
 Amilosis
 Los granulomas
 Inflamación gastrointestinal crónica, como la colitis ulcerosa, úlceras, o la enfermedad
de Crohn
 Las infecciones sistémicas, la septicemia
 Sarcoidosis
 La artritis reumatoide
 Algunos tipos de cáncer, como el linfoma de Hodgkin o cáncer ginecológico
 Lesiones cardiovasculares o pulmonares
 Dieta rica en proteínas

Fosfatasa bajo

Por el contrario, las posibles causas de la fosfatasa alcalina inferiores a lo normal


pueden incluir:

 La deficiencia de zinc
 Hipotiroidismo
 La deficiencia de vitamina C, el escorbuto
 Deficiencia de ácido fólico
 El exceso de vitamina D
 Los bajos niveles de fosfatos, hipofosfatemia
 La enfermedad celíaca
 La desnutrición con la dieta baja en proteínas
 Función inadecuada de las glándulas paratiroides
 Anemia perniciosa
 La deficiencia de vitamina B6

TÉCNICAS DE DIAGNOSTICO
FOSFATASA ACIDA

FUNDAMENTOS DEL METODO


La fosfatasa ácida (ACP EC 3.1.3.2.) hidroliza el α-naftil fosfato a pH 5,2 con liberación
de fosfato y α-naftol. El naftol reacciona a su vez con un diazorreactivo presente en el
sistema (Fast Red TR) produciendo un pigmento amarillo, de modo que el aumento de
la absorbancia, leído a 405 nm, es proporcional a la actividad de fosfatasa ácida total
(ACP) de la muestra. Cuando se mide la actividad en presencia de tartrato, se inhibe la
actividad de la isoenzima prostática. La diferencia entre las actividades de fosfatasa
ácida total (ACP) y de la resistente al tartrato (Fosfatasa Acida no Prostática/ ACP-NP)
corresponde a la fracción prostática (PAP).

REACTIVOS PROVISTOS

A. Reactivo A: buffer citrato 0,1 mol/l, pH 5,2.


B. Reactivo B: viales conteniendo α-naftil fosfato 10 mmol/l y Fast Red TR 1,5
mmol/l.
C. Reactivo C: solución de tartrato 135 mmol/l en buffer citrato 100 mmol/l, pH 5,2.
D. Reactivo D: solución de ácido acético 0,7 mol/l.

REACTIVOS NO PROVISTOS
Solución fisiológica (cloruro de sodio 9 g/l).

MATERIAL REQUERIDO (no provisto) - Espectrofotómetro.


- Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
- Cubetas espectrofotométricas de caras paralelas.- Cronómetro.

CONDICIONES DE REACCION

- Longitudde onda: 405 nm


- Temperatura de reacción: 37oC
- Tiempo de reacción: 3 minutos
PROCEDIMIENTO

En una cubeta mantenida a 37oC colocar:


ACP ACP-NP

Reactivo B ACP 1 ml -
Reactivo B ACP-NP - 1 ml
Preincubar unos minutos. Luego agregar:

Muestra 100 ul 100 ul

ACP: mezclar y disparar simultáneamente el cronómetro. A los 5 minutos registrar la


D.O. Leer posteriormente la absorbancia cada minuto durante 3 minutos. Determinar
la diferencia promedio de absorbancia/minuto (∆A/min) restando cada lectura de la
anterior y promediando los valores. Utilizar este promedio para los cálculos (∆A1/min).
ACP-NP: proceder de la misma manera que para ACP.
Se obtiene el ∆A2/min.

PRECAUCIONES

Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro". Utilizar los reactivos guardando las
precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos. Todos los
reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente.

FOSFATASA ALCALINA

FUNDAMENTO DE METODO
La fosfatasa alcalina desdobla al fenilfosfato de sodio en medio alcalino tamponado
con aminometil propanol (AMP). El fenol liberado se determina por reacción con 4-
aminoantipirina y ferricianuro como agente oxidante. El color desarrollado es
directamente proporcional a la actividad enzimática y se mide a 520 nm.

REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: 4-aminoantipirina 29 mmol/l en solución de aminometil propanol 3 mol/l.
B. Reactivo B: fenilfosfato de sodio, 1,4 mmoles.
C. Reactivo C: ferricianuro de potasio, 10 mmol/l.
S. Standard: solución de fenol equivalente a 200 UI/l.

REACTIVOS NO PROVISTOS Agua destilada.

MATERIAL REQUERIDO (no provisto) - Espectrofotómetro o


fotocolorímetro.
- Micropipetas y pipetas para medir los volúmenes indicados.
- Tubos.
- Probeta.
- Baño de agua a 37oC. - Reloj

CONDICIONES DE REACCION
- Longitud de onda: 520 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro con filtro verde
(500-550 nm).
- Temperatura de reacción: 37oC
- Tiempo de reacción: 10 minutos
- Volumen de muestra: 50 ul
- Volumen final de reacción: 3,05 ml

PROCEDIMIENTO

En tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido) colocar:


B S D
Reactivo A reconstituido 0,5 ml 0,5 ml 0,5 ml
Preincubar en baño de agua agregar: a 37Co unos minutos. Luego

Suero - - 50 ul
Standard - 50 ul -
Mezclar, incubar exactamente 10 minutos (cronómetro) y
agregar:
Reactivo C 2,5 ml 2,5 ml 2,5 ml

Mezclar de inmediato cada tubo. Retirar los tubos del baño y leer en espectrofotómetro
a 520 nm o en fotocolorímetro con filtro verde, llevando el aparato a cero de absorbancia
con agua destilada.

PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro". Utilizar los reactivos guardando las
precauciones habituales de trabajo en el laboratorio de análisis clínicos. Todos los
reactivos y las muestras deben descartarse de acuerdo a la normativa local vigente.
RECOMENDACIONES AL PACIENTE ANTES DE TOMAR LA MUESTRA

Instrucciones generales para los análisis de sangre. 1-3

- Evitar el estrés antes y durante la toma de la muestra.


- No hacer ejercicios vigorosos durante 3 días antes de tomar la muestra.
- No ingerir bebidas alcohólicas antes ni durante la toma de la muestra.
- Permanecer en ayunas durante 12 horas antes de tomar la muestra.
- No fumar antes ni durante la toma de la muestra.
- Los pacientes en reposo no deberán cambiar de postura al tomarles la muestra.
- Suspender anticonceptivos orales durante 7 días.

CASO CLINICO

Paciente de sexo masculino con antecedentes de cirugía de cadera derecha a los 21


años. Posteriormente instala dolor crónico en cadera izquierda con agudización
intermitente. A los 49 años, con diagnóstico de artrosis severa de cadera izquierda se
efectúa prótesis de dicha cadera. En la evaluación clínica previa a la cirugía se detecta
anemia, plaquetopenia y esplenomegalia leve confirmada por ecografía. No hay
evidencia clínica ni ecográfica de hepatomegalia.

Hemograma:

Hematocrito: 30%
Hemoglobina:10,2 g%
Leucocitos: 4.500/mm3
Plaquetas:14.500/mm3
Mielograma: células tesaurismóticas que recuerdan las células de Gaucher.
Fosfatasa ácida total: 16,5 UI/l
Deficiente actividad de b-glucosidasa en leucocitos. Genotipo: N370S/ L444P.
Recibió TRE (terapia de reemplazo enzimático) durante tres meses sin constatarse
eventos adversos. En la evolución persisten dolores óseos con agudización esporádica.

RESPUESTA:
Hematocrito: (valor normal: 38-48%)
Hemoglobina: (valor normal: 13-18 g/dl)
Leucocitos: (valor normal: 5000 - 10.000/mm3)
Plaquetas valor normal: 150.000- 450.000/mm3)
Fosfatasa ácida total: (valor normal: 0,9-9 UI/l)
ENFERMEDAD DE GAUCHER TIPO I

BIBLIOGRAFIA

1. https://www.infobioquimica.com/wrapper/CDInterpretacion/te/bc/193.htm.
2. http://inertwo-sp.curing.in.ua/enfermedades/29026-fosfatasa-sntomas-y-causas-
valores-de-fosfatasa.html
3. http://inertwo-sp.curing.in.ua/enfermedades/29026-fosfatasa-sntomas-y-causas-
valores-de-fosfatasa.html
4. http://www.wiener_lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espano
l/fosfatasa_acida_total_y_prostatica_cinetica_sp.pdf
5. http://www.wiener_lab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espano
l/fosfatasa_acida_total_y_prostatica_cinetica_sp.pdf

6. http://bvs.sld.cu/revistas/san/vol3_1_99/san07199.html
UNIVERSIDAD EVANGELICA BOLIVIANA
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
BIOQUIMICA Y FARMACIA

Exposición: Fosfatasa Alcalina y Acida

Materia: Química Sanguínea


Docente: Lic. Silvia Tity Coímbra

INTEGRANTES:
 Silvia Sánchez Salinas
 Yoselin Calizaya Patiño
 Sindy Seña Arancibia