MATERIALES Y METODOS

En ese proceso se estudió la actividad de la catalasa encontrada en la célula celular, la

cual encontraremos diferentes intensidades de burbujeo, dependiendo de la cantidad de
catalasa presente.

La mayoría de las enzimas son proteínas. Por lo tanto todas las enzimas sufren
desnaturalización frente al calor. Esto quiere decir que cuando la temperatura es muy
elevada, la enzima pierde su estructura terciaria, por lo tanto su sitio activo también se
desnaturaliza, y ya no puede cumplir su función.

 Para el experimento de laboratorio primeramente se necesita:

-Tomate verde - Hidróxido de sodio 2N

-Papa verde - Ácido clorhídrico 0.5N
-Manzana verde - Ácido tricloroacético 20%
-Sulfato de cobre 20%
-Gradilla -Buffer fosfato 0.05 M, y 0.1 M pH 6,5
-Tubos de ensayo -Peróxido de hidrógeno 3%
-Pipetas -Cloruro de sodio 0.15 M

 Para ello se procedió a machacar los vegetales con ayuda del mortero, luego se
agregó solución buffer (6ml) a cada uno respectivamente, seguidamente se filtró el
extracto crudo a través de 2 capas de gasa, lo cual se produjo 10 ml de enzima en
cada tubo de ensayo, se llevó a centrifugar por 15 minutos.
 A continuación armamos el siguiente sistema para cada vegetal:
TUBOS (ml) I II III IV V VI
Enzima 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
NaOH 2N ---- 2.4 ---- ---- ---- ----
HCl 0.5N ---- ---- 2.4 ---- ---- ----
ATCA 20% ---- ---- ---- 2.4 ---- ----
CuSO4 20% ---- ---- ---- ---- 2.4 ----
Buffer Fosfato 0.05 M pH 6,5 ---- ---- ---- ---- ---- 2.4
Dejar en reposo los 6 tubos por cada vegetal durante 20 minutos a 30ºC

 Mientras se armó un segundo sistema de tubos dejando reposar 2 minutos a

25ºC:

TUBOS (ml) I II III IV V VI

Buffer fosfato 0.05 M pH 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0
6,5
NaCl 0.15 M 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
H2O2 3% 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
  Finalmente se agrega a cada uno de los tubos 2ml del sistema anterior al segundo
sistema ya preparado rotulando los tubos. Determinando la actividad enzimática.

RESULTADOS
TUBOS I II III IV V VI

TOMATES Burbujeo menor ---- ---- ---- ---- Burbujeo menor

PAPAS Burbujeo continuo ---- ---- ---- ---- Burbujeo continuo

MANZANA Burbujeo menor ---- ---- ---- ---- Burbujeo menor

 La presencia de enzima significa que no ha sido desnaturalizada por la presencia

de burbujas. Esto quiere decir que la cantidad de burbujas indica la cantidad de
enzimas (directamente proporcional).
 Teóricamente se comprobó el burbujeo tanto en el tubo N°1 y 6.

DISCUSIONES

 Las Óxido reductasas son enzimas que catalizan reacciones de

transferencias de electrones; es decir de oxidación o reducción. La catalasa
como todas las enzimas tiene naturaleza proteica y por lo tanto es afectada
por los mismos factores de desnaturalización y otras propiedades que
afectan a las proteínas. Estas sufren desnaturalización cuando son
sometidas a temperaturas y pH inadecuados, en nuestra practica nos tocó
extraer la catalasa de un vegetal inmaduro (papa), lo obtuvimos en forma de
extracto crudo, le agregamos buffer y lo sometimos a centrifugación por 15’,
luego de los cuales se obtuvo un líquido que era la enzima y en forma de
precipitado el almidón y restos de tejidos. También podemos atribuirlo a que
debimos dejarlo a una temperatura adecuada en el momento de la
incubación.
 Por otra parte la velocidad de inactivación térmica depende del pH, la fuerza
iónica y el estado físico de las enzimas. Pero también es sabido que algunas
enzimas que no han sido inactivas, se “regeneran” y su actividad se renueva
después de algún tiempo. El resultado global de la desnaturalización de una
proteína y por ende enzima en algunos casos se debe al despliegue de la
cadena polipeptídica y su transformación en un polímero plegado al azar,
esta transición explica la formación de gases, aumento de reactividad y la
susceptibilidad en la acción enzimática.
 CONCLUSIONES
• El peróxido de hidrógeno se descompone en agua y oxigeno por intervención de
la catalasa, enzima que contiene hem.
• La actividad de la catalasa puede medirse por diversos procedimientos, sin
embargo hay que procurar operar con la menor concentración posible de sustrato,
agua oxigenada, a temperatura baja (baño de hielo), para evitar la inactivación de
la enzima por el sustrato.
• La catalasa se encuentra en todas las células que tienen metabolismo aerobio.
• La determinación de la magnitud de la actividad catalítica presentes en las
diferentes fracciones proteicas obtenidas de la célula o tejidos: permite purificar las
enzimas y obtenerlos al final en forma homogénea.
• Entre los vegetales estudiados, la papa es la que contiene mayor cantidad de
catalasa; seguida de la manzana.

• La enzima es un producto delicado, por lo tanto la agitación excesiva desnaturaliza

la enzima.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es un extracto crudo?

El extracto crudo es un compuesto con otra sustancia o compuesto que al hacer el
extracto aún quedan su esencia de los dos compuestos, por ejemplo haces un
extracto de un planta x con etanol cuando tu extracto todavía tiene etanol.

2. ¿A qué clase de enzima corresponde la catalasa? Su nombre y su

código EC.
La catalasa es una enzima perteneciente a la categoría de
las oxidorreductasas que cataliza la descomposición del peróxido de
hidrógeno (H202) en oxígeno y agua. Esta enzima utiliza como cofactor al
grupo hemo y al manganeso. Código E.C: 1. 11. 1. 6

3. ¿Qué otros factores pueden considerarse para demostrar que las

enzimas son proteínas?
Desde este punto de vista, nos acercaremos al conocimiento de las enzimas. En
primer lugar, para tratar de comprender su funcionamiento y, ¿por qué no?, para
llenarnos de asombro ante su eficacia catalítica y ante el resto de sus propiedades;
después, para con esa comprensión, tratar de entender las bases sobre las que se
asienta el aprovechamiento de esas propiedades.

4. Indique 4 enzimas que pueden extraerse de vegetales.

Maltasa, que convierte el disacárido de malta en 2 unidades de glucosa Alfa
Amilasa, sintetiza el almidón. Citocromo oxidasas, que contienen proteínas
distribuidas en tejidos vegetales y animales.

5. Importancia de las Enzimas.

La enzima puede fijar la molécula de sustrato de tal modo que el enlace susceptible
se halle:
a) Muy próximo al grupo catalítico sobre el centro activo.
b) Orientado de tal forma en la relación con el centro catalítico que el estado de
transición se forma con facilidad.
- Algunas enzimas se pueden combinar con el sustrato para formar un intermediario
covalente inestable que reacciona con más facilidad para formar los productos.
- Al proporcionar grupos funcionales capaces de actuar como donadores o
aceptores de protones, la enzima puede efectuar una catálisis general ácida o
básica.
- La enzima puede incluir una tensión o una distorsión en el enlace susceptible de
la molécula del sustrato, determinando que la ruptura del enlace sea más fácil.