Universidad Privada de Tacna

Escuela de ing, Agroindustrial

Laboratorio de análisis agroindustrial
PRACTICA N°8
DETERMINACION DE PROTEINAS
METODO DE BIURET

I. INTRODUCCION
Las proteínas forman con el agua soluciones coloidales por su gran tamaño, formándose
coágulos al ser calentados a temperaturas superiores a 70°C al ser tratadas con
soluciones salinas, ácidos, alcohol entre otras.
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su
desnaturalización por los agentes indicados que al actuar sobre la proteína la desordenan
por la destrucción de sus estructuras secundaria y terciaria Entre las reacciones
coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por lo tanto para su identificación,
descarta la reacción de biuret.
Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se
debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los
aminoácidos.
El reactivo de Biuret lleva sulfato de Cobre (II) en medio alcalino y el cobre en un medio
fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de
color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas

II. OBJETIVO
Determinar proteínas de harina de frijol panamito por el método Biuret.

III. FUNDAMENTO TEORICO

3.1.- FUNDAMENTO DEL METODO BIURET
El nombre de la reacción procede del compuesto coloreado formado por la condensación
de dos moléculas de urea con eliminación de amoniaco. Si una solución fuertemente
alcalina de sulfato cúprico (CuSO4) se añade a una solución de proteína se forma un
complejo entre el ión cúprico y los enlaces peptídicos, con aparición de una coloración
violeta-púrpura, que presenta un máximo de absorción a 540 nm.

La reacción o prueba de biuret es un método que detecta la presencia de compuestos de

dos o más enlaces peptídicos y por lo tanto sirve para todas las proteínas o péptidos de
cadena corta.

La reacción de Biuret puede utilizarse para determinar la cantidad de proteína soluble en

una reacción, es el reactivo de biuret que al estar en contacto con otra solución cambia de
color.
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El espectofrotómetro se puede utilizar para medir la intensidad del color que se produjo,
mientras mas cantidad de proteína este presente en la solución más oscuro es el color.

IV. MATERIALES Y METODOS

4.1 MATERIA PRIMA

Harina de Frijol panamito

4.2 EQUIPOS MATERIALES

ESPECTOFOTÓMETRO AGITADORES

TUBO

CENTRIFUGA PIPETAS

4.2 REACTIVOS
NaCl 0,15 M
NaOH
Sulfato de Cobre
Reactivo de Biuret
Albúmina de suero Bovina

V. PREPARACION DE MUESTRAS
 -Tomar 50 gr de frijol y moler hasta una granulometría 60 mesh. Reservar una
porción para proteína por el método de Lowry 1/20
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PROCEDIMIENTO DEL MÉTODO DE BIURET.
A partir del extracto salino obtenido, se forma alícuotas de 0,1 ml (muestra) y 0,2 ml
(muestra 2). Seguidamente completar a 1,0 ml con agua destilada, adicionar 4,0 ml del
reactivo de biuret y realizar la lectura después de 30 min a 540 nm.
Del mismo modo se preparan una curva padrón a partir del suero de albúmina bovina
en la concentración de 0,1 g/10 ml.
1. Solución Padrón de Albúmina Bovina.
 Pesar 1000 mg de suero albúmina bovina y 0,1 ml de NaOH 1N
 Disolver con agua destilada y completar para 100 ml (sin mucha agitación)
 Esta concentración equivale a 0,1 g/10 ml ó 1,0 g/100 ml
2. Preparación del reactivo de Biuret
SOLUCION A
 Pesar 1,5 g de Sulfato de Cobre (CuSo4.5H2O)
 6,0 g de tartrato de sodio y potasio
 500 ml de agua destilada
SOLUCION B
 300 ml de NaOH al 10% (30 gr NaOH/300ml de agua destilada
 Agregar 1,0 g Kl
MEZCLA
 Mezclar ambas soluciones
 Completar para un litro en balón volumétrico
V. CALCULOS Y RESULTADOS

Numero Padrón Concentrac. H2O Reactivo Absorbancia Fc

Fc =
Tubos de SAB(ml) (mg) (ml) Biuret(ml) (540nm) C/A
1 0,1 1,0 0,9 4,0 0,185
2 0,2 2,0 8,0 4,0 0,240
3 0,3 3,0 7,0 4,0 0,295
4 0,4 4,0 6,0 4,0 0,350
5 0,5 5,0 5,0 4,0 0,410
6 0,6 6,0 4,0 4,0 0,452
7 0,7 7,0 3,0 4,0 0,500
8 0,8 8,0 2,0 4,0 0,540
9 0,9 9,0 1,0 4,0 0,592
10 1,0 10,0 -- 4,0 0,650
Blanco - -- -- 4,0
Muestra 1 0,1 4,0 0,200
Muestra 2 0,2 4,0 0,530
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El grafico nos da un valor a partir de una absorbancia de 0,53 de 0,2 mg de concentración,
a partir de ahí realizamos los siguientes cálculos:
Las diluciones fueron:

10g / 100 mL

78 mL

0,2 mL = A = 0.210

APLICANDO:
1. Ecuación de la recta
Utilizando el método de la recta en ajuste de curvas o por regresión lineal, donde se
introdujeron todos los datos se obtuvo el siguiente porcentaje:

Hallando regresión lineal

Y = a + bx

a = 0,1476 mg. b = 0,050 y = 0,53

x = 7,648 mg

7,648 mg 0,2 mL
X 78mL

X = 0.78 mg 78 mL
X 100 mL

X = 1,248g 10 g
X 100 g

X = 12,48% de proteína

VI. DISCUSION
VII. CONCLUSIONES