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PRÁCTICA No.

Determinación del porcentaje de etanol en bebidas alcohólicas por cromatografía de


gases (CG)

RESUMEN

En la determinación del porcentaje de etanol en bebidas alcohólicas por cromatografía de


gases primero se establecen las condiciones adecuadas en el equipo para el análisis de
alcoholes, se ajustan los parámetros del equipo GC con columna capilar:

 Temperatura de horno 55°C


 Temperatura de inyector 200°C
 Temperatura de detector 200°C
 Gas acarreador: Nitrógeno 80psi
 Flujo: 20ml/min
 Flama: Hidrogeno(60psi)-Aire(60psi)
 Volumen de inyección: 10pL
Se prepararon 5 soluciones estándar de Etanol puro en agua, con las siguientes
concentraciones: 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 %v/v, para realizar la respectiva curva de
calibración, se tomaron 10.00ml del estándar y se le añade 1ml de estándar interno (propanol)
en un vial se mantiene en hielo para que no se volatilice y se lleva a baño maría a una
temperatura de 70-80°C por 5 minutos, posteriormente con una jeringa se toman 10pL de la
fase gaseosa y se inyecta cada estándar (todos con el mismo volumen de estándar interno) y
se registra el cromatograma de cada uno de ellos, posteriormente se realiza la curva de
calibración con los valores de Área y Altura para cada estándar al tiempo de retención del
etanol y propanol. Se grafica la relación de área o altura de los picos del analito/estándar
interno vs concentración, se realiza lo mismo con la muestra problema y con la curva de
calibración se determina el porcentaje de Etanol.

CUESTIONARIO

FUNDAMENTO DE LA PRÁCTICA

1. Qué características deben presentar los compuestos para ser analizados por Cromatografía de Gases
(GC)?
R= Deben ser volátiles y térmicamente estables.
2. Cuál es el principio de esta técnica, mencione los componentes principales de un equipo de CG y dibuje
el diagrama de flujo.
R= En cromatografía de gases, los componentes de una muestra vaporizada se separan al ser
distribuidos entre una fase móvil gaseosa y una fase estacionaria líquida o sólida retenida en una
columna.
- Tanque del gas transportador
- Reguladores de flujo
- Cámara de inyección de la muestra
- Columna
- Detector
- Sistema de datos
- Despliegue gráfico
- Medidor de flujo

FIGURA 1.1
Representación
esquemática de un CG

3.
4.
5.
6.
3. Realizar una tabla
indicando las
características de los
detectores que pueden ser utilizados en CG y sus aplicaciones.
Tipo Características Aplicaciones

Ionización de flama El efluente de la columna es Hidrocarburos


dirigido a una pequeña flama
de aire/hidrogeno
Conductividad térmica Consiste en una fuente Detector universal
calentada eléctricamente cuya
temperatura, a energía
eléctrica constante
Captura de electrones Responde selectivamente a Compuestos halogenados
compuestos orgánicos que
contienen halógenos
Espectrómetro de masas (EM) Combinación de cromatografía Ajustable para cualquier
de gases y espectrometría de especie
masas
Termoiónico Parecido en su fabricación al Compuestos de nitrógeno y
FID. Los compuestos que fósforo
contiene nitrógeno y fósforo
producen un aumento en las
corrientes en una flama en la
cual se vaporiza una sal de un
metal alcalino
Conductividad electrolítica Los compuestos que tienen Compuestos que contienen
(Hall) halógenos, azufre o nitrógeno halógenos, azufre o nitrógeno
se mezclan con un gas de
reacción en un pequeño tubo
reactor.
Fotoionización Las moléculas se fotoionizan Compuestos ionizados por
mediante radiación UV radiación UV

Transformada de Fourier IR Mejor resolución Compuestos orgánicos


(FTIR)

4. En qué consiste la cromatografía gas-sólido (CGS)

R= Está basada en la adsorción de sustancias gaseosas en superficies sólidas. Los coeficientes de


distribución son más grandes que aquellos para la cromatografía de gas-líquido. Esta propiedad hace útil
a la cromatografía gas-sólido para separar especies que no son retenidas por las columnas de gas-líquido,
como nitrógeno, el monóxido de carbono, el dióxido de carbono y los gases raros.

La cromatografía gas-sólido se realiza tanto con columnas empacadas como con columnas tubulares
abiertas. Para estas últimas se fija una capa delgada del adsorbente a las paredes internas del capilar.
Dichas columnas a veces son llamadas columnas tubulares abiertas de capa porosa o columna PLOT.

5. En qué consiste la cromatografía gas-líquido (GCL).

R= Se basa en la distribución del analito entre una fase móvil gaseosa y una fase líquida inmovilizada sobre
la superficie de un sólido inerte.

6. Investigar en qué consiste el método de estándar interno y usos.

R= En cromatografía cuantitativa la mayor precisión se consigue por el uso de patrones internos debido a
que se evitan las incertidumbres, asociadas a la inyección de la muestra. En este procedimiento, se
introduce en cada estándar y en la muestra una cantidad exactamente medida del patrón interno, y la
relación de las áreas (o alturas) del analito y del patrón interno sirve como parámetro analítico.

Para poder aplicar este método satisfactoriamente, es necesario que el pico del patrón interno este bien
separado de los componentes de la muestra (RS > 1,25); por otra parte, el pico del patrón debería aparecer
cerca del pico del analito.

Con un patrón interno adecuado, se pueden conseguir, normalmente, precisiones relativas mejores que
el 1 por 100.
7. ¿En qué se basa el análisis cualitativo y cuantitativo en cromatografía de gases?

Cuantitativo: Se basa en la comparación de la altura o el área de un pico de un analito con aquel de uno o
más estándares Si las condiciones son controladas en la forma adecuada, los dos parámetros varían
linealmente con la concentración.

Cualitativo: Los tiempos de retención en la CG deben ser útiles para identificar componentes de mezclas.
Sin embargo, de hecho, la aplicabilidad de dichos datos está limitada por el número de variables que deben
ser controladas para obtener resultados reproducibles.

8. Investigar en qué consiste la técnica de “head-space” y usos.

R= La técnica de Headspace o “espacio de cabeza”, se utiliza para el análisis de compuestos


orgánicos volátiles en muestras tanto líquidas como sólidas. Las muestras se introducen en un vial
cerrado con aire, posteriormente se realiza el equilibrio térmico entre la muestra y la fase gas. Una
vez que se llega al equilibrio termodinámico, con una jeringa o sistema de dosificación se retira una
parte de la muestra que está en fase de vapor y se introduce directamente al inyector del GC o de
cabeza de columna.

FIGURA 1.2
Técnica Head-
Space.

RESULTADOS

Tabla 5.1 Condiciones cromatográficas del equipo GC con columna capilar polar

Temperatura del horno 55°C


Temperatura del inyector 200°C
Temperatura del detector 200°C
Gas acarreador Nitrógeno 80 psi
Flujo 20 mL/min
Flama Hidrogeno (60 psi)-aire (60 psi)
Volumen de inyección 10μL
Tabla 5.2 Tiempo de retención de cada analito.

Analito Tiempo de retención


(minutos)
Etanol 1.67
Propanol 1.88

Tabla 5.3 Áreas de los estándares.

Estándar de etanol Área de etanol Área de propanol Área


(%v/v) etanol/propanol
10 82.81 16.18 5.12
15 98.11 1.89 51.91
20 99.10 0.90 110.11
25 99.48 0.52 191.31
30 99.64 0.36 276.78
35 99.56 0.44 226.27
40 99.80 0.20 499

Figura 5.1 Curva de calibración de estándar interno

Curva de calibración estándar interno


500
y = 14.265x - 162.26
R² = 0.8694
Área Etanol/Propanol

400

300 Área etanol/propanol

200 Linear (Área


etanol/propanol)
100

0
10 20 30 40 50
Concentración de Etanol (%v/v)

Para obtener una buena linealidad en la curva de calibración optamos por descartar un dato
que se alejaba de los demás. [Punto (35,226.27)]
Figura 5.2 Curva de calibración de estándar interno descartando un punto.

Curva de calibración estándar interno


500 y = 16.479x - 195.48
450 R² = 0.974
400
Área Etanol/Propanol

350
300
250 Área etanol/propanol
200
150 Linear (Área
etanol/propanol)
100
50
0
10 20 30 40 50
Concentración de etanol (%v/v)

Tabla 5.4 Área de las muestras.

Muestra Área de etanol Área de propanol Área


etanol/propanol
1 99.89 0.11 908.09
2 99.60 0.40 249.00
3 99.82 0.18 554.56
4 99.63 0.37 269.27
5 99.81 0.19 525.32
6 99.83 0.17 587.23
7 99.64 0.36 276.78

Cálculo de preparación de estándar (Se preparó un estándar por equipo)

Preparar estándar de 30%v/v de 10 ml

𝑪 𝟏 𝑽𝟏 = 𝑪 𝟐 𝑽𝟐

(𝟑𝟎%𝑽)(𝟏𝟎𝒎𝒍)
𝑽𝟏 = = 𝟑 𝒎𝒍
𝟏𝟎𝟎%𝑽
Cálculos de concentración

𝑦−𝑏
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏 ∴ 𝑥 =
𝑚
𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑒𝑥𝑝. −𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑐𝑜
𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜 = × 100
𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑡𝑒𝑜𝑟𝑖𝑐𝑜
Muestra 1 (Whisky 40%)

908.09 − 195.48
𝑥= = 43.24352206% 𝑣/𝑣
16.479
𝒙 ≈ 𝟒𝟑. 𝟐𝟒%𝒗/𝒗

43.24 − 40.00
𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜 = × 100 = 8.1%
40.00
Muestra 2

249.00 − 195.48
𝑥= = 3.247769889% 𝑣/𝑣
16.479
𝒙 ≈ 𝟑. 𝟐𝟓%𝒗/𝒗

Muestra 3 (Ron 40%)

554.56 − 195.48
𝑥= = 21.79015717% 𝑣/𝑣
16.479
𝒙 ≈ 𝟐𝟏. 𝟖𝟎%𝒗/𝒗

21.80 − 40.00
𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜 = × 100 = 45.5%
40.00
Muestra 4 (Mezcal 24%)

269.27 − 195.48
𝑥= = 4.477820256% 𝑣/𝑣
16.479
𝒙 ≈ 𝟒. 𝟒𝟖%𝒗/𝒗

4.48 − 24.00
𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜 = × 100 = 81.3%
24.00
Muestra 5 (Tequila 35%)

525.32 − 195.48
𝑥= = 20.01577766% 𝑣/𝑣
16.479
𝒙 ≈ 𝟐𝟎. 𝟎𝟐%𝒗/𝒗

20.02 − 35.00
𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜 = × 100 = 42.8%
35.00
Muestra 6 (Ron Bacardy 40%)

587.23 − 195.48
𝑥= = 23.77268038% 𝑣/𝑣
16.479
𝒙 ≈ 𝟐𝟑. 𝟕𝟕%𝒗/𝒗

23.77 − 40.00
𝐸𝑟𝑟𝑜𝑟 𝑟𝑒𝑙𝑎𝑡𝑖𝑣𝑜 = × 100 = 40.5%
40.00
Muestra 7

276.78 − 195.48
𝑥= = 4.933551793% 𝑣/𝑣
16.479
𝒙 ≈ 𝟒. 𝟗𝟑%𝒗/𝒗

Niveles máximos permitidos de ingesta de alcohol que puede consumirse: 55% Alc.
Vol.

Nuestro cuerpo solo puede tolerar 0.05% de alcohol en la sangre.

Efectos tóxicos del consumo de metanol:

En concentraciones elevadas (o menores en comparación con el alcohol etílico) el metanol


puede causar dolor de cabeza, mareo, náuseas, vómitos y muerte (la ingestión de una dosis
entre 20 ml a 150 ml es mortal). La exposición aguda puede causar ceguera o pérdida de la
visión, ya que puede dañar seriamente el nervio óptico (neuropatía óptica). Una exposición
crónica puede ser causa de daños al hígado o de cirrosis.
El envenenamiento por metanol y su asociación con toxicidad severa sobre el sistema
nervioso central y ocular, constituyen un problema de salud. Las características clínicas de
la intoxicación aguda por metanol incluyen acidemia fórmica, acidosis metabólica, toxicidad
visual, coma y en casos extremos la muerte.
El metanol es metabolizado a formaldehído en el hígado, y por oxidaciones sucesivas a través
de una vía dependiente de tetrahidrofurano (THF) se forman ácido fórmico y dióxido de
carbono.
El ácido fórmico es el metabolito responsable de los efectos tóxicos del metanol, el cual
inhibe la citocromo oxidasa, interfiriendo con el transporte de electrones en la cadena
respiratoria. La gravedad de la intoxicación con metanol está causada por los ácidos
generados en su metabolismo a través de la enzima alcohol deshidrogenasa (ADH). Estos
metabolitos se acumulan en el organismo en las 12-24 horas posteriores a la intoxicación.

CONCLUSIONES (Individuales)

(Valeria): Aprendimos como se lleva a cabo una cromatografía de gases, también aplicamos
el método de estándar interno para mejorar la linealidad de nuestra curva de calibración.
Además calculamos la concentración de etanol en diferentes muestras de bebidas alcohólicas
y calculamos el error relativo.

(Luis) Aprendí la técnica de cromatografía de gases los pasos que se deben realizar para
inyectar una muestra en el cromatografo de gases, la técnica que llevamos a cabo fue la de
espacio de cabeza y se aplicó el método de estándar interno para mejorar el coeficiente de
correlación lineal.

(Brayan) Aprendí a analizar el % de etanol en tequila y en diferentes bebidas alcohólicas


mediante la técnica de estándar interno por CG. Identifique los fundamentos teóricos básicos
de la cromatografía de gases. Aprendí a manipular de manera adecuada la técnica de estándar
interno y conocí las partes básicas de un CG.

Porcentaje de participación

Brayan Gaheta…. 100%

Valeria García...100%

Luis Lozano…100%

REFERENCIAS

1. Liñán A., Hinojosa L. and Ruiz E. J. (2014). Manual de Métodos Instrumentales de


Análisis. México, Primera edición. ISBN: 978-607-27-0345-2

2. Skoog D.A., Holler F. J. and Crouch R.S. (2008). Principios de análisis instrumental.
México, Cengage Leraning Editores, Sexta Edición. ISBN: 110-970-686-829-1.

3. Norma Oficial Mexicana NOM-006-SCFI-2012

4. Norma Oficial Mexicana NOM-199-SCFI-2017