PRACTICA N ° 3

TOMA DE MUESTRA, MANEJO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS

BIOLOGICAS

OBJETIVOS:
1. Conocer las distintas indicaciones para la toma adecuada de las
muestras en parasitología.
2. Conocer las distintas procedimientos de laboratorio para hacer
Diagnostico en parasitología.
3. Conocer las técnicas directas y por concentración para hacer
diagnostico en parasitología.

INTRODUCCIÓN
Regularmente en el área de Parasitología, las muestras más analizadas
para demostrar la presencia de parásitos intestinales del hombre son
las heces; sin embrago existen otros parásitos cuya presencia se puede
evidenciar en muestras biológicas como bilis, jugo duodenal, esputo,
secreción, biopsia o frotís perianal, no obstante, estas pruebas se harán
tomando en cuenta los antecedentes clínicos específicos del paciente.
En el manejo de los productos biológicos es donde va a radicar el éxito
o el fracaso de un diagnóstico en enfermedades parasitarias. Es
necesario seguir ciertos lineamientos preestablecidos para cada
producto. Un portaobjetos desengrasado insuficientemente, dará por
resultado un frote sanguíneo defectuoso, con el que difícilmente se
haría un diagnóstico adecuado. Una materia fecal recolectada con
orina, destruye los embriones de Necator.
En suma, las muestras mal recolectadas, inadecuadamente
conservadas y con mucho tiempo después de haber sido obtenidas, no
servirán para observaciones y estudios posteriores, e inclusive pueden
conducir a resultados erróneos o falsos.
A continuación, se hará referencia los diversos aspectos con los cuales
deberán de proceder las muestras a analizar con fines parasitológicos
para obtener resultados reproducibles y de esta manera ayudar
eficazmente al médico en el diagnóstico, pronostico y tratamiento del
paciente.

HECES:
Condiciones del paciente: el paciente deberá de evitar tomar
medicamentos (antiparasitarios, antibióticos, antidiarreicos, laxantes);
no deberá emplear aceites minerales compuestos de bismuto o
magnesio, ya que las gotas o cristales procedentes de ellos pueden
confundirse con algunos parásitos o enmascarar su presencia.
Recolección. La obtención de la materia fecal se debe hacer por
expulsión natural y por medio de una cucharilla rectal o bajalenguas
tome directamente de la cavidad anal un volumen entre 3-6 grs
tamaño de una nuez, en caso de muestras diarreicas aproximadamente
10 ml. Las muestras serán seriadas en tres días consecutivos, salvo
otras indicaciones
Manejo. Se deben utilizar frascos limpios de boca ancha, se evitará la
contaminación con tierra, agua u orina. El cierre de los frascos debe de
ser de manera hermética de manera inmediata para evitar
contaminaciones bacterianas. Trasladar de manera inmediata al
laboratorio (30 minutos como máximo después de cada deposición);
caso contrario se preservará la muestra con formalina al 10%. Los
frascos se guardarán en lugares frescos, pues el calor acelera los
fenómenos de fermentación y con frío se pueden destruir los quistes y
trofozoítos de protozoos; deberán etiquetarse con el nombre de la
persona, edad, sexo, fecha, de preferencia, hora de expulsión de las
heces.

RASPADO PERIANAL
Condiciones del paciente: la muestra deberá ser tomada
preferentemente por la noche o a primera hora de la mañana antes de
que el paciente orine defeque o se bañe (lo ideal es hacerlo antes de
que el paciente se levante de cama).
Recolección: tras el uso de guantes desechables se procederá a tomar
con un objeto con cinta adhesiva.
Se toma el baja lenguas cubierto con cinta adhesiva transparente de
manera que la superficie engomada quede expuesta hacia afuera.
Se coloca al paciente en condición genupectoral donde la región
perianal quedara ampliamente expuesta para realizar varias
aplicaciones con el baja lenguas con la cinta engomada al alrededor de
esta zona, con la finalidad queden engomados en esta zona.
Finalmente se pega la muestra de la cinta adhesiva sobre una de las
caras del portaobjetos con lo recolectado hacia abajo.
Conservación: la muestra deberá de ser trasladado de manera
inmediata al laboratorio, caso contrario se puede conservarse a medio
ambiente.

FLUIDOS Y TEJIDOS:
De acuerdo al cuadro clínico y al diagnóstico presuntivo, las formas
evolutivas de los parásitos intestinales pueden ser investigadas en:
Líquido duodenal. Biopsias de intestino delgado o colon obtenidas
mediante endoscopía. Esputo. Filtrado de materia fecal. La obtención
 de estas muestras, complementarias a los estudios habituales, requiere
la intervención del médico. Se reservan para situaciones clínicas
particulares. En el caso de aspirados de líquido duodenal o esputo,
estos deben colocarse en un tubo de vidrio o plástico transparente,
limpio y seco. La cantidad de la muestra es de 2-5 ml y deberá
transportarse de modo inmediato al laboratorio o, en su defecto,
refrigerarse a 4 ºC por un tiempo no mayor a las 4 horas. Las biopsias
se recogerán en solución fisiológica o en caso de demora al laboratorio
mayor a 24 h en formol al 10%.

TAREA:
1. Describa en el cuadro las condiciones del traslado de muestras para
estudio parasitológico según tipo de muestra y que agentes
parasitarios de importancia medica es posible hallar.

Tipo de muestra Medio preservante Agente parasitario

Heces

Esputo

Secreción biliar

Contenido
duodenal

Frotís perianal

Secreción vaginal

LCR

Sangre

Biopsia de tejidos
2. Indique la importancia del manejo de las muestras biológicas en
parasitología
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3. CONCLUSIONES:
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 PRACTICA N° 4
PROCEDIMIENTOS DEL LABORATORIO PARA EL DIAGNOSTICO
PARASITOLOGICO

OBJETIVOS:
1. 1Analizar y describir los procedimientos frecuentes en
laboratorio usados en el diagnóstico de parasitosis
2. Aprender a realizar la técnica para la preparación de un
coproparasitario

MARCO TEÓRICO:
El análisis de una muestra para estudio parasitológico incluye:

EXAMEN MACROSCÓPICO (FÍSICO) HECES:

La inspección de las heces es importante, ya que puede conducir a un
diagnostico de infeccion parasitaria, ictericia obstructiva, diarrea,
malabsorción, obstrucción rectosigmoidea, disentería o colitis
ulcerosa, o pérdida de sangre en el conducto gastrointestinal.
Debe anotarse:
Consistencia (especificando si son pastosas, blandas, semilíquidas ó
líquidas ó duras) . presencia sangre o moco, y, la presencia de restos
alimenticio
Color: Normalmente las heces son de color pardo de diferente
intensidad, este color se debe a la presencia de urobilina, varía de
acuerdo a la ingestión de alimentos y medicamentos.
Olor: Las sustancias aromáticas provenientes de la desaminación y
descarboxilación del triptófano por las bacterias son las que le dan a la
materia fecal el olor característico.
Aspecto: Hay diferentes aspectos como son: Diarreico, cremoso,
mucoide, granuloso, pastosa, caprino.

Practica: EXAMEN MACROSCÓPICO EN HECES

Materiales:
- Aplicadores de madera.
- Muestra de heces.
- Guantes.
- Suero fisiológico
- Coladera de plástico o malla
Procedimientos:
Observe las características organolépticas de la muestra a analizar y
describa:
Consistencia : _____________________________
Color : _____________________________
Olor : _____________________________
Moco : _____________________________
Sangre : _____________________________

- Agregue suero fisiológico a la muestra (en cantidad suficiente)

para homogenizarla.
- Finalmente, las heces deberán ser cuidadosamente pasadas a
través de un tamiz con la finalidad de hallar helmintos y diga si
hallo o no un helminto. Grafique
_____________________________________________________________
EXAMEN MICROSCOPICO
Examen directo en solución salina fisiológica y en solución de lugol
Este método permite buscar en muestra de heces frescas las formas
evolutivas y móviles de los parásitos.
El propósito de la solución salina fisiológica es reconocer trofozoítos
de protozoos y otros estadios de diagnóstico de helmintos y protozoos
y elementos que aparecen en situaciones anormales. El mejor método
para detectar trofozoítos en una amebiasis invasora por Entamoeba
histolítyca. En solución de lugol colorear en forma temporal trofozoítos
y quistes de protozoos. Inmovilizar larvas.

Practica: EXAMEN MICROSCOPICO EN HECES

Materiales y rectivos:
-Placa portaobjetos
-Placa cubreobjetos
-Microscopio
-Guantes
-Aplicador de madera
-Solución salina isotonica
-Solución de lugol
-Muestra de heces

Procedimiento:
1- En un portaobjeto se colocan, separadamente, una gota de
solución salina y otra de lugol.
2- Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de
heces y se mezcla con la solución salina.

3- Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos

gruesos.

4- Se coloca el cubreobjetos.

5- Se efectúa la misma operación en la gota del lugol y se observa.

6- Observar la lámina al microscopio con objetivos de 10 x y 40x. el

recorrido es en sentido direccional (de arriba a abajo o de
izquierda a derecha)
Resultados de la observación Microscópica.

Nombre del parasito: ____________________________________________________

Estadio desarrollado: ____________________________________________________

A que órgano (s) o sitio (s) invade o parasita____________________

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Describa las características y/o criterios morfológicos:

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Grafique lo observado
EXAMEN DIRECTO CON COLORANTES VITALES
Este método nos permite diferenciar correctamente los diferentes
protozoos basándose en las características morfológicas de cada uno
de ellos observando sus núcleos, endosomas, etc.; mediante la
utilización de colorantes vitales (azul de metileno, rojo congo, eosina,
verde malaquita, safranina).

Practica: EXAMEN DIRECTO CON COLORANTES VITALES

Materiales y rectivos:
-Placa portaobjetos
-Placa cubreobjetos
-Microscopio
-Guantes
-aplicadors de madera
-azul de metileno
-Muestra de heces

Procedimiento:
1- En un portaobjeto se colocan, una gota de azul de metileno.
2- Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de
heces y se realiza una suspensión homogénea del colorante.
3- Se coloca el cubreobjetos. Dejar actuar el colorante por 3
minutos.
4- Observar la lámina al microscopio con objetivos de 10 x y 40x, el
recorrido es en sentido direccional (de arriba a abajo o de
izquierda a derecha).

Resultados de la observación Microscópica.

Nombre del parasito: _____________________________________________________

Estadio desarrollado: ______________________________________________________

Describa las características de lo observado

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_______________________________________________________________________________
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 Grafique lo observado

EXAMEN CON TECNICAS DE CONCENTRACION DE LOS ELEMENTOS

PARASITARIOS.
Estas técnicas tienen como objetivo aumentar la sensibilidad del
estudio parasitológico dado que, con frecuencia, las muestras fecales
contienen escaso número de quistes o huevos de parásitos.
La selección de una o más técnicas dependerán de que especie y fase
de su ciclo evolutivo es necesario diagnosticar. Existen métodos por:

Por centrifugación:
7- Método de Ritchie, método que permite detectar huevos, quiste o
protozoarios.
8- Técnica de Burrows, para diagnóstico de huevos de helmintos,
quistes y en especial trofozoítos de protozoarios.
9- Método Teleman modificado: equivale a la técnica con formol éter o
de Ritchie.

Por flotación:
10- Flotación con sulfato de Zinc, útil para recuperar quiste y
ooquistes de protozoos y huevos de helmintos, con excepción de los
operculados y alta densidad como el A. lumbricoides.
11- Flotación en azúcar: técnica para recuperar ooquistes de
Cryptosporidium.
Practica: EXAMEN CON TECNICAS DE CONCENTRACION DE LOS
ELEMENTOS
Método de concentración por Ritchie:
Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación
mediante centrifugación, con ayuda de formol y Éter para separar y
visualizar los elementos parasitarios.
Una de las ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar
las formas parasitarias, permite el transporte y el almacenamiento de
la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se
necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación
de frecuencia.

Materiales y equipo:
- Centrifuga
- Tubos deensayo conicos de 15 ml
- Gasa corta en cuadros de 15 cm por lado
- Embudos de polietileno
- Vasos de precipitado de 50 ml
- Aplicadores demadera
- Pipetas pasteur con bulbo
- Portaobjetos
- Cubreobjetos
- Solucion salina isotonica
- Solucion de formaldehido al 10 %
- Eter etilico y/o gasolina
- Microscopio

Procedimiento:
1. Con el aplicador de madera coloque en un vasito 1 g de heces y
adicione 10-12 ml de solución salina. Homogenice.
2. Filtre la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo
recogiendo el filtrado en el tubo cónico.
3. Centrifugue 1 min a 2000 r.p.m.
4. Elimine el sobrenadante y re suspenda en solución salina.
5. Repita el paso anterior, dos o tres veces, re suspendiendo el
sedimento en solución salina y homogenizando con un aplicador,
para obtener un sedimento más limpio.
6. Agregue al sedimento 10 ml de formol al 10% , mezcle y deje en
reposo de 10 min.
7. Añada 5 ml de éter y agite vigorosamente 30 segundos.
8. Centrifugue 2 min a 1500 r.p.m.
9. Después de centrifugar, se observan 4 capas en orden
descendente.
A) éter y lípidos en la superficie
B) un tapón de restos fecales
C) formaldehido
D) sedimento en el fondo del tubo conteniendo elementos
parasitarios.
10. Se introduce una pipeta Pasteur, se extrae una gota sedimento y
se coloca en un portaobjetos.
11. Se le adiciona unas gotitas de lugol y se homogeniza y se cubre
con el cubreobjetos
12. Se observa la preparación con objetivos de 10 x y 40 x.

Resultados de la observación Microscópica. En caso de encontrar algún

parásito describa:

a) Nombre del parásito ______________________________________________________

b) Estadio desarrollado _____________________________________________________
c) A que órgano (s) sitio (s) invade o parásita ____________________________
d) Menciona que tipo de técnica se llevó acabo___________________________
e) Ilustre lo observado durante la práctica y haga dibujo detallado del
parasito observado.
CUESTIONARIO
12- ¿Cuál es la diferencia en utilizar el lugol y la solución salina para
un estudio copro parasitológico directo?
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13- ¿Porque es importante utilizar los métodos de concentración

para un estudio de copro parasitológico directo?
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14- ¿Cuál es la diferencia entre un método de diagnóstico directo e

indirecto en parasitología? Mencione 5 tipos de métodos indirectos.
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15- CONCLUSIONES:
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