UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÌA

CITRAR - UNI

RESUMEN
CITRAR es la planta de tratamiento de aguas de
las Urb. De El Ángel y El Milagro, esta se encarga
de purgar la captación del agua de estas
urbanizaciones valiéndose de un sistema muy
elaborado para dicho proceso. CITRAR cuenta con
grandes profesionales para hacer eficiente la
purificación del agua de estas Urb. Además cuenta
con proyectos de investigación para la tesis de
pregrado y postgrado al cual no excluye a
estudiantes o profesionales de otras universidades
o casas de estudio, CITRAR invita a todos sus
interesados en el cuidado, purificación,
descontaminación, etc. De las aguas para su reúso
en un futuro, cabe resaltar que su uso es más
aceptable en el regado de las áreas verdes de la
Universidad Nacional de Ingeniería.
Objetivos
- Promover alternativas de desarrollo ambiental en
beneficio de la comunidad, principalmente en el
manejo de la aguas residuales domesticas de
manera económica, y el aprovechamiento de los
recursos que se originan como producto del proceso
de tratamiento.
- tiene el propósito de propiciar la investigación
científica con tendencia a buscar alternativas,
técnicas de solución de bajo costo a la problemática
del tratamiento, disposición y reúso inadecuado de
las aguas residuales y residuos peligrosos en el
Perú.

Palabras clave:

Reactor UASB, purgar, proliferación, manto de

lodos, descontaminación, tratamiento,
microorganismos, proyectos, Procesos anaeróbicos.

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PROCESO de tratamiento
Descripción de la Planta
CITRAR son las siglas del Centro de Investigación
de Tratamiento de Aguas Residuales y Residuos
Peligrosos de la Universidad Nacional de Ingeniería.
En este Centro se estudian diferentes alternativas
para el tratamiento de las aguas residuales de
diferentes ciudades y regiones del Perú. Aquí se
𝐿
tratan 10 litros por segundo (10 ) provenientes de
𝑠 ángulo de 56°
las localidades del Ángel y el Milagro. El tratamiento
está conformado básicamente por tres partes:
-pre tratamiento
-tratamiento primario
-tratamiento secundario
Paralelamente también tenemos proyectos de
Investigación en los cuales participan diferentes
estudiantes asesorados por diversos profesores de
la Facultad de Ingeniería Ambiental. Asimismo
también tenemos proyectos en los cuales participan
estudiantes de otras universidades nacionales como
también Universidades Internacionales, tales como:
Francia, España, Holanda, Suiza, entre otros.
Proceso de Tratamiento
-Cámara de rejas
Luego de la Captación se hace un pre tratamiento al
agua que es la remoción de los sólidos gruesos,
entre estos tenemos: las bolsas de plástico, residuos
vegetales y los animales muertos. Para esto
utilizamos dos tipos de rejas:
Las rejas gruesas.- tienen 25mm de separación y un
Las rejas finas.-constan de un ángulo de 30° y una
separación de 15mm
En la limpieza se utilizan esos residuos y los
disponemos en un relleno sanitario que se
encuentran en las áreas de esta planta
-Desarenador y medidor de caudales
Luego de la unidad de rejas contamos con dos
desarenadores de flujo horizontal en paralelo; como
su nombre lo indica va a remover arena, gravas u
otros materiales solidos pesados, esto con la
finalidad de evitar el desgaste anormal de la tubería
así como minimizar la frecuencia de limpieza de los
procesos siguientes. Esto lo vamos a lograr con una
velocidad de flujo tal que este en el rango de 0.24 a
036 metros por segundo. Para lograr esta velocidad
tenemos que ver la longitud del desarenador así
como el vertedero con el que contamos. El vertedero
con el que contamos es el vertedero sutro de forma
parabólica, luego tenemos el medidor Palmer y
Bowles. El medidor Palmer y Bowles cuanta con una
cierta formula el cual nos va indicar el caudal que
vamos a tratar, es importante que el caudal que
ingrese no sea mayor a 10 litros por segundo
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Reactor UASB
RAFA
REACTOR UASB
Aquí se inicia el tratamiento biológico, en esta parte
el agua ingresa de manera uniforme hasta la parte
profunda donde entra en contacto con el manto de
lodos. Hay se desarrollan los procesos de hidrólisis,
acidogénesis, acetogénesis, metanogénesis
PRCESO en el reactor UASB
Estos reducen la carga orgánica, la cual es la
principal función del reactor. En la parte superior se
encuentra la cámara de gases donde almacenamos
el biogás, este contiene un 74% de metano; la zona
de sedimentación y efluente es donde sale el agua
tratada, el tiempo de retención es de 8 horas, el
lecho de secados tiene por finalidad el secado del
lodo producido en el reactor UASB; la deshidratación
se hace por medio de percolación y en menor
proporción por evaporación,
DESARENADOR de lodos
Este está compuesto por un sistema filtrante de
grava y arena además cuenta con un sistema de
drenaje hacia el desagüe
Laguna de estabilización(secundaria)
Luego de que el agua residual haya pasado por el
tratamiento primario se implementó un tratamiento
secundario ya que el UASB no logra remover
eficientemente los patógenos y los huevos de
helminto, se cuenta con 2 lagunas facultativas de
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1.50 metros de altura, estas lagunas poseen dos
zonas diferenciadas:
La zona aerobia.- donde hay presencia de oxígeno
disuelto y se encuentra en la parte superior de la
laguna.
La zona anaerobia.- donde no hay presencia de
oxígeno y se encuentra en la zona inferior.
En las lagunas encontramos bacterias y algas que
viven en simbiosis, las bacterias degradan la mayor
parte de la materia orgánica, en este proceso
eliminan el dióxido de carbono que luego es
asimilado por las algas en el proceso de la
fotosíntesis, las algas en presencia de la luz
consumen el dióxido de carbono y liberan el oxígeno
que luego será asimilado a su vez por las bacterias
para continuar con la degradación de la materia
orgánica, podemos decir que la principal fuente de
oxigeno de la laguna es por fotosíntesis pero otra
fuente de oxígeno es el intercambio gaseoso que
existe entre la interface de la laguna y la atmosfera
gracias a la acción del mismo
Laguna de Estabilización(terciaria)
La función que cumplen esta lagunas es la de
remover microrganismos patógenos de tres formas
En la sedimentación los huevos de helminto propio
de su peso sedimentan en el fondo de la laguna.
En la variación del pH las bacterias, los
microorganismos patógenos que están a un pH
relativamente neutro son afectados por los procesos
fotosintéticos y de respiración celular donde se
genera un intercambio gaseoso, genera un pH
básico en el día y acidifican las lagunas en la noche
provocando la eliminación de estos
microorganismos patógenos. En la radiación
ultravioleta se genera las desnaturalización de las
proteínas de las bacterias a un nivel molecular lo que
va a generar es la ruptura de la pared celular de las
bacterias provocando su eliminación
Riego de áreas verdes
El producto final del tratamiento le da al agua
características positivas; entre ellos tenemos al
nitrógeno, fosforo, potasio y otros micronutrientes s
por ello que mediante camiones cisterna de 10
metros cúbicos se riegan las áreas verdes de la
Universidad Nacional de Ingeniería. Estudios han
demostrado repetidamente que cuando los cultivos
y áreas verdes se riegan con agua residuales
tratadas en cantidades moderadas tienen una
productividad mayor y favorece al crecimiento
óptimo de las mismas, cabe resaltar que reduce los
riesgos de contaminación y déficit de agua de las
zonas peruanas de lima
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Estanque de peces
CITRAR UNI cuenta con 3 estanques de sección
trapezoidal
que son alimentados por el efluente de la laguna
terciaria, en estos estanques se da la crianza de
peces de la especie Tilapia del Nilo(oreochromis
níloticus) por sus cualidades como adaptación al
cautiverio, resistencia a las enfermedades y por el
hecho de acostumbrarse a aguas con rango de pH
entre 5 y 11 son los animales acuáticos ideales para
su crianza aquí, esta especie tropical en climas
cálidos puede llegar a medir unos 28 centímetros de
largo y pesar unos 250 gramos en tan solo 7 meses
MANTENIMIENTO
Para que la planta funcione adecuadamente es
necesario que se le dé un mantenimiento constante.
La primera zona a la que se le da mantenimiento es
a la cámara de rejas, a este lugar se le da un
mantenimiento manual, se recolectan los sólidos
atrapados entre las rejas y son acumulados luego
son dispuestos en una zanja en donde finalmente
son tratados para evitar la proliferación de vectores.
La siguiente zona es la del desarenador, aquí lo que
se busca es tratar de remover los sólidos que están
acumulados en la parte inferior, es importante darle
un adecuado mantenimiento a esta unidad porque al
removerse estos solidos se limita el riesgo a que
pueda contaminarse el lodo de la siguiente unidad
que es el reactor UASB, respecto al reactor UASB el
mantenimiento que se le da básicamente consiste
en la purga de lodos, se trata de purgar el lodo
menos activo del reactor y son dispuestos un lecho
de secado, una vez que son dispuestos son secados
durante aproximadamente 6 meses y también el
tiempo entre purga y purga de lodos son 6 meses
también.
La siguiente zona que requiere de mantenimiento
son las lagunas en este caso el mantenimiento que
se les da está referido en dos partes: la primera es
en la superficie de las lagunas, se debe comprobar
de que no haya solidos flotando en la laguna que
usualmente son arrastrados y la otra parte está
referida a lo que es en el fondo de la laguna, los
lodos que por el procesos de tratamiento se forman
en el fondo de la laguna y es aquí en donde
aproximadamente cada 10 años se deben remover
estos lodos; aquí en CITRAR UNI hasta la fecha no
ha sido necesario este tipo de mantenimiento
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Monitoreo
Toda planta de tratamiento necesita un monitoreo
constante para saber si los procesos están
funcionando correctamente, en CITRAR realizamos
este monitoreo 3 veces al día: a las 9:00am, al medio
día y a a las 4 de la tarde. Comenzamos el monitoreo
tomando una muestra en la captación y observando
el caudal que ingresa a la planta, luego tomamos
muestras en la entrada y salida del reactor UASB,
después tomamos muestras en la laguna
secundaria, terciaria y estanque de peces. En estos
puntos también medimos la transparencia
finalizamos el monitoreo realizando los análisis de
pH y temperatura de todas las muestras, turbiedad
de las muestras de captación, entrada y salida del
reactor UASB y solidos sedimentables en las
muestras de captación y entrada del reactor UASB,
también realizamos los análisis de DBO y DQO
coliformes termotolerantes y coliformes totales entre
otros, pero no con la misma frecuencia que los
anteriormente citados
Wetlands
Los wetlands son sistemas de tratamiento de aguas
que solo utilizan microorganismos y especies de
vegetales para el tratamiento, el éxito del proyecto
se ha manifestado en función al agua que ingresa en
este. Para protegerla de diferentes factores como la
interferencia y las infiltraciones es necesario que el
wetland sea impermeabilizado con un material
llamado geomembrana; el crecimiento de la calidad
del agua y su eficiencia aumenta en función
exponencial al tiempo debido a que los
microorganismos y las plantas tienden a
estabilizarse y adaptarse al medio. Los indicadores
de remoción de DBO y DQO están en el orden del
93% y 97% respectivamente además diversas
pruebas de laboratorio bacteriológico demuestran
que este wetland es una eficiencia del 100% para la
remoción de huevos de helmintos y un 99.67% para
la remoción de coliformes termotolerantes
Proyectos
Actualmente en CITRAR se vienen desarrollando
proyectos de investigación entre los cuales tenemos
este proyecto de tesis para pregrado y postgrado,
también uno de los ejemplos que podemos observar
aquí es el desarrollo en los filtros en aguas
ascendentes como en descendentes y lo cual refiere
a la remoción de microorganismos patógenos entre
los principales a remover son los huevos de
helmintos. En CITRAR también se viene
desarrollando lo que son un sistema de esponjas
más conocido como el DHS que no es otra cosa más
que una comparación de un filtro percolador, la
diferencia puntual es que el filtro percolador
aprovecha la grava como medio en cambio el
sistema DHS utiliza esponjas el cual tenemos como
beneficio que tenemos mayor área de contacto y
mayor área de producción de los microorganismos o
la famosa llamada biopelicula el cual nos ayuda en
el tratamiento de microorganismos patógenos y
otros microorganismos que podamos encontrar. En
CITRAR están también en el desarrollo de mayor
investigación en cuanto a lo que son los humedales,
(humedales superficiales) se quiere hacer una
comparación de humedales con totora, sin torora y
a la vez también en una tecnología que es arenas
intermitentes, se está viendo la mayor eficiencia de
las 3, se quiere ver lo que es la remoción de
microorganismos y todo eso
El Reactor anaerobio de mantos de lodos de flujo
ascendente es una tecnología en el tratamiento de
las aguas residuales, es una tecnología que trabaja
con altas cargas orgánicas volumétricas además de
tener como subproducto el biogás, para mejorar la
eficiencia de estos reactores es necesario la
correcta elección del tiempo de retención hidráulico,
es por ello que la siguiente investigación viene
evaluando la remoción de los parámetros de DBO,
DQO, solidos suspendidos volátiles y solidos
suspendidos totales además de la producción de
biogás, asimismo se lleva acabo una serie de
monitoreos diarios en los cuales se evalúan los
parámetros de pH, temperatura y turbidez
El proyecto de la evaluación de Reactor anaerobio
de mantos de lodos de flujo ascendente mediante la
actividad metanogénica específica, el objetivo es
medir el nivel de operación de reactor, consiste en
coger muestras de lodos a diferentes alturas y
almacenarlos en pequeños reactores de 250ml los
cuales van a permitir almacenarlos de manera
anaerobia, luego vamos a realizar mediante un
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sistema de medición calcular los volúmenes de
metano producido, seria nuestro primer parámetro,
el segundo parámetro seria la concentración de los
lodos que va a ser calculado mediante los sólidos
suspendidos volátiles por un periodo de tiempo con
estos parámetros vamos a permitir realizar gráficas,
estas graficas nos van a permitir conocer los
comportamientos que vamos a utilizar en nuestro
proyecto, siguiente vamos a tomar decisiones,
cambios, variaciones en el futuro y durante este
lapso de evaluación
Los reactores UASB tienen ciertas ventajas en
comparación con los sistemas de tratamiento
aerobio son instalaciones compactas que demandan
poco espacio, tienen un bajo consumo de energía
para su funcionamiento, se puede obtener biogás
para aprovecharlo como combustible y sobre todo lo
más importante los bajos costos en inversión,
operación y mantenimiento. En esta investigación se
estudia la eliminación de microrganismos patógenos
y la producción de biogás bajo diferentes
condiciones de operación, para este fin se cuenta
con un reservorio de almacenamiento que contiene
elevadas concentraciones de patógenos, luego
desde este reservorio se distribuye uniformemente
los caudales hacia 2 reactores UASB a escala de
laboratorio que contienen microorganismos
anaerobios donde se realiza la conversión de la
materia orgánica en biogás, este biogás puede ser
observado dentro del manto de lodos como
pequeñas burbujas, el biogás al final del proceso es
recolectado en 2 bolsas para su posterior análisis,
también es importante decir que las bondades de los
reactores UASB es que puede remover con gran
eficiencia las grandes turbiedades, esto se puede
evidenciar en los resultados que se muestran a la
entrada y a la salida del mismo
INFORMACION COMPLEMENTARIA
Demanda biológica de oxígeno
La demanda bioquímica de oxígeno (DBO) es un
parámetro que mide la cantidad de materia
susceptible de ser consumida u oxidada por medios
biológicos que contiene una muestra
líquida, disuelta o en suspensión. Se utiliza para
medir el grado de contaminación; normalmente se
mide transcurridos cinco días de reacción (DBO5) y
se expresa en miligramos de oxígeno
diatómico por litro (mgO2/l). El método de ensayo se
basa en medir el oxígeno consumido por una
población microbiana en condiciones en las que se
ha inhibido los procesos fotosintéticos de
producción de oxígeno en condiciones que
favorecen el desarrollo de los microorganismos. La
curva de consumo de oxígeno suele ser al principio
débil y después se eleva rápidamente hasta un
máximo sostenido, bajo la acción de la fase
logarítmica de crecimiento de los microorganismos.
Es un método aplicable en aguas continentales (ríos,
lagos o acuíferos), aguas negras, aguas pluviales o
agua de cualquier otra procedencia que pueda
contener una cantidad apreciable de materia
orgánica. Este ensayo es muy útil para la
apreciación del funcionamiento de las estaciones
depuradoras. No es aplicable, sin embargo, a
las aguas potables, ya que al tener un contenido tan
bajo de materia oxidable la precisión del método no
sería adecuada. En este caso se utiliza el método
de oxidabilidad con permanganato potásico.
Según McKinney (1962), «El test de la DBO fue
propuesto por el hecho de que en Inglaterra ningún
curso de agua demora más de cinco días en
desaguar (desde nacimiento a desembocadura). Así
la DBO es la demanda máxima de oxígeno que
podrá ser necesario para un curso de agua inglés».
El método pretende medir, en principio,
exclusivamente la concentración de contaminantes
orgánicos. Sin embargo, la oxidación de la materia
orgánica no es la única causa del fenómeno, sino
que también intervienen la oxidación de nitritos y de
las sales amoniacales, susceptibles de ser también
oxidadas por las bacterias en disolución. Para evitar
este hecho se añade N-aliltiourea como inhibidor.
Además, influyen las necesidades de oxígeno
originadas por los fenómenos de asimilación y de
formación de nuevas células.
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También se producen variaciones significativas
según las especies de gérmenes, concentración de
estos y su edad, presencia de bacterias nitrificantes
y de protozoos consumidores propios de oxígeno
que se nutren de las bacterias, entre otras causas.
Es por todo esto que este test ha sido
constantemente objeto de discusión: sus dificultades
de aplicación, interpretación de los resultados y
reproductibilidad se deben al carácter biológico del
método.
Procedimiento de ensayo (método por dilución)
El objeto del ensayo consiste en medir la cantidad
de oxígeno diatómico disuelto en un medio de
incubación al comienzo y al final de un período de
cinco días, durante el cual la muestra se mantiene al
abrigo del aire, a 20 °C y en la oscuridad, para inhibir
la eventual formación de oxígeno por
las algas mediante fotosíntesis. Las condiciones de
la medida, en las que el agua a estudiar está en
equilibrio con una atmósfera cuya presión y
concentración en oxígeno permanecen constantes,
se acercan así a las condiciones reales de la
autodepuración de un agua residual.
Para su determinación se dispone de métodos
de dilución (el que se explica a continuación) y
métodos instrumentales que se derivan de métodos
respirométricos que permiten seguir
automáticamente la evolución de la DBO en el curso
de oxidación de las materias orgánicas contenidas
en el agua.
Reactivos
 Agua destilada
 Agua residual urbana reciente
 Solución fosfatos:
 Monohidrógenofosfato de sodio:
8,493 g
 Dihidrogenofosfato de potasio:
2,785 g
 Agua destilada hasta enrase a 1000
ml
Homogeneizar perfectamente la solución:
 Solución de sulfato de magnesio de 20 g/l
 Solución de cloruro de calcio de 25 g/l
 Solución de cloruro de hierro de 1,5 g/l
 Solución de cloruro de amonio de 2 g/l
Preparación del agua de dilución. Se prepara a partir
de agua destilada introduciendo en un recipiente:
 Solución de fosfato…………………………5
ml
 Solución de sulfato magnésico…………1 ml
 Solución de cloruro cálcico………………1
ml
 Solución de cloruro de hierro…………1 ml
 Solución de cloruro amónico……………1 ml
 Agua destilada hasta enrase a 1000 ml
Esta solución se mantiene a 20 °C y debe de
airearse procurando evitar toda contaminación por
metales, materias orgánicas, oxidantes o
reductores. Se detendrá la aireación cuando la
solución contenga 8 mg/l de oxígeno disuelto. Dejar
en reposo durante 12 horas manteniendo el
recipiente destapado. Añadir 5 ml de agua residual
urbana por litro de esta solución. (Esta agua de
dilución, deberá utilizarse dentro de las 24 horas
siguientes a su preparación).
Procedimiento
La técnica utilizada de medición es la siguiente: Se
introduce un volumen definido de la muestra líquida
en un recipiente opaco que evite que la luz pueda
introducirse en su interior (se eliminarán de esta
forma las posibles
reacciones fotosintéticas generadoras de gases), se
introduce un agitador magnético en su interior, y se
tapa la boca de la botella con un capuchón de goma
en el que se introducen algunas lentejas de sosa. Se
cierra la botella con un sensor piezoeléctrico, y se
introduce en una estufa refrigerada a 20 °C.
Las bacterias irán oxidando la materia orgánica del
interior de la disolución, con el consecuente gasto de
oxígeno del interior de la botella. Estas bacterias,
debido al proceso de respiración, emitirán dióxido de
carbono que será absorbido por las lentejas de sosa.
Este proceso provoca una disminución interior de la
presión atmosférica, que será medida con el sensor
piezoelétrico.
En detalle:
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1. Introducir un volumen conocido de agua a
analizar en un matraz aforado y completar
con el agua de dilución.
2. Verificar que el pH se encuentra entre 6-8. (
En caso contrario, preparar una nueva
dilución llevando el pH a un valor próximo a
7 y después ajustar el volumen)
3. Llenar completamente un frasco con esta
solución y taparlo sin que entren burbujas de
aire.
4. Preparar una serie de diluciones sucesivas.
5. Conservar los frascos a 20 °C ± 1 °C y en la
oscuridad.
6. Medir el oxígeno disuelto subsistente al
cabo de 5 días.
7. Practicar un ensayo testigo determinando el
oxígeno disuelto en el agua de dilución y
tratar dos matraces llenos de esta agua
como se indicó anteriormente.
8. Determinar el oxígeno disuelto.
En el curso del ensayo testigo, el consumo de
oxígeno debe situarse entre 0,5 y 1,5 g/l. En el caso
contrario, la inoulación con el agua destilada no es
conveniente y se necesitará modificar la
preparación. Para la determinación de oxígeno
disuelto (OD) se puede emplear cualquiera de los
dos métodos establecidos en la norma mexicana
NMX-AA-012-SCFI.
Expresión de los resultados
DBO= F (To-T5)-(F-1)(D0-D5)
Donde:
D0 = Contenido de oxígeno (mg/l) del agua de
dilución al principio del ensayo.
D5 = Contenido medio de oxígeno (mg/l) del agua
de dilución al cabo de 5 días de incubación.
T0 = Contenido de oxígeno (mg/l) de una de las
diluciones de la muestra al principio del ensayo.
T5 = Contenido de oxígeno (mg/l) de una de las
diluciones de la muestra al cabo de 5 días de
incubación.
F = Factor de dilución.
Valores por encima de 30 mgO2/litro pueden ser
indicativos de contaminación en aguas
continentales, aunque las aguas residuales pueden
alcanzar una DBO de miles de mgO2/litro.
DEMANDA BIOQUÍMICA DE OXÍGENO
1. SUMARIO Y APLICACIONES
1. La demanda bioquímica de oxígeno (DBO)
es una prueba usada para la determinación de los
requerimientos de oxígeno para la degradación
bioquímica de la materia orgánica en las aguas
municipales, industriales y en general residuales; su
aplicación permite calcular los efectos de las
descargas de los efluentes domésticos e industriales
sobre la calidad de las aguas de los cuerpos
receptores. Los datos de la prueba de la DBO se
utilizan en ingeniería para diseñar las plantas de
tratamiento de aguas residuales.
2. La prueba de la DBO es un procedimiento
experimental, tipo bioensayo, que mide el oxígeno
requerido por los organismos en sus procesos
metabólicos al consumir la materia orgánica
presente en las aguas residuales o naturales. Las
condiciones estándar del ensayo incluyen
incubación en la oscuridad a 20ºC por un tiempo
determinado, generalmente cinco días. Las
condiciones naturales de temperatura, población
biológica, movimiento del agua, luz solar y la
concentración de oxígeno no pueden ser
reproducidas en el laboratorio. Los resultados
obtenidos deben tomar en cuenta los factores
anteriores para lograr una adecuada interpretación.
3. Las muestras de agua residual o una
dilución conveniente de las mismas, se incuban por
cinco días a 20ºC en la oscuridad. La disminución de
la concentración de oxígeno disuelto (OD), medida
por el método Winkler o una modificación del mismo,
durante el periodo de incubación, produce una
medida de la DBO.
2. LIMITACIONES E INTERFERENCIAS
1. Existen numerosos factores que afectan la
prueba de la DBO, entre ellos la relación de la
materia orgánica soluble a la materia orgánica
suspendida, los sólidos sedimentables, los flotables,
la presencia de hierro en su forma oxidada o
reducida, la presencia de compuestos azufrados y
las aguas no bien mezcladas. Al momento no existe
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una forma de corregir o ajustar los efectos de estos
factores.
2. DBO carbonácea contra nitrogenácea. La
oxidación de las formas reducidas del nitrógeno
como amoniaco y nitrógeno orgánico, mediada por
los microorganismos, ejercen una demanda
nitrogenácea, que ha sido considerada como una
interferencia en la prueba; sin embargo, esta puede
ser eliminada con la adición de inhibidores químicos.
Cuando se inhiba la demanda nitrogenácea de
oxígeno, reportar los resultados como demanda
bioquímica de oxígeno carbonácea (DBOC5);
cuando no se inhiba, reportar los resultados como
DBO5.
1. Requerimientos de dilución. Si el agua de
dilución es de baja calidad, su DBO aparecerá como
DBO de la muestra, efecto que será amplificado por
el factor de dilución, y el resultado tendrá una
desviación positiva. El método de análisis debe
incluir agua de dilución de verificación y agua de
dilución como blanco para establecer su calidad,
mediante la medición del consumo de oxígeno con
una mezcla orgánica conocida, generalmente
glucosa y ácido glutámico. La fuente del agua de
dilución puede ser: destilada a partir del agua de
grifo, o agua libre de sustancias orgánicas
biodegradables o bioinhibitorias tales como cloro o
metales pesados. El agua destilada puede contener
amoniaco o compuestos orgánicos volátiles; el agua
desionizada también puede estar contaminada con
compuestos orgánicos solubles lixiviados del lecho
de la resina; el uso de destiladores con conductos o
accesorios de cobre en las líneas de agua destilada
pueden producir agua con cantidades excesivas de
cobre, que actúa como biocida.
3. TOMA Y PRESERVACIÓN DE MUESTRAS
1. Las muestras para determinación de la DBO
se deben analizar con prontitud; si no es posible,
refrigerarlas a una temperatura cercana al punto de
congelación, ya que se pueden degradar durante el
almacenamiento, dando como resultado valores
bajos. Sin embargo, es necesario mantenerlas el
mínimo tiempo posible en almacenamiento, incluso
si se llevan a bajas temperaturas. Antes del análisis
calentarlas a 20ºC.
1. Muestras simples. Si el análisis se
emprende en el intervalo de 2 h después de la reco-
lección no es necesario refrigerarlas; de lo contrario,
guardar la muestra a 4ºC o menos; reportar junto
con los resultados el tiempo y la temperatura de
almacenamiento. Bajo ningún concepto iniciar el
análisis después de 24 h de haber tomado la
muestra; las muestras empleadas en la evaluación
de las tasas retributivas o en otros instrumentos
normativos, deben ser analizadas antes de que
transcurran 6 h a partir del momento de la toma.
2. Muestras compuestas. Mantener las
muestras a 4ºC o menos durante el proceso de
composición, que se debe limitar a 24 h. Aplicar los
mismos criterios que para las muestras sencillas,
contando el tiempo transcurrido desde el final del
período de composición. Especificar el tiempo y las
condiciones de almacenamiento como parte de los
resultados.
4. APARATOS
1. Botellas de incubación para la DBO, de 250
a 300 mL de capacidad. Lavarlas con detergente,
enjuagarlas varias veces, y escurrirlas antes de su
uso. Para evitar la entrada de aire en la botella de
dilución durante la incubación, se debe utilizar un
sello de agua, que se puede lograr
satisfactoriamente invirtiendo las botellas en un
baño de agua o adicionando agua en el reborde
cóncavo de la boca de las botellas especiales para
la DBO. Colocar una copa de papel o plástica o un
capuchón metálico sobre la boca de la botella para
reducir la evaporación del sello de agua durante la
incubación.
2. Incubadora de aire o baño de agua,
controlada termostáticamente a 20 1ºC; excluir
cualquier fuente luminosa para eliminar el proceso
de producción fotosintética de OD.
5. REACTIVOS
1. Solución tampón de fosfato: Disolver 8,5 g
de KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4, 33,4 g de
Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g de NH4Cl en
aproximadamente 500 mL de agua destilada y diluir
a 1 L. El pH debe ser 7,2 sin posteriores ajustes. Si
se presenta alguna señal de crecimiento biológico,
descartar este o cualquiera de los otros reactivos.
2. Solución de sulfato de magnesio: Disolver
22,5 g de MgSO4.7H2O en agua destilada y diluir a
1 L.
3. Solución de cloruro de calcio: Disolver 27,5
g de CaCl2 en agua destilada y diluir a 1L.
4. Solución de cloruro férrico: Disolver 0,25g
de FeCl3.6H2O en agua destilada, diluir a 1L
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5. Soluciones ácida y alcalina, 1 N, para
neutralización de muestras cáusticas o ácidas.
1) Acido. A un volumen apropiado de agua destilada
agregar muy lentamente y mientras se agita, 28 mL
de ácido sulfúrico concentrado; diluir a 1 L.
2) Alcali. Disolver 40 g de hidróxido de sodio en agua
destilada y diluir a 1 L.
6. Solución de sulfito de sodio: Disolver 1,575
g de Na2SO3 en 1000 mL de agua destilada. Esta
solución no es estable y se debe preparar
diariamente.
7. Inhibidor de nitrificación: 2-cloro-6-
(triclorometil)piridina.
8. Solución de glucosa-ácido glutámico: Secar
a 103ºC por 1 h glucosa y ácido glutámico grado
reactivo. Disolver 150 mg de glucosa y 150 mg de
ácido glutámico en agua destilada y diluir a 1 L.
Preparar inmediatamente antes de su uso.
9. Solución de cloruro de amonio: Disolver 1,15
g de NH4Cl en 500 mL de agua destilada, ajustar el
pH a 7,2 con solución de NaOH, y diluir a 1 L. La
solución contiene 0,3 mg de N/mL.
6. PROCEDIMIENTO
1. Preparación del agua de dilución. Colocar la
cantidad de agua necesaria en una botella y agregar
por cada litro, 1 mL de cada una de las siguientes
soluciones: tampón fosfato, MgSO4, CaCl2, y
FeCl3. El agua de dilución se puede inocular como
se describe en 6.4; chequear y guardar como se
describe en 6.2 y 6.3, de tal manera que siempre se
tenga disponible.
Llevar el agua de dilución a una temperatura de
20ºC antes de su uso; saturarla con OD por
agitación en una botella parcialmente llena, por
burbujeo de aire filtrado libre de materia orgánica, o
guardarla en botellas lo suficientemente grandes
con tapón de algodón, para permitir su saturación.
Emplear material de vidrio bien limpio para proteger
la calidad del agua.
Verificación del agua de dilución. Aplicar este
procedimiento como una forma de verificación
básica de la calidad del agua de dilución.
Si el agua consume más de 0,2 mg de oxígeno/L se
debe mejorar su purificación o emplear agua de otra
fuente; si se usa el procedimiento de inhibición de la
nitrificación, el agua de dilución inolculada, se debe
guardar en un sitio oscuro a temperatura ambiente
hasta que el consumo de oxígeno se reduzca lo
suficiente para cumplir el criterio de verificación.
Confirmar la calidad del agua de dilución
almacenada que está en uso, pero no agregar
semilla para mejorar su calidad. El almacenamiento
no es recomendable cuando se va a determinar la
DBO sin inhibición de nitrificación, ya que los
organismos nitrificantes se pueden desarrollar en
este período. Revisar el agua de dilución para
determinar la concentración de amonio, y si es
suficiente después del almacenamiento; de lo
contrario, agregar solución de cloruro de amonio
para asegurar un total de 0,45 mg de amonio como
nitrógeno/L. Si el agua de dilución no ha sido
almacenada para mejorar su calidad, agregar la
cantidad suficiente de semilla para producir un
consumo de OD de 0,05 a 0,1 mg/L en cinco días a
20ºC. Llenar una botella de DBO con agua de
dilución, determinar el OD inicial, incubar a 20ºC por
5 días y determinar el OD final como se describe en
6.8 y 6.10. El OD consumido en este lapso no debe
ser mayor de 0,2 mg/L y preferiblemente menor de
0,1 mg/L.
Chequeo con glucosa-ácido glutámico. Debido a
que la prueba de la DBO es un bioensayo, sus
resultados pueden estar muy influenciados por la
presencia de sustancias tóxicas o por el uso de
semillas de mala calidad. Muchas veces el agua
destilada puede estar contaminada con cobre, o
algunos inóculos de aguas residuales pueden ser
relativamente inactivos, y si se emplean tales aguas
o inóculos siempre se van a obtener bajos
resultados. Controlar periódicamente la calidad del
agua de dilución, la efectividad de las semillas y la
técnica analítica, por mediciones de la DBO para
compuestos orgánicos puros y muestras con
adiciones conocidas. En general, para
determinaciones de la DBO que no requieran una
semilla adaptada, usar como solución estándar de
chequeo una mezcla de 150 mg de glucosa/L y 150
mg de ácido glutámico/L. La glucosa tiene una
velocidad de oxidación excepcionalmente alta y
variable, pero cuando es empleada con ácido
glutámico se estabiliza, y es similar a la obtenida con
aguas residuales municipales. Si un agua residual
contiene un constituyente mayoritario identificable,
que contribuye a la DBO, usar este compuesto en
remplazo de la mezcla de glucosa-ácido glutámico.
Determinar la DBO5 a 20ºC de una dilución al 2% de
la solución estándar de chequeo glucosa-ácido
glutámico mediante las técnicas descritas en los
11 | P á g i n a
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numerales 6.4 a 6.10. Evaluar los datos como se
describe en la sección de Precisión.
Inoculación.
1. Origen de las semillas o inóculo. Es
necesario que en la muestra esté presente una
población de microorganismos capaces de oxidar la
materia orgánica biodegradable. Las aguas
residuales domésticas no cloradas, los efluentes no
desinfectados de plantas de tratamiento biológico, y
las aguas superficiales que reciben descargas
residuales contienen poblaciones satisfactorias de
microorganismos. Algunas muestras no contienen
una población microbiana suficiente (por ejemplo,
efluentes industriales sin tratamiento, aguas
desinfectadas, efluentes con elevada temperatura o
con valores extremos de pH), por tanto deben
inocularse por adición de una población adecuada
de microorganismos. La semilla o inóculo preferible
es el efluente de un sistema de tratamiento
biológico, en su defecto, el sobrenadante de aguas
residuales domésticas después de dejarlas decantar
a temperatura ambiente por lo menos 1 h pero no
más de 36 h. Cuando se emplee el efluente de un
proceso de tratamiento biológico, se recomienda
aplicar el procedimiento de inhibición de la
nitrificación.
Algunas muestras pueden contener materiales no
degradables a las tasas normales de trabajo de los
microorganismos; inocular tales muestras con una
población microbiana adaptada, obtenida a partir de
efluentes sin desinfectar de un proceso de
tratamiento biológico de aguas residuales. También
se puede obtener la semilla en el cuerpo de agua
receptor del vertimiento, preferiblemente de 3 a 8
Km después del punto de descarga. Cuando no se
disponga de ninguna de dichas fuentes del inóculo,
desarrollar en el laboratorio una semilla adaptada,
por aireamiento continuo de una muestra clarificada
de agua residual doméstica y adición de pequeños
incrementos diarios de aguas residuales. Para
obtener la población microbiana inicial, usar una
suspensión de suelo, un lodo activado, o una
preparación a partir de semilla comercial. Ensayar el
rendimiento de la semilla haciendo pruebas de la
DBO en las muestras hasta obtener una población
satisfactoria. Si los valores de la DBO aumentan con
el tiempo hasta un valor constante, se consideran
como un indicio de la adaptación sucesiva de la
semilla o inóculo.
1. Control de inóculos. Determinar la DBO del
material inoculante como si se tratara de una
muestra. De este valor y del conocimiento del dato
del agua de dilución determinar el OD consumido.
Hacer las diluciones necesarias hasta obtener una
disminución de por lo menos el 50% del OD. La
gráfica de la disminución de OD expresada en
miligramos por litro contra los mililitros de inóculo,
origina una recta cuya pendiente debe interpretarse
como la disminución de OD por mililitro de inóculo.
La intercepción de la recta con el eje de los valores
de reducción del OD representa la disminución del
oxígeno provocada por el agua de dilución, valor que
debe ser inferior a 0,1 mg/L (ver 6.8). Con el objeto
de corregir el valor de OD consumido por una
muestra, se debe restar a éste el consumido por el
inóculo. El consumo de OD del agua de dilución más
el inóculo puede estar en el intervalo de 0,6 a 1,0
mg/L. En el numeral 6.6 se describen las técnicas
para adición de material inoculante al agua de
dilución, para dos métodos de dilución de muestras.
Blanco de agua de dilución. Con el objeto de verificar
la calidad del agua de dilución sin inóculo y la
limpieza de los materiales, usar una porción de la
misma y llevarla junto con las muestras a través de
todo el procedimiento. El OD consumido por el agua
de dilución debe ser menor de 0,2 mg/L y
preferiblemente no mayor de 0,1 mg/L.
Pretratamiento de la muestra.
1. Muestras con alcalinidad cáustica o acidez.
Neutralizar las muestras a pH entre 6,5 y 7,5 con una
solución de ácido sulfúrico (H2SO4) o hidróxido de
sodio (NaOH) de concentración tal que la cantidad
de reactivo no diluya la muestra en más de 0,5%. La
menor dilución de muestra no debe afectar el pH
dado por el agua de dilución inoculada.
2. Muestras con compuestos residuales de
cloro. Evitar las muestras que contengan cloro
residual; tomarlas antes del proceso de cloración; si
la muestra ha sido clorada pero no presenta cloro
residual detectable, inocular el agua de dilución; si
hay cloro residual, declorar la muestra e inocular el
agua de dilución (ver 6.7). No ensayar las muestras
que han sido decloradas, sin inocular el agua de
dilución. En algunas muestras, el cloro se elimina si
se dejan 1 o 2 h a la luz, lo cual puede suceder
durante el transporte y manejo de la muestra. Para
muestras en las cuales el cloro residual no se disipa
en un tiempo razonablemente corto, eliminar el cloro
residual por adición de solución de Na2SO3. El
volumen de Na2SO3 requerido se determina en una
porción de 100 a 1 000 mL de la muestra,
previamente neutralizada, por la adición de 10 mL
12 | P á g i n a
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de ácido acético 1 + 1 o H2SO4 1 + 50, 10 mL de
solución de yoduro de potasio (10 g KI/100 mL), por
cada 1000 mL de muestra; el volumen resultante se
titula con solución de Na2SO3 hasta su punto final,
determinado por el indicador almidón-yodo. Se
agrega a la muestra neutralizada, el volumen relativo
de solución de Na2SO3 determinado, se mezcla
bien y se deja en reposo cerca de 10 a 20 minutos.
Ensayar la muestra para determinar el cloro residual.
(NOTA: Un exceso de Na2SO3 en la muestra,
consume oxígeno y reacciona con ciertas
cloraminas orgánicas que pueden estar presentes
en muestras tratadas).
3. Muestras contaminadas con sustancias
tóxicas. Las muestras de aguas residuales
provenientes de industrias, por ejemplo
electroquímicas, contienen metales tóxicos. Estas
muestras requieren de estudios especiales y deben
ser tratadas antes de medirles la DBO.
4. Muestras sobresaturadas con OD. En
muestras procedentes de aguas muy frías o de
aguas en que la producción primaria es alta, los
valores de OD a 20ºC suelen ser mayores de 9 mg
de OD/L. Para prevenir pérdidas de oxígeno durante
la incubación, llevar la temperatura de la muestra a
20ºC en una botella parcialmente llena, mientras se
sacude fuertemente o se burbujea aire comprimido
filtrado y limpio.
5. Ajuste de temperatura de la muestra. Llevar
las muestras a 20 1ºC antes de hacer las
diluciones.
6. Inhibición de la nitrificación. A las muestras
contenidas en botellas de 300 mL se agregan 3 mg
de 2-cloro-6-(triclorometil)-piridina (TCMP) o se
puede agregar directamente al agua de dilución para
lograr una concentración final de aproximadamente
10 mg de TCMP/L. (NOTA: Es posible que la TCMP
se disuelva lentamente y permanezca flotando en la
superficie de la muestra; algunas formulaciones
comerciales se disuelven más fácilmente pero no
son 100% puras, por lo que se debe ajustar la
dosificación). Las muestras que requieren el
procedimiento de inhibición de la nitrificación
incluyen: efluentes tratados biológicamente,
muestras inoculadas con efluentes tratados
biológicamente, y aguas de río, pero no se limitan
necesariamente a estas. En el reporte de los
resultados registrar el uso del procedimiento de
inhibición de la nitrificación.
Técnica de dilución. Los resultados más acertados
se obtienen con diluciones de muestra en las que los
valores de OD residual son por lo menos 1 mg/L y
un consumo de OD de por lo menos 2 mg/L después
de los 5 días de incubación. La experiencia con
muestras de diferente origen permiten optimizar el
número de diluciones requeridas; la correlación de
la DQO con la DBO puede constituir una guía
efectiva para la selección de las diluciones más
convenientes. Si no se dispone de esta metodología,
se pueden emplear las diluciones de 0,0 a 1,0 %
para efluentes líquidos industriales, 1 a 5 % para
efluentes industriales no tratados y decantados, 5 a
25 % para efluentes con tratamiento secundario o
biológico, y 25 a 100 % para corrientes
contaminadas.
Las diluciones se efectúan en probetas y luego se
transfieren a las botellas de DBO, o se preparan
directamente en las botellas. Cualquiera de los dos
métodos de dilución puede combinarse con
cualquier técnica para medición de OD. El número
de botellas a ser preparadas para cada dilución
depende de la técnica de análisis del OD y del
número de réplicas deseadas. Cuando sea
necesaria la inoculación, agregar la semilla
directamente al agua de dilución o a cada probeta o
botella de DBO antes de la dilución. La inoculación
en las probetas evita la disminución de la relación
semilla:muestra cuando se hace un incremento en
las diluciones.
1. Diluciones preparadas en probeta. Si se
emplea el método modificado de la azida para la
medición de OD, transvasar cuidadosamente el
agua de dilución -inoculada si es necesario-, hasta
llenar la mitad de una probeta de 1 a 2 L de
capacidad por medio de sifón para evitar la entrada
de aire. Agregar la cantidad deseada de muestra
cuidadosamente mezclada y diluir al nivel apropiado
con agua de dilución; mezclar bien con una varilla
tipo émbolo y evitar la entrada de aire. Trasvasar la
dilución a dos botellas de DBO por medio de sifón.
Determinar el OD inicial en una de estas botellas.
Tapar herméticamente la segunda botella, con sello
de agua, e incubar por 5 d a 20ºC. Si se determina
el OD por el método de electrodo de membrana,
transvasar la mezcla de dilución a una botella DBO
por medio de sifón. Determinar el OD inicial en esta
botella, descartar el residuo y llenar nuevamente la
botella con la muestra diluida. Tapar
herméticamente la botella, con sello de agua, e
incubar por 5 d a 20ºC.
13 | P á g i n a
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2. Diluciones preparadas directamente en
botellas DBO. Con una pipeta de boca ancha
agregar el volumen de muestra deseado a diferentes
botellas para DBO de volumen conocido. Agregar, a
cada botella o al agua de dilución, las cantidades
apropiadas de semilla; llenar las botellas con
suficiente agua de dilución, inoculada si es
necesario, de tal manera que al insertar el tapón se
desplace todo el aire, sin dejar burbujas. Para
diluciones mayores de 1:100 hacer una dilución
preliminar en una probeta antes de hacer la dilución
final. Preparar dos botellas de cada dilución cuando
se empleen los métodos yodométricos de volumetría
para la medición del OD; determinar el OD inicial en
una de las dos botellas, tapar herméticamente la
segunda botella, con sello de agua, e incubar por 5
d a 20ºC. Si se emplea el método de electrodo de
membrana para la medición de OD, preparar
solamente una botella de DBO por cada dilución;
determinar el OD inicial en esta botella y remplazar
cualquier contenido desplazado con agua de
dilución para llenar la botella. Tapar
herméticamente, con sello de agua, e incubar por 5
d a 20ºC. Enjuagar el electrodo de OD entre
determinaciones para prevenir la contaminación
cruzada de las muestras.
Determinación del OD inicial. Si la muestra contiene
sustancias que reaccionan fácilmente con el OD, es
necesario determinar el OD antes de llenar la botella
de DBO con la muestra diluida. Si el consumo de OD
inicial es insignificante, el período entre la
preparación de la dilución y la medida del OD inicial
no es crítico. Emplear el método modificado de la
azida (método yodométrico) o el método de
electrodo de membrana, para determinar el OD
inicial en todas las muestras diluidas, testigos y, si
se considera necesario, en los controles de semilla.
Incubación. Incubar a 20 1ºC las botellas que
contienen las diluciones, los controles de semilla, los
blancos de agua de dilución y los patrones de
glucosa-ácido glutámico. Hacer un sello de agua
como se describe en 6.7.
Determinación del OD final. Determinar el OD en las
muestras diluidas, los blancos y los patrones
después de 5 días de incubación como se describe
en 6.8.
7. CÁLCULOS
1. Cuando el agua de dilución no ha sido
inoculada:
DBO5, mg/lt = (D1-D2)/P
2. Cuando el agua de dilución ha sido
inoculada:
DB)5, mg/lt = {(D1-D2)-(B1-B2)*f }/P
donde:
D1 = OD de la muestra diluida inmediatamente
después de la preparación, mg/L,
D2 = OD de la muestra diluida después de 5 d de
incubación a 20ºC, mg/L,
P = fracción volumétrica decimal de la muestra
empleada,
B1 = OD del control de semilla antes de la
incubación, mg/L (sección 6.1.4),
B2 = OD del control de semilla después de la
incubación, mg/L (sección 6.1.4), y
f= proporción de semilla en la muestra diluida a la
semilla en el control de semilla
= (% de semilla en la muestra diluida)/(% de semilla
en el control de semilla).
3. Si el material inoculante se agrega
directamente a la muestra o a las botellas de control:
f=(volumen de semilla en la muestra
diluida)/(volumen de semilla en el control de semilla)
4. Si se ha inhibido la nitrificación, reportar los
resultados como DBO5.
1. Los resultados obtenidos para las diferentes
diluciones pueden ser promediados si se cumple con
los requisitos de valores de OD residual de mínimo
1 mg/L y un consumo de OD de por lo menos 2 mg/L.
Este promedio se puede hacer si no hay evidencia
de toxicidad en las muestras menos diluidas o de
alguna alteración detectable.
2. En estos cálculos no se hace corrección por
el OD consumido por el blanco de agua de dilución
durante la incubación. Esta corrección no es
necesaria si el agua de dilución cumple el criterio de
blanco estipulado en el procedimiento. Si el agua de
dilución no cumple este criterio, la corrección es
difícil y los resultados serán cuestionables.
8. PRECISIÓN
1. No existe un procedimiento aceptable para
establecer la precisión y exactitud de la prueba de la
14 | P á g i n a
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DBO. El control de glucosa-ácido glutámico prescrito
está proyectado como un punto de referencia para
la evaluación de la calidad del agua de dilución, la
efectividad de la semilla, y la técnica analítica.
2. Ochenta y seis analistas, pertenecientes a
58 laboratorios analizaron muestras de aguas
naturales dosificadas con incrementos exactos de
compuestos orgánicos, con valores promedios de
DBO de 2,1 y 175 mg/L; su desviación estándar fué
de 0,7 y 26 mg/L, respectivamente.
3. Las pruebas realizadas en un laboratorio
con una solución de glucosa-ácido glutámico de 300
mg/L, produjeron los siguientes resultados:
Número de meses: 14
Número de triplicados: 421
Promedio recuperado mensualmente: 204 mg/L
Desviación estándar promedio mensual: 10,4 mg/L
4. Los estudios estadísticos de precisión y
exactitud de las determinaciones de la DBO,
realizados en ejercicios de intercalibración que
involucraron de 2 a 112 laboratorios, con diferentes
analistas y semillas, en muestras sintéticas que
contenían glucosa y ácido glutámico en proporción
1:1 en el intervalo de concentraciones de 3,3 a 231
mg/L, proporcionaron el promedio, X, y la desviación
estándar, S, a través de las ecuaciones de regresión
correspondientes:
X = 0,658 (nivel agregado, mg/l) + 0,280 mg/L
S = 0,100 (nivel agregado, mg/l) + 0,547 mg/L
• Para el estándar primario de 300 mg/L, el
promedio de DBO 5-d fue de 198 mg/L con una
desviación estándar de 30,5 mg/L.
5. Valores límites de control: Debido a la gran
variedad de factores que afectan las pruebas de la
DBO en los estudios multilaboratorios y la
consecuente disparidad en los resultados, se
recomienda como valor límite de control para
laboratorios individuales una desviación estándar (
1S), la determinada en las pruebas interlaboratorios.
Para cada laboratorio, establecer los valores límites
de control efectuando un mínimo de 25 análisis de
glucosa-ácido glutámico (ver 6.3) en un período de
algunas semanas o meses y calcular la media y la
desviación estándar. Emplear como valor límite de
control para futuros chequeos de glucosa-ácido
glutámico la media 3 desviaciones estándar;
comparar los valores calculados para los ensayos de
un solo laboratorio, presentados anteriormente, con
los resultados interlaboratorios. Reevaluar los
valores límites de control si estos se ubican fuera del
intervalo de 198 30,5 e investigar el origen del
problema. Si la DBO medida para un patrón de
glucosa-ácido glutámico está fuera del intervalo
aceptado, rechazar las pruebas hechas con tales
semilla y agua de dilución.
4. intervalo de trabajo: es igual a la diferencia
entre el máximo OD inicial (7 a 9 mg/L) y el mínimo
OD residual de 1 mg/L multiplicado por el factor de
dilución. Un límite de detección más bajo de 2 mg/L
se establece para una disminución del OD mínima
de 2 mg/L.
Metodos para el análisis de metales
pesados en un agua de rio, de lago o
residual
La Espectroscopía de Absorción Atómica
(a menudo llamada espectroscopia AA o AAS,
por Atomic absorption spectroscopy) es un método
instrumental de la química analítica que permite
medir las concentraciones específicas de un
material en una mezcla y determinar una gran
variedad de elementos. Esta técnica se utiliza para
determinar la concentración de un elemento
particular (el analito) en una muestra y puede
determinar más de 70 elementos diferentes en
solución o directamente en muestras sólidas
utilizadas en farmacología, biofísica o investigación
toxicológica.
La espectroscopía de absorción atómica fue
utilizada por vez primera como una técnica analítica,
y los principios subyacentes fueron establecidos en
la segunda mitad del siglo XIX por Robert Wilhelm
Bunsen yGustav Robert Kirchhoff,, ambos
profesores de la Universidad de Heidelberg,
Alemania.
La forma moderna de la espectroscopia de
absorción atómica fue desarrollada en gran parte
durante la década de 1950 por un equipo de
químicos australianos. Fueron dirigidos por sir Alan
Walsh en laCommonwealth Scientific and Industrial
Research Organisation (CSIRO), División de
Química Física, en Melbourne, Australia.
Descripción
15 | P á g i n a
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Es un método de química analítica cuantificable que mediante fusión con peróxidos o por digestión
está basado en la atomización del analito en matriz ácida.
líquida y que utiliza comúnmente un nebulizador pre-
quemador (o cámara de nebulización) para crear Tipos de llama
una niebla de la muestra y un quemador con forma
de ranura que da una llama con una longitud de Vel.
Combust Oxida Tempera
trayecto más larga, en caso de que la transmisión de de Combu
ible nte tura
energía inicial al analito sea por el método "de stión
llama". La niebla atómica es desolvatada y expuesta
a una energía a una determinada longitud de onda
emitida ya sea por la dicha llama, o una lámpara de 1700-
Gas LP Aire 39-43
cátodo hueco construida con el mismo analito a 1900°C
determinar o una Lámpara de Descarga de
Electrones (EDL). Normalmente las curvas de
calibración no cumplen la Ley de Beer-Lambert en Oxíge 2700-
Gas LP 370-390
su estricto rigor. no 2800°C

La temperatura de la llama es lo bastante alta para

que la llama de por sí no mueran los átomos de la Hidrógen 2000-
Aire 300-440
muestra de su estado fundamental. El nebulizador y o 2100°C
la llama se usan para desolvatar y atomizar la
muestra, pero la excitación de los átomos
del analito es hecha por el uso de lámparas que Hidrógen Oxíge 2550-
900-1400
brillan a través de la llama a diversas longitudes de o no 2700°C
onda para cada tipo de analito.

En AA la cantidad de luz absorbida después de 2100-

Acetileno Aire 158-266
pasar a través de la llama determina la cantidad de 2400°C
analito existente en la muestra. Hoy día se utiliza
frecuentemente una mufla de grafito (u horno de
grafito) para calentar la muestra a fin de desolvatarla Oxíge 3050-
Acetileno 1100-2480
y atomizarla, aumentando la sensibilidad. no 3150°C

El método del horno de grafito puede también

analizar algunas muestras sólidas o semisólidas. Óxido 2600-
Acetileno 285
Debido a su buena sensibilidad y selectividad, sigue nitroso 2800°C
siendo un método de análisis comúnmente usado
para ciertos elementos traza en muestras acuosas Estructura de llama
(y otros líquidos). Otro método alternativo de
atomización es el Generador de Hidruros. Las regiones más importantes de la llama son la
zona de combustión primaria secundaria y zona
Atomización con llama interconal, esta última es la zona más rica en átomos
libres y es la más ampliamente utilizada.
En un atomizador con llama la disolución de la
muestra es nebulizada mediante un flujo de gas Perfiles de temperatura
oxidante mezclado con el gas combustible y se
transforma en una llama donde se produce la La temperatura máxima se localiza
atomización. El primer paso es la desolvatación en aproximadamente 1 cm por encima de la zona de
el que se evapora el disolvente hasta producir un combustión primaria
aerosol molecular sólido finamente dividido. Luego,
la disociación de la mayoría de estas moléculas
produce un gas atómico.

Como primer paso, naturalmente, es necesario

obtener una disolución de la muestra, por ejemplo
Atomizadores de llama

16 | P á g i n a
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Un fotómetro de llama de laboratorio que se utiliza
propano o butano como gas de combustión
El aerosol formado por el flujo del gas oxidante, se
mezcla con el combustible y se pasa a través de una
serie de deflectores que eliminan las gotitas que no
sean muy finas. Como consecuencia de la acción de
estas, la mayor parte de la muestra se recoge en el
fondo de una cámara y se drena hacia un
contenedor de desechos. El aerosol, el oxidante y el
combustible se queman en un mechero provisto de
una ranura de 1 mm o 2 de ancho por 5 ó 10 mm de
longitud. Estos mecheros proporcionan una llama
relativamente estable y larga, estas propiedades
aumentan la sensibilidad y la reproducibilidad.
Reguladores de combustibles y oxidantes
Los caudales de oxidante y combustible constituyen
variables importantes que requieren un control
preciso es deseable poder variar cada uno de ellos
en un intervalo amplio para poder encontrar
experimentalmente las condiciones óptimas para la
atomización
Características del funcionamiento de los
atomizadores de llama
Señal de salida
La señal del detector aumenta al máximo algunos
segundos después de la ignición y cae rápidamente
a cero cuando los productos de atomización salen
fuera.
Atomización en vapor frío
La técnica de vapor frío solamente aplicable a la
determinación de mercurio ya que es el único
elemento metálico que tiene una presión vapor
apreciable a temperatura ambiente.
Fuentes de radiación
Los métodos analíticos basados en la absorción
atómica son potencialmente muy específicos, ya
que las líneas de absorción atómica son
considerablemente estrechas (de 0,002 a 0,0005
nm)y las energías de transición electrónica son
específicas de cada elemento.
Lámpara de cátodo hueco
Una lámpara de cátodo hueco consiste en un ánodo
de tungsteno y un cátodo cilíndrico cerradas
herméticamente en un tubo de vidrio lleno con neón
/ argón a una presión de 1 a 5 torr. El cátodo esta
constituido con el metal cuyo espectro se desea
obtener, o bien, sirve de soporte para una capa de
dicho metal. Una parte de estos átomos se excitan
con la corriente que pasa a través de ellos y, de este
modo, al volver al estado fundamental emiten su
radiación característica, los átomos metálicos se
vuelven a depositar difundiendo de nuevo hacia la
superficie del cátodo o hacia las paredes del vidrio.
La configuración cilíndrica del cátodo tiende a
concentrar la radiación en una región limitada del
tubo metálico, este diseño aumenta la probabilidad
de que la redepositación sea en el cátodo y no sobre
la pared del vidrio.
Instrumentos de haz sencillo
Consiste en una fuente de cátodo hueco, un
contador o una fuente de alimentación de impulsos,
un atomizador, un espectrofotómetro sencillo de red
de difracción y un detector. El haz de luz proveniente
de la fuente pasa directamente a través de todos los
componentes del instrumento hasta llegar al
detector.
Instrumentos de doble haz
Básicamente consta de las mismas partes que el
sistema de haz sencillo, sólo que el haz que
proviene de la fuente de cátodo hueco se divide
mediante un contador reflejante y un divisor de haz,
una mitad pasa a través de la llama y la otra es
enviada por un paso óptico interno. Los dos haces
se encuentran nuevamente en el mismo camino
óptico mediante un espejo semiplateado o
recombinador antes de entrar al monocromador.
Monocromadores
Existen diversas combinaciones y distribuciones de
los componentes ópticos dentro de un
monocromador que buscan optimizar la calidad del
espectro generado. Las más comunes son las
denominadas, prisma de Nicoll o el de Litrow y
Zcerny-Turner para sistemas convencionales con
redes de difracción holográficas. También se están
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comenzando a utilizar monocromadores con redes
Echelle.
Detectores
El detector es el dispositivo encargado de captar la
señal óptica proveniente del monocromador y
transformarlo en una señal electrónica capaz de ser
convertida en un valor legible. El más común es el
fotomultiplicador, tubo de vacío provisto de placas
fotosensibles que recibe los fotones, los convierte en
impulsos electrónicos y multiplica hasta obtener la
suficiente intensidad eléctrica. En años reciente se
están utilizando también los detectores de estado
sólido CCD, de alta sensibilidad asociados a los
monocromadores Echelle.
Interferencias
Se producen cuando la absorción o emisión de una
especie interferente se solapa o aparece muy
próxima a la absorción o emisión del analito, de
modo que su resolución por el monocromador
resulte imposible. Las interferencias químicas se
producen como consecuencia de diversos procesos
químicos que ocurren durante la atomización y que
alteran las características de absorción del analito.
Dado que las líneas de emisión de las fuentes de
cátodo hueco son muy estrechas es rara la
interferencia debida a la superposición de las líneas,
para que exista esta interferencia la separación
entre las dos líneas tiene que ser menor a 0,1 Å.
Algunos instrumentos poseen Slit (rendija) y
monocromadores muy finos que pueden discernir en
0,1 nm de diferencia. Algunas matrices presentan
señal de ruido que se elimina con el background del
instrumento permitiendo resultados
Formación de compuestos poco volátiles
El tipo más común de interferencia es el producido
por aniones que forman compuestos de baja
volatilidad con el analito y reducen así su velocidad
de atomización lo que origina resultados menores a
los esperados.
Tecnologías derivadas, ICP (Inductively Coupled
Plasma)
Actualmente, las tecnologías de espectroscopia
atómica están tendiendo a migrar de la
"absorción" AA a la "emisión". Esta tecnología es
llamada Espectroscopía de Emisión Atómica por
Plasma Acoplado Inductivamente óICP por sus
siglas en inglés. que da uso a otros tipos de
descargas eléctricas, llamadas plasmas, estas
fuentes han sido usadas como fuentes de
atomización / excitación para AA. Estas técnicas
incluyen el plasma inductivamente acoplado y el
plasma acoplado directamente.
Neumática requerida
El plasma es generado por el gas argón en estado
de ionización. Adicionalmente puede
requerir gas nitrógeno que es un carrier o gás de
purga para la óptica, y un gas de corte axial que es
aire. El Gás Argón debe ser 99.996% mínimo de
pureza y el gas de purga no menos de un 99.999%
de pureza. El gás Argón fluye dentró del equipo a
razón de unos 20-25 L/min y el de purga a 5 L/min.
El gás de corte debe fluir a 25 L/min.
Sistema de enfriamiento
El acoplamiento se produce generando un campo
magnético pasando una elevada corriente eléctrica
de alta frecuencia a través de una espiral (RF Coil)
de inducción enfriada con un sistema Chiller. El
núcleo del oscilador se calienta enormemente
generando unas 6.600 Btu/hora, esto requiere un
sistema que mantenga el detector, el inductor y el
oscilador en temperaturas de -8 °C. Adicionalmente
la temperatura ambiente debe ser de 22±2 °C para
evitar las incomodas reiniciaciones cuando el
oscdilador varía en 1 °C su temperatura de trabajo.
Características de la antorcha plasmática
El ICP permite analizar por efectos de ionización en
elevadas temperaturas de plasma (8.000 °K)
inducido en campo magnético de argón casi la
totalidad del sistema periódico exceptuando sodio,
potasio y gases nobles. El generador de hidruros
usado en espectroscopia de AA no es necesario en
esta técnica, aunque algunos espesctroscopista que
desean trabajan a concentraciones muy reducidas
del orden de los microgramos lo usan.
Nebulizadores
La forma geométrica de los nebulizadores usados en
ICP son diversos y dependen del fabricante, en
general son cámaras asociadas al sistema del
inyector, y este esta solidario a la antorcha
plasmática y operan por efecto Venturi cuando el
gas argón es introducido a gran velocidad por un
tubo capilar. Las cámaras spray pueden ser de
vidrios (ciclónicas-Gemcone)) o de PVC (cámaras
tipo Scott o MEINHARD de flujo cruzado)
dependiendo de la cantidad de sólidos disueltos que
presente la matriz del analito.
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Un equipo ICP Plasma.
Fundamentos
El fundamento del método es analógicamente
parecido a la técnica AA, el plasma recalentado es
inducido en un campo magnético y se forma una
antorcha plasmática que es espectroscópica ya sea
axial o radialmente.
Se puede generar un plasma acoplado por inducción
al dirigir la energía de un generador de frecuencia de
ondas de radio hacia un gas apropiado,
comúnmente argón ICP.
Este inductor genera rápidamente un campo
magnético oscilante orientado al plano vertical (axial
o perpendicular) de la espiral. La ionización del gas
argón entrante se inicia con una chispa de la llamada
espiral de Tesla. Los iones resultantes y sus
electrones asociados luego interactúan con el
campo magnético fluctuante. Esto genera energía
suficiente para ionizar átomos de argón por
excitación de choque.
Los electrones generados en el campo magnético
son acelerados perpendicularmente hacia la
antorcha. A altas velocidades, los cationes, aniones
y electrones conocidos como corriente turbulenta
(Corriente de Eddy), colisionarán con los átomos de
argón para producir mayor ionización, lo que
produce un gran aumento de temperatura.
En 2 microsegundos, se crea un estado estable con
alta densidad electrónica. Se produce plasma en la
parte superior de la antorcha. La temperatura en el
plasma varía entre 6000-10000 K, usualmente
8.000 K. Una larga y bien definida cola emerge
desde la parte superior de la antorcha. Esta
antorcha de alta intensidad luminosa es la fuente
espectroscópica que permite la técnica analítica. La
misma contiene todos los átomos del analito y los
iones que fueron excitados por el calor del plasma.
Las ventajas analíticas del ICP -Plasma Acoplado
por Inducción yace en su capacidad de analizar una
gran cantidad de analitos en un período corto con
muy buenos límites de detección para la mayoría de
los elementos.
Los elementos pueden ser analizados en
forma axial para bajos límites de concentración,
o radial para elevadas concentraciones. La variante
de análisis axial está definida en el área del óptico
perpendicular a la antorcha.
Óptica
El monocromador o sistema de esllos es parte de la
propiedad del constructor del equipo y su
perfomance hace la diferencia entre una y otra
marca; pero en general, estos sistemas que vienen
sellados dentro de un habitáculo cuentan con una
serie de espejos de transferencia óptica, que son los
primeros elementos que reciben los haces ópticos
de la antorcha. Estos son reflejados en lentes
colimadores que los desvían a un prisma que
difracta en sus respectivas longitudes de onda y
luego pasan por rendijas y de ahí son recibidos por
otro lente colimador que los envía al detector.
Versatilidad analítica
El ICP permite realizar un barrido simultáneo o
secuencial según el tipo de construcción entregando
un reporte analítico en solo minutos, a diferencia del
proceso analítico del AA que es muy laborioso.
Asimismo permite construir curvas de calibración a
mayores o menores concentraciones del analito
obteniendo excelentes correlaciones concentración
versus intensidad (medidos en cuentas por
segundo). No requiere de cambio de lámparas, solo
ajustes del monocromador cada cierto tiempo. Las
longitudes de onda que se manejan dentro del
sistema permite una resolución de hasta 0.5nm.
Otra derivación es el ICP-Masa que es una variante
de uso investigativo que adiciona un detector de
masa a la salida de la antorcha. Su uso está limitado
a la investigación.
Espectrometría de acoplamiento inductivo de
plasma de emisión atómica (ICP-AES),
Plasma acoplado inductivamente espectrometría de
emisión atómica
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ICP espectrómetro de emisión atómica.
Plasma acoplado inductivamente espectrometría
de emisión atómica (ICP-AES), también se refirió a
espectrometría de emisión óptica de plasma
acoplado inductivamente como (ICP-OES), es una
técnica analítica utilizada para la detección de trazas
de metales. Se trata de un tipo de espectroscopia de
emisión que utiliza el plasma acoplado
inductivamente para producir átomos excitados y los
iones que emiten radiación electromagnética en
longitudes de onda característica de un
determinado elemento. La intensidad de esta
emisión es indicativa de la concentración del
elemento dentro de la muestra.
Mecanismo
ICP Plasma "antorcha".
El ICP-AES se compone de dos partes: el ICP y la
óptica del espectrómetro . La antorcha ICP consiste
en 3 concéntricos de cuarzo tubos de vidrio. La
salida o bobina de "trabajo" de la radiofrecuencia del
generador (RF) rodea parte de esta antorcha de
cuarzo. Argón gas se utiliza normalmente para crear
el plasma .
Cuando la antorcha está encendida, un
intenso campo electromagnético se crea dentro de
la bobina por la alta potencia de radio frecuencia
de la señal que fluye en la bobina. Esta señal de RF
es creado por el generador de RF que es,
efectivamente, un transmisor de radio de alto poder
conducir la "bobina de trabajo" de la misma manera
un transmisor de radio típica impulsa una antena de
transmisión. El gas argón fluye a través de la
antorcha se enciende con un Tesla unidad que crea
un breve arco de descarga a través del flujo de argón
para iniciar el proceso de ionización. Una vez que el
plasma se "enciende", la unidad de Tesla se apaga.
El gas de argón se ioniza en el campo
electromagnético intenso y fluye en un patrón de
rotación simétrica particular, hacia el campo
magnético de la bobina de RF. Un plasma
temperatura estable, alta de alrededor de 7.000 K se
genera entonces como el resultado de las colisiones
inelásticas creados entre los átomos de argón
neutros y las partículas cargadas.
Una bomba peristáltica ofrece una muestra acuosa
u orgánica en un nebulizador analítico en el que se
cambia en la niebla y se introdujo directamente en la
llama de plasma. La muestra choca inmediatamente
con los electrones y los iones cargados en el plasma
y se divide en sí cargadas iones . Las diversas
moléculas se rompen en sus respectivos átomos
que luego pierden electrones y se recombinan
varias veces en el plasma, que emiten radiación a
las características longitudes de onda de los
elementos que intervienen.
En algunos diseños, un gas de corte,
normalmente nitrógeno o aire comprimido seco se
utiliza para "cortar" el plasma en un lugar
específico. Uno o dos lentes de transferencia se
utilizan entonces para enfocar la luz emitida en
una rejilla de difracción en el que se separa en sus
longitudes de onda componentes en el
espectrómetro óptico. En otros diseños, el plasma
incide directamente sobre una interfaz óptica que
consta de un orificio desde el que un flujo constante
de argón emerge, desviando el plasma y
proporciona refrigeración al tiempo que permite la
luz emitida por el plasma a entrar en la cámara
óptica. Sin embargo, otros diseños utilizan fibras
ópticas para transmitir algo de la luz para separar las
cámaras ópticas.
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Dentro de la cámara óptica (s), después de que la
luz se separa en sus diferentes longitudes de onda
(colores), la intensidad de la luz se mide con
un fotomultiplicador tubo o tubos físicamente
situados para "vista" la longitud de onda específica
(s) para cada línea de los elementos que intervienen,
o, en unidades más modernas, los colores
separados caen sobre una matriz de foto detectores
semiconductores como dispositivos de carga
acoplada (CCD). En unidades que usan estos
conjuntos de detectores, las intensidades de todas
las longitudes de onda (dentro del rango del sistema)
pueden ser medidos de forma simultánea, lo que
permite el instrumento a analizar para cada
elemento al que la unidad es sensible a la vez. Por
lo tanto, las muestras pueden analizarse muy
rápidamente.
La intensidad de cada línea se compara entonces
con intensidades medidas previamente conocidas
de las concentraciones de los elementos, y sus
concentraciones se calcula entonces por
interpolación a lo largo de las líneas de calibración.
Además, un software especial generalmente corrige
para interferencias causadas por la presencia de
diferentes elementos dentro de una matriz de
muestra dado.
Aplicaciones
Ejemplos de la aplicación de ICP-AES incluyen la
determinación de metales en el vino, el arsénico en
los alimentos, y oligoelementos unidos a proteínas.
se hizo. Si bien las pruebas del suelo pueden no
estar solo en la corte sin duda fortalece otras
pruebas.
También se está convirtiendo rápidamente en el
método de análisis de la opción para la
determinación de los niveles de nutrientes en los
suelos agrícolas. Esta información se utiliza para
calcular la cantidad de fertilizante necesario para
maximizar el rendimiento de los cultivos y la calidad.
ICP-AES se utiliza para el aceite de motor
de análisis. El análisis de aceite usado de motor
revela mucho acerca de cómo el motor está en
funcionamiento. Las piezas que se desgastan en el
motor depositarán huellas en el aceite que se puede
detectar con ICP-AES.Análisis ICP-AES puede
ayudar a determinar si las partes están
fallando. Además, ICP-AES puede determinar qué
cantidad de ciertos aditivos del petróleo se
mantienen, por lo que indicará la cantidad de vida
útil del aceite se queda. El análisis de aceite se
utiliza a menudo por el gerente de la flota o los
entusiastas del automóvil que tienen interés en
saber tanto sobre el funcionamiento de su motor
como sea posible. ICP-AES también se utiliza
durante la producción de aceites de motor (y otros
aceites lubricantes) para el control de calidad y el
cumplimiento de las especificaciones de producción
y de la industria.

ICP-OES es ampliamente utilizado en el

procesamiento de minerales para proporcionar los
datos sobre los grados de diversas corrientes, para
la construcción de los balances de masa.

En 2008, se utilizó la técnica de la Universidad de

Liverpool para demostrar que un Chi
Rho amuleto que se encuentra en Shepton Mallet y
creía anteriormente para estar entre las primeras
evidencias de cristianismo en Inglaterra , sólo que
data del siglo XIX.

ICP-AES se utiliza a menudo para el análisis de

elementos traza en el suelo, y es por eso que a
menudo se utiliza en medicina forense para
determinar el origen de las muestras de suelo se
encuentran en la escena del crimen o de las
víctimas, etc. Tomando una muestra de un control y
determinar la composición de metal y tomar la
muestra obtenida de pruebas y determinar que la
composición metálica permite una comparación que

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BIBLIOGRAFÌA

[1] video de CITRAR Disponible en

https://www.youtube.com/watch?v=Za737Xur-
80
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o+con+flujo+ascendente&oq=Evaluaci%C3%B
3n+de+un+reactor+de+manto+de+lodo+con+fl
ujo+ascendente&aqs=chrome..69i57.1542j0j8
&sourceid=chrome&es_sm=93&ie=UTF-
8#q=caracteristicas+del+manto+de+lodo+del+r
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[3] información de la autoridad nacional del
agua sobre su distribución en el Perú
Disponible en
http://www.ana.gob.pe:8080/rada/wfrmConsD
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[4] definición de demanda biológica de oxigeno
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http://es.wikipedia.org/wiki/Demanda_biol%C3
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[5] definición de demanda bioquímica del
oxígeno Disponible en
http://www.drcalderonlabs.com/Metodos/Analis
is_De_Aguas/Determinacion_de_DBO5.htm
[6] La Espectroscopía de Absorción Atómica
Disponible en
http://es.wikipedia.org/wiki/Espectroscopia_de
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[7] Espectrometría de acoplamiento inductivo
de plasma de emisión atómica (ICP-AES)
Disponible en
http://en.wikipedia.org/wiki/Inductively_coupled
_plasma_atomic_emission_spectroscopy

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