CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA Y DE COLUMNA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERÍA

Facultad de Ingeniería Química y Textil

Práctica Nº 4
Técnicas de separación e identificación por
cromatografía

Grupo de trabajo: N° 12

 Fernando Trigoso Villalovos 20092123A

 Sheyla Salcedo Saboya 20081352D
 Melvin Vilca Montes 20090284H
Profesores:

 Emilia Hermoza Guerra

 Cristina Viza Llenque

DD MM AA
Fecha de presentación:
03 05 11

LIMA – PERÚ 2011-I

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ÍNDICE

1. OBJETIVOS…………….………………………………………….…..……………………..pág.3

2. FUNDAMENTO TEÓRICO…………….………………….……………………...…....pág.3

3. DATOS Y RESULTADOS: ………………………………………………………..………pág.5

Tabla 1: Datos de distancias recorridas para cálculo de RF.

Tabla 2: Resultados de RF . En las diferentes fases móviles.

4. DIAGRAMAS DE FLUJO DEL PROCESO…….…………………..................pág.9

5. OBSERVACIONES…………………………………….………………………………….pág.11
6. CONCLUSIONES…………………………………………………………………………...pág.12
7. APÉNDICE:
7.1. CÁLCULOS…………………………………………………………………………….pág.12
7.2. APLICACIONES INDUSTRIALES…………………………………….……...…pág.13
Cromatografía en: Drogas y Fármacos y análisis de plasma

8. BIBLIOGRAFÍA………………………………………………………………………….…pág.16

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Cromatografía de capa fina y de columna.

1. OBJETIVOS:

 Entrenar en técnicas de separación e identificación de pigmentos naturales por

cromatografía de capa fina y de columna.

 Conocer los fundamentos físico-químicos implicados en los procesos de

separación por cromatografía.

2. FUNDAMENTO TEÓRICO:

Cromatografía

La cromatografía es un método que consiste en la separación de una mezcla de dos o

más compuestos por distribución entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, y
la otra una fase móvil. Varios tipos de cromatografía son posibles, dependiendo de la
naturaleza de las dos fases involucradas.

Todas las técnicas cromatografícas dependen de la distribución de los componentes

de la mezcla entre dos fases inmiscibles: una fase móvil, llamada también activa, que
transporta las sustancias que se separan y que progresa en relación con la otra,
denominada fase estacionaria.

Todos los sólidos finamente pulverizados tienen el poder de absorber en mayor o

menor grado otras sustancias sobre su superficie; y similarmente todas las sustancias
pueden ser adsorbidas, unas con más facilidad que otras. Este fenómeno de adsorción
selectiva es el principio fundamental de la cromatografía.

En general, las fuerzas atractivas en la superficie del sólido (adsorbente) difieren para
las diferentes especies en disolución. Las sustancian que el sólido absorbe más
fuertemente se mueven a través de la fase estacionaria más lentamente que aquellas
que no son tan fuertemente adsorbidas. Esto significa que aunque los diferentes
componentes de la disolución salgan juntos, pronto se separan al contacto con la fase
estacionaria, es decir, los componentes se separan debido a las diferencias entre las
fuerzas intermoleculares entre ellos.

Cromatografía en Columna

En la cromatografía en columna la separación se

consigue haciendo fluir la mezcla a través de una
columna de adsorbente. Los compuestos emergen
de la columna a tiempos diferentes, y pueden ser
recogidos en fracciones separadas.

Comúnmente se suele usar como adsorbente

alúmina o sílice. Las fases móviles se usan en
función de la polaridad de los compuestos a
separar.

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Cromatografía de Capa Fina

En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un
pequeño espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascenderá, por
capilaridad, por la placa y arrastrara los componentes a lo largo de esta, produciendo
la separación de estos.

Se emplea una placa de vidrio o una lamina metálica, que se cubre con una película
de un adsorbente, y a continuación el lado donde se encuentra la disolución de las
sustancias que se van a separar se sitúa en el extremo inferior. Esta separación se
lleva a cabo un vaso que contiene un agente eluyente.

Existen placas que contienen un indicador de fluorescencia, para facilitar la

identificación de las muestras. Si no se usa indicador y los componentes no son
coloridos se requerirán técnicas de revelado.

Los factores que influyen en una separación por cromatografía de capa fina son:

Temperatura (a menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase

estacionaria), limpieza de las placas, pureza de los disolventes, etc.

Relación de Frentes o Factor de Retención

El Rf es la distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación respecto a la

distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente.

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑢𝑛 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜

𝑅𝐹 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒.

El valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra: tipo de

adsorbente, eluyente, así como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
saturación, entre otros.

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3. DATOS Y RESULTADOS:

Tabla 1: Datos de distancias recorridas para cálculo de RF.

Distancia recorrida por: ( cm)

Fase móvil: Frente del solvente caroteno Clorofila
n-hexano 5.5 5.0 0
n-hexano + Acetona 5.0 5.0 2.1
Acetona 5.0 1.3 1.3

Tabla 2: Resultados de RF . En las diferentes fases móviles.

RF
Fase móvil: caroteno Clorofila
n-hexano 0.9 0
n-hexano + Acetona 1 0.42
Acetona 0.26 0.26

Hojas de peligrosidad de las sustancias implicadas en el experimento.

“Ficha técnica de la acetona”

Dimetil-cetona
Formula C3H6O
Peso molecular 58.08 g/mol
Nombre común Acetona
Liquido incoloro. P.F.: 75°C. Soluble en agua.
Propiedades
Reacciona con agentes oxidantes fuertes.

Protección personal

INFLAMABLE (F+)
Baja toxicidad, pero de riesgo
Peligrosidad
ambiental.
Irritante.

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“Ficha técnica del n-hexano”

Identificación
Nombre químico: n-Hexano
Fórmula: C6H14

Propiedades físico-químicas
Aspecto y color: Líquido incoloro.
Olor: Suave olor a gasolina
Presión de vapor: 16 KPa a 20ºC
Densidad relativa de vapor (aire=1): 3.0
Solubilidad en agua: Ninguna
Punto de ebullición: 69ºC
Peso molecular: 86.2g/mol

Identificación de los peligros

Equipos de protección personal.

Protección respiratoria: Si
Protección de manos: Si
Protección de ojos: Si
Protección del cuerpo: No

Información toxicológica:
Efectos agudos Efectos crónicos
Contacto con la piel Piel seca enrojecimiento causar dermatitis
Contacto con los ojos Enrojecimiento, dolor.
Inhalación Vertigo, somnolencia, dolor de Poli neuropatías
cabeza, dificultad respiratoria,
náuseas, debilidad, pérdida del
conocimiento.
Ingestión Dolor abdominal.

Medidas a tomar en caso de contacto con el producto - Primeros Auxilios

Contacto con la piel: Quitar las ropas contaminadas, aclarar y lavar la piel
con agua y jabón y proporcionar asistencia médica.
Contacto con los ojos: Enjuagar con agua abundante durante varios
minutos. y proporcionar asistencia médica.
Inhalación: Aire limpio, reposo y proporcionar asistencia médica.
Ingestión: Enjuagar la boca, No provocar el vómito, reposo y
proporcionar asistencia médica.

Ficha técnica del etanol.”

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Identificación
Nombre químico: Alcohol etílico
Fórmula: C2H5OH

Propiedades físico-químicas
Apariencia: Líquido incoloro volátil de olor característico y agradable.
Gravedad Específica (Agua=1): 0.7893 / 20°C
Punto de Ebullición (ºC): 78 - 79
Densidad Relativa del Vapor (Aire=1): 1.60
Punto de Fusión (ºC): -114
Viscosidad (cp): N.R.
pH: N.A.
Presión de Vapor (mm Hg): 44.0 / 20°C

Identificación de los peligros

Equipos de protección personal.

Uso Normal: Guantes largos, monogafas. Si es muy concentrado se puede
usar máscara con filtro para vapores, botas y overol.
Controles de Ingeniería: Ventilación local y general, para asegurar que la
concentración no exceda los límites de exposición ocupacional. Debe
disponerse de duchas y estaciones lavaojos.

Medidas a tomar en caso de contacto con el producto - Primeros Auxilios

Contacto con la piel: Lavar la piel con abundante agua. Retirar la ropa
contaminada y lávela con abundante agua y jabón.
Contacto con los ojos: Lavar con abundante agua, mínimo durante 15
minutos. Levantar y separar los párpados para
asegurar la remoción del químico. Si la irritación
persiste repetir el lavado. Buscar atención médica.
Inhalación: Trasladar al aire fresco. Si no respira administrar
respiración artificial. Si respira con dificultad
suministrar oxígeno. Mantener la víctima abrigada y
en reposo. Buscar atención médica inmediatamente.
Ingestión: Lavar la boca con agua. Inducir al vómito. No
administrar eméticos, carbón animal ni leche. Buscar
atención médica inmediatamente (puede tratarse de
alcohol desnaturalizado).

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Ficha técnica de la silicagel”

Silicagel
Formula SiO2nH2O
Gránulos de color blanco o azul, inodoro. P.F.:
Propiedades 1710°C. Insoluble en agua. Alta absorción.
Débilmente acido.

Protección personal

Nocivo
T R: 22-42-49
Nocivo por inhalación.
Peligrosidad

“Ficha técnica de la alúmina”

Trióxido de aluminio
Formula Al2O3
Peso molecular 102 g/mol
Nombre común Alúmina
Polvo blanco P.F.: 2072°C. Insoluble en agua.
Propiedades Adsorbente ligeramente básico, y de carácter
polar.

Protección personal

Enrojecimiento de los ojos.

Peligrosidad
Evitar la dispersión del polvo.

4. DIAGRAMAS DE FLUJO (páginas siguientes)

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5. OBSERVACIONES:

Cromatografía de capa fina.

 Al utilizar la acetona como fase móvil en la experiencia de cromatografía de capa

fina, se observo que la separación entre los compuestos era mínima, esto debido a
que el caroteno es una sustancia apolar y por tanto hidrofóbica, y puesto que la
acetona es una sustancia polar no se produjo fuerzas intermoleculares capaces de
arrastrar el caroteno junto con el eluyente.

 La cromatografía de capa fina debe llevarse a cabo en un lugar sin corriente de

aire, es por eso que se sugiere tapar el vasito con la luna reloj.

 Hay que tener presente que cuanto mayor sea la longitud de la placa mejor será la
separación, esto se debe a que las fuerzas que actúan en la separación tendrán
más oportunidad para actuar sobre cada componente.

 A la silica gel se le incorpora un agente aglomerante, yeso (sulfato de cálcico

semihidratado), para proporcionar firmeza al adsorbente.

 La activación de la placa se refiere a retirar el agua que se uso para formar la

papilla de silica gel, ya que la polaridad del agua interferiría en la apolaridad del
n-hexano y no permitiría la separación del caroteno.

Cromatografía de columna.

 Para la experiencia de cromatografía en columna, se añadía porciones de eluyente

constantemente para asegurarse de que la mezcla de colorantes sea absorbida en
el interior de la columna de alúmina, y de que el adsorbente empaquetado en la
columna nunca se quede seco, ya que esto crearía canales o burbujas de aire en el
lecho, provocando así una pobre separación de los compuestos.

 Esta separación es necesario realizar usando la línea de vacío conectado al

kitasato, ya que el flujo de descenso de la fase móvil es muy lenta.

 Se pudo observar que el descenso del caroteno (amarillo) al agregar n-hexano, era
más lento que el descenso de la clorofila (verde) al agregar un poco de acetona.

 La alúmina es la que hace el papel de adsorbente, mientras que la arena y el

algodón solo se usan como soporte.

 En la cromatografía de columna, se pudo obtener dos soluciones coloreadas una

amarilla y otra verde que indicaban la presencia de los pigmentos, en cambio en la
cromatografía de capa fina solo se identifica por las pequeñas manchas que se
observa en las placas.

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6. CONCLUSIONES:

Cromatografía de capa fina.

 Se concluye que la clorofila es más polar que el caroteno, ya que la clorofila fue
mayormente atraída por el adsorbente polar (silica gel), siendo el caroteno quien
recorrió una mayor distancia.

 Luego de realizar la cromatografía de capa fina con dos tipos de eluyentes (una
apolar y otra polar) como el hexano y la acetona, se puede decir que el hexano es
un mejor eluyente para este tipo de experiencias, debido a que permite una mayor
separación entre los compuestos.

 Mediante se puede averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos

sobre la misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados
se calculan los RF y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se
trataba del mismo compuesto. Por el contrario si los RF son iguales los compuestos
pueden ser iguales o no serlo.

Cromatografía de columna.

 Se pude decir que la elección del eluyente dependerá lógicamente del componente
que se va a separar y del material en que la separación se lleva a cabo.

7. APÉNDICE

7.1 CÁLCULOS

Calculo del factor de retención RF.

Usado la siguiente expresión y con los datos de la tabla 1, se tiene:

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑢𝑛 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜

𝑅𝐹 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒.

En fase móvil: n-Hexano.

5
𝑅𝐹 𝑐𝑎𝑟𝑜𝑡𝑒𝑛𝑜 = = 0.9
5.5

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0
𝑅𝐹 𝑐𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 = =0
5.5

En fase móvil: n-Hexano- acetona.

5
𝑅𝐹 𝑐𝑎𝑟𝑜𝑡𝑒𝑛𝑜 = =1
5

2.1
𝑅𝐹 𝑐𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 = = 0.42
5

En fase móvil: Acetona

1.3
𝑅𝐹 𝑐𝑎𝑟𝑜𝑡𝑒𝑛𝑜 = = 0.26
5

1.3
𝑅𝐹 𝑐𝑙𝑜𝑟𝑜𝑓𝑖𝑙𝑎 = = 0.26
5

7.2 APLICACIONES INDUSTRIALES.

Drogas y Fármacos y análisis de plasma

En drogas, la naturaleza química heterogénea de las drogas lo hace algo

problemático su tratamiento integral por cromatografía.

Si bien existe una clara tendencia hacia el dominio de alto rendimiento de la

cromatografía líquida (HPLC) en la separación y el análisis de drogas, otras técnicas,
como el de capa fina (o plano) (TLC) y el gas / líquido (GLC) sugieren tener muchas
aplicaciones en la separación y el análisis de drogas. Otras técnicas que se
consideraron una vez para mostrar el resultado de una gran promesa, como la
cromatografía de fluidos supercríticos, tienen en realidad poco impacto y todavía se
limita a una pocas aplicaciones de nicho.

Hay muchos campos de aplicación para el análisis de drogas y sus metabolitos en

fluidos biológicos, incluido el análisis forense de abuso de drogas o intoxicación, las
distintas fases de descubrimiento de fármacos y el desarrollo (incluidos los estudios de
metabolismo de los fármacos), y terapéuticos seguimientos de las drogas.

Columnas Monolíticas

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A diferencia de las columnas convencionales, que están llenas de partículas de la fase

estacionaria, las columnas monolíticas se forman como una unidad única porosa.
Recientemente, como columnas monolíticas se han comercializado. Estas columnas
muestran una mayor permeabilidad y por lo tanto puede ser utilizado a altas tasas de
flujo, brindando la posibilidad de un análisis más rápido. Aunque el uso de columnas
monolíticas para las separaciones de drogas se encuentra todavía en sus primeras
etapas, algunas aplicaciones de la cromatografía de las drogas están empezando a
ser visto. Cuando se compararon los resultados con métodos más convencionales,
como HPLC, el monolito proporciono un rendimiento superior. Otros estudios de
diferentes laboratorios han demostrado que las columnas monolíticas se puede utilizar
para el análisis rápido de los fármacos y sus metabolitos en el plasma. En un ejemplo
reciente, estas columnas se utilizaron para el análisis de algunos inhibidores de la
COX-II en el plasma humano con tiempos de análisis cromatográficos de menos de un
minuto ( Ver Figura1 ). Esto representa una reducción de hasta cinco veces en el
tiempo de análisis. También los rayos UV y detección por fluorescencia se han
utilizado con estas columnas para investigar el metabolismo de una variedad de
fármacos utilizados como puntas de prueba, por ejemplo, fenacetina, la cumarina, y
paclitaxel, por una serie de citocromo P450. El uso de columnas monolíticas ha
proporcionado los tiempos máximos de análisis del ciclo de ca. 4,5 min para este tipo
de ensayo.

Otra aplicación reciente es el de la utilización de cuatro columnas monolíticas,

conectado en paralelo con un espectrómetro de masas en tándem, para el análisis de
oxazepam en los extractos de fase sólida del plasma. Este arreglo permitió el análisis
paralelo de muestras con un tiempo de análisis global de tan sólo 30 segundos por
muestra.

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8. BIBLIOGRAFÍA

 H.Dupont Durst, W. George W. Gokel. Química orgánica experimental. Editorial

Reverté. Pag. 180.

 Panreac Didactic, Reactivos y productos químicos para didáctica (Catálogo)

pag.57

 Heftmann E. (2004) Chromatography, fundamentalsand applicationsof

chromatography and related differential migration methods. United kingdom:
ELSEVIER Ltd. Pag. 945, 955, 956.

 Cortes, G. F. Cromatografía en Capa Fina. [Fecha de consulta: 30/04/2011].

Disponible en:
http://depa.pquim.unam.mx/~fercor/dqo/manuales/1311/p7.pdf

 Jorrin, N. J. Separación de aminoácidos por cromatografía en capa fina y

detección mediante reacción con ninhidrina. [Fecha de consulta: 30/04/2011].
Disponible en:
http://www.uco.es/CROMATOGRAFÍADECAPFINADEAAs.pdf

 Separación de Ferroceno y Trimetilazuleno por Cromatografía en columna.

[Fecha de consulta: 30/04/2011]. Disponible en:
http://sites.google.com/site/grupodepolimeros/cromatografia-en-columna

www.uacj.mx/IIT/CICTA/Documents/Quimicos/acetona.pdf

www.ctr.com.mx/pdfcert/Eter%20de%20Petroleo.pdf

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