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Facultad de Agronomía
Área de Ciencias
Subárea de Ciencias Químicas
Laboratorio de Bioquímica
Auxiliar: Gladys Marisela Arévalo
Reporte de Proteínas:
Frijol Piloy (Phaseolus dumosus.)
Integrantes
Nombres Carné
Eddy Alexander Saban Sequen 201503304
Amanda Marilyn Estrada Rodas 201502830
Virginia Marisol Estrada Rodas 201502821
Nery Armando Salvatierra Ramírez 201502914
Tito Fajardo Olivares 201503231
Guatemala, Septiembre 2016.
1. INTRODUCCIÓN
1.2. Específicos
Preparar muestras vegetales (Frijol Piloy) para el análisis en el
laboratorio.
Efectuar la extracción salina y extracción acuosa de proteínas de las
muestras vegetales.
Determinar la presencia de proteínas y aminoácidos en las muestres
vegetales
Utilizar la técnica “Cromatografía en capa fina” para el análisis
cualitativo de aminoácidos de la muestra vegetal.
Realizar a través de la espectrofotometría la cuantificación de proteínas
extraídas de la muestra vegetal.
4. MARCO TEORICO:
Reino: Plantae
División: Magnoliophyta
Clase: Magnoliopsida
Subclase: Rosidae
Orden: Fabales
Familia: Fabaceae
Género: Phaseolus
Especie: Phaseolus dumosus
Cuadro 1: taxonomía del frijol Piloy
Figura 1. Frijol Piloy
No lo puedo colocar debajo del texto
El frijol “Phaseolus dumosus” es una especie de la familia de las leguminosas
“Fabaceae” cultivada por sus semillas y por el c ontenido alto de proteínas y
medio en aceites. Se encuentra cultivado en las áreas de Guatemala donde
se encuentra en forma silvestre, entré la vertiente de la cordillera volcánica y
los bosques húmedos característicos por su clima subtropical. También en
algunas áreas de México y parte norte de América del Sur “Colombia”. En
Guatemala existen registradas 12 especies de Phaseolus de las cuales 5 se
utilizan como cultivos y parte de la alimentación diaria de los guatemaltecos,
cuyas características representan resistencia, mejoramiento nutricional y
alimenticio a nivel mundial. Es una especie en peligro de extinción ya que se
cree que es endémica de Guatemala, por lo tanto se encuentra libre entre la
vegetación cerca de las áreas pobladas del país. (2)
Dependiendo del tipo de frijol, su porcentaje sobre el contenido de proteínas
que contienen van de un 14% a 23%, donde poseen en mayor cantidad los
aminoácidos “lisina, fenilalanina y tirosina”, y poseen una deficiencia de los
aminoácidos “metionina y cisteína” que son característicos por ser
aminoácidos azufrados. (2)
Como Leininger, todas las proteínas contienen Carbono, Hidrogeno,
Nitrógeno y Oxígeno, y algunas contienen Azufre, Fósforo, Hierro, Zinc y
Cobre como elementos adicionales. Se pueden dividir en dos clases
dependiendo de su composición: Proteínas Simples y Proteínas Conjugadas.
De las pruebas para proteínas podemos sacar características cualitativas y
cuantitativas dependiendo de los grupos funcionales que poseen y los
aminoácidos específicos que se encuentren localizados en la muestra
vegetal. (1)
Pruebas para la determinación de aminoácidos utilizadas en el laboratorio:
Prueba de Hihnidrina:
Se utiliza un agente oxidante poderoso o un agente reactivo común,
para localizar alfa-aminoácidos. Solo reacciona con sustancias que
contienen un pH entre 4 – 8. La prueba de positiva cuando la sustancia
presenta coloración azul o violeta intensa. (4)
Prueba Xantoproteíca:
Se utiliza ácido nítrico para localizar la formación de nitro derivados
aromáticos. La prueba de positiva denotando un colora naranja en la
muestra. Indicando la presencia de aminoácidos aromáticos. (4)
Prueba de Sulfuro:
Se utiliza la aplicación de un medio alcalino como el acetato de plomo,
los Thioaminoácidos son detectados, debido a la aparición de un
precipitado de sulfuro de plomo o azufre. (4)
Hay una relación exponencial entre una luz transmitida por medio de una
sustancia y su concentración, así como también entre la longitud del cuerpo
a la que atraviesa la luz y su transmisión llamada la Ley de Lambert y Beer.(6)
PROPIEDADES DE LAS CADENAS LATERALES EN LOS AMINOACIDOS:
Cálculos:
% Humedad = {[454.32- 409.70] / [454.32]} *100
% Humedad = 9.82
% Perdida Tamizada = {[409.70-270.08]/[409.70]} *100 = 34.08 %
Hidrolizados
Aminoácidos Grupo R Salino Acuoso
Ácido Básico Ácido Básico
Triptófano Aromático X X
Aromático X X
Tirosina
Hidroxibenceno
Fenilalanina Aromático X X
Cisteína Thiol x X
Histidina Imidazol X
Cuadro 5. Distribución de aminoácidos en hidrolizados de la muestra (Piloy).
Fuente: Datos obtenidos en el laboratorio de Bioquímica, edificio T-8,
FAUSAC.
Figura 5. La reacción general entre la ninhidriana y los aminoácidos que
poseen un grupo amino libre, en la que el resultado final es el Purpura de
Ruhemann cuya presencia en las muestras analizadas se observó de un color
violeta, confirmando la presencia de alfa-aminoácidos.
Fuente: Cromlab.es
Cálculos:
Salino acuoso: 8.3/10 = 0.83
Acuoso acido: 8.2/10 = 0.82
Triptófano: 9.2/10 = 0.92
Tirosina: 9.0/10 = 0.90
Cisteína: 2/10 = 0.20
Histidina: 2/10 = 0.20
Agregar lo que dice en la practica de cromatografía sobre afinicad de los
eluventes de la fase móvil y estacionaria y relacionarla con los aminoácidos
de lab de química organica no tengo la practica
La presencia de tirosina en las muestras se pudo observar mejor al realizar la
prueba Xantoproteica en comparación a la cromatografía, pues en dicha
prueba se presentó un cambio de color en la muestra a anaranjado debido a
que la tirosina es un aminoácido en cuya estructura se encuentra un anillo
bencénico. En cambio, en la placa cromatografía el color de la muestra de
tirosina se visualizó de color rosado pálido. En cuanto a la cromatografía
realizada para los extractos salino acuoso de 0.83 y acuso acido de 0.82 se
asemeja al valor de Rf de la tirosina que es de 0.90.
6. CONCLUSIONES:
• En el análisis de proteínas se debe conocer la especie que se va a
trabajar para tener datos más específicos de una especie. Se debe contar
con un debido tratamiento de la muestra vegetal, como secado, molido y
tamizado, en la cual durante todo este proceso nosotros tuvimos una pérdida
de 184.24 g de nuestra muestra de frijol Piloy aparte se debe tener cuidado
para no se debe contaminar con otras sustancias ajenas a la especia para
evitar datos erróneos en el estudio de la muestra vegetal.
• Como las proteínas cuentan con grupos con características opuestas
en una misma estructura “acido - base”, se debe hacer diferente proceso para
tener datos a comparar, ya que cada proteína cuenta con una solubilidad
diferente que puede ser aumentado o disminuido dependiendo el efecto que
tenga la muestra vegetal sobre diferente extracción de proteínas. Al realizar
nuestro estudio de proteínas las dos pruebas dieron resultado positivo, sin
obtener resultados cuantitativos ya que la prueba era cualitativa.
• Durante una hidrolisis “rompimiento de los enlaces peptídicos” es
esencial tomar en cuenta que cada aminoácido posee propiedades únicas
debido a la diferencia que se encuentra en la estructurara de los grupos R y
que ciertos aminoácidos se pueden destruir con los tres tipos de hidrolisis
distintos “acida, alcalino y por enzimas”. Se dio un mejor resultado al obtener
aminoácidos es estado acuoso ya que en nuestro hidrolizado salino solo se
obtuvo solo el aminoácido Cisteína que contiene un grupo Thiol. Por la
interacción de grupos iónicos de las proteínas con los iones de las sales.
• La Cromatografía en capa fina es muy utilizada por su gran rapidez y
versatilidad, ya que cuenta con una forma más rápida a los demás tipos de
cromatografía. Dando el análisis de la solubilidad de los aminoácidos y su
respectiva polaridad. Terminar de explicar con la práctica de orgánica
• Cada proteína al contar con características variables entre sí, se puede
reflejar la absorción de energía dependiendo de los electrones a niveles
energéticos más elevados, dando una interpretación más detallada sobre los
fenómenos que se dan en este tipo de moléculas orgánicas. En el estudio
concluyo en que las proteínas en estado acuoso son mayor que en estado
salino ya que los pequeños iones de las sales no tienen mayor interacción
con los grupos iónicos de las moléculas proteicas, lo cual no favorece la
solubilidad.
7. BIBLIOGRAFIA
8. ANEXOS
Anexo 1. Harina de Frijol Piloy. Anexo 2. Centrifugadora
Fuente: Grupo 5
Fuente: Grupo 5
.
Anexo 5. Hidrolisis salina de proteínas. Anexo 6. Neutralización de Hidrolizados
Fuente: Grupo 5
Fuente: Grupo 5
Fuente: Grupo 5