Encabezado: ADN 1

Extracción de ADN

Mirtha Luz Medina Alejos, Arroyo Figueroa

Universidad Privada San Pedro

Mayo 29 del 2018

Nota

Biología, Profesor: Mg.Jose Ignacio Castro Barrueto, Escuela Obstetricia, Facultad de

Ciencias de la Salud, Universidad San Pedro

La correspondencia del informe será dirigido al Mg.Jose Ignacio Castro Barrueto

Universidad San Pedro, Av. Huiracocha, Chimbote

 Encabezado: ADN 1

INTRODUCCION

La práctica la pudimos realizar en una cocina normal, como se puede realizar en un laboratorio de
un centro. La extracción de ADN requiere hacer varias series de etapas básicas. En primer lugar
tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la
célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último
hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se
precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se
desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el
ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la
solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.El sido desoxirribonucleico o
ADN (DNA) es la molécula que guarda el código genético de todas las células. Sin importar que
el organismo sea multicelular o unicelular, eucariota o procariota, todos tienen el DNA como
vehículo de su código genético
Muchas de las técnicas de bióloga molecular incluyen algún tipo de manipulación del material
genético. Estos procedimientos han logrado adelantar hasta tal grado el conocimiento-to del sigo
genético, que ya es posible clonar organismos enteros. Los procedimientos iniciales eran largos y
tediosos y podan pasar varios das antes de saber con certeza que se había logrado obtener DNA
en calidad y cantidad suficiente para poder manipularlo. Además algunos de los reactivos usados
para estos procesos son tóxicos y mutanticos. Hoy da podemos obtener suficiente DNA de buena
calidad en unas horas.
Durante el laboratorio de hoy estaremos utilizando un método rápido para aislar DNA a partir de
tejidos animales. Este se llama "DNeasy Tissue Kit" y es producido por QIAGEN. Este usa
tecnóloga avanzada de membranas de silicato para purificar rápidamente DNA celular total sin
usar extracciones orgánicas ni precipitación con etanol.
El sistema permite una lisis directa seguida de fijación selectiva de DNA a la membrana. Los
contaminantes e inhibidores enzimicos son removidos por centrifugación. Luego de la lisis, el
procedimiento toma unos 20 minutos. La lisis se logra usando proteínas K. Luego se ajusta el pH
con amortiguadores para lograr máxima fijación de DNA a la membrana, durante una corta
centrifugación. Los contaminantes restantes son removidos en dos lavados y el DNA es eludo en
agua o amortiguador. El resultado es DNA listo para usar.
El tamaño de los fragmentos de DNA obtenidos varan entre los 0.1 a 50 kb, predominando
fragmentos de ~ 30 kb de largo. Estos pueden ser usados para PCR (reacción en cadena de
polimerasa), Southern Blotting, RFLP (para determinar presencia de genes marcadores,
tipificación de tejidos), etc.
La cantidad máxima de tejido para lograr aislar DNA vara, dependiendo del tipo de dicho tejido.
En caso de los tejidos animales, la cantidad máxima es de 25 mg. Si se usa bazo, se reduce a 10
mg porque este tejido es extremadamente denso.
 Encabezado: ADN 1

OBJETIVOS:
 Realizar la extracción de ADN
 Observar la estructura fibrilar del ADN.
 Establecer la relación entre el proceso de extracción y propiedades quimico-fisicas del
ADN

FUNDAMENTO TEORICO:
La presente propuesta se fundamenta en el análisis de ADN de cada una de las características y
causas que se presenta en las personas que necesitan que le den por diagnosticado un problema ya
sea una enfermedad o un virus en el cuerpo.
El acido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN es un tipo de ácido nucleído,
una macromolécula que forma parte de todas las células. Contiene la información genética usada
en el desarrollo y el funcionamiento de los organismos vivos conocidos y de algunos virus, y es
responsable de su transmisión hereditaria.
Desde el punto de vista químico, el ADN es un polímero de nucleótidos, es decir, un poli
nucleótido. Un polímero es un compuesto formado por muchas unidades simples conectadas
entre si, como si fuera un largo tren formado por vagones. En el ADN, cada vagón es un
nucleótido, y cada nucleótido, a su vez, está formado por un azúcar.
El ADN contiene la información genética de un organismo, se encuentra en el núcleo y en las
mitocondrias de la célula. Esta información es importante porque es transmitida a las células hijas
para que se conserve el linaje y el funcionamiento adecuado de un tejido u órgano, si hay alguna
mutación podría poner el riesgo el funcionamiento de los mismos. También se transmiten las
características fenotípicas de un organismo
La función que tiene el ADN es que contiene toda la información desde antes de que nazcamos,
desde cómo vamos a ser hasta las enfermedades que vamos a padecer en el futuro
 Encabezado: ADN 1

MATERIALES:
 10 gramos de hígado de pollo
 Na Cl 2 M
 Desoxicolato de sodio al 20% o detergente
 Alcohol etílico al 96º
 Agua corriente
 Anaranjado de acridina
 Arena neutra 50gr ( la arena se lava en ácido sulfúrico varias veces y luego se enjuaga en
agua destilada repetidas veces hasta lograr su neutralidad)
 Vaguetas de vidrio
 Morteros
 Vasos de precipitación
 Embudos, pipetas, gasa
 Microscopios
 Licuadora
 Encabezado: ADN 1

PROCEDIMIENTO:
1. Triturar 10 gr de hígado de pollo (fresco) en 50 cm3 de agua de caño. Puede realizarse
mediante un abatidora o con mortero con arena lavada. Con ella se consigue romper las
membranas citoplasmáticas y que los núcleos queden sueltos.
2. Filtrar por 5 veces por una tela el triturado para separar los restos de tejidos que hayan
quedado por romper.
3. Añadir al filtrado un volumen igual a NaCl al 2M. Este medio es hipertónico y produce el
estallido o ruptura de la membrana nuclear, quedando libre la fibra de cromatina.
4. A continuación se añade 1gr de desocicolato de sodio, o 1gr de detergente común y
corriente. La acción del detergente es formar un complejo con las proteínas y separarlas
del ADN.
5. Añadir mediante un pipeta 50ml de alcohol de 96º, hay que hacerlo en forma que el
alcohol resbale por las paredes del vaso y se formen dos capas. En la interface precipitada
el ADN por lo que se debe introducir una varilla de vidrio sobre la que se van a adherir
unas fibras blancas visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupación de
muchas fibras de DNA.
6. Tomar una muestra de las fibras blancas que se han adherido a la varilla y colocarlo sobre
una lámina porta objetos, agregarle una o dos gotas de anaranjado de acridina, dejar por
unos minutos hasta que se seque. Luego observar al microscopio a mayor aumento.
7. Con la ayuda del microscopio tratar de ubicar una estructura racimosa. Dicha estructura
no es mas que DNA condensado en la cromatina, que se ha liberado al explotar el núcleo.
RESULTADOS:
 Encabezado: ADN 1

DISCUCION:
Ante todo la práctica a todo el grupo nos pareció muy significativa y de gran aprendizaje, y en la
totalidad del grupo entramos un poco en discordia al realizar la experiencia porque al llevar las
placas al microscopio nos estábamos todos de acuerdo .Si se quiere realizar una extracción
"profesional" puedes agregar enzimas que lo puede hacer mejor, y el producto que resultaría seria
pura.
 Cuando añadas el alcohol frío debes hacerlo de forma que resbale por las paredes del tubo
para que forme una capa sobre el filtrado. Para realizarlo mejor puedes utilizar la varilla
de vidrio o una cucharilla para ayudarte.
 Si se expone por mucho tiempo la muestra vegetal a rayos ultravioletas, esto provoca
daños sobre la estructura del ADN, o aplicar ciertos conservantes que puedan provocar
efectos sobre la cadena del ADN.
Fuente: Biología Celular y Molecular-Luis Felipe Jiménez / Horacio Merchant
CONCLUSION:
 Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN comenzaron
a salir, de un color blanco precipitado por sobre el alcohol (mezcla Heterogénea). Con un
alambre doblas y obtenemos y sacamos del tubo de ensayo el ADN. Si quieres conservar
el ADN puede dejarse secar sobre un papel de filtro.
 En caso de que el ADN no se pueda apreciar muy claramente. Tenemos que agitar el tubo
un poco para poderlo apreciarlo mejor.
 Si se tiene problemas con el filtro, que no está bien hecho y que no filtra bien, por lo tanto
hay que hacer otro. También puede haber complicaciones con la forma de poner el
alcohol de manera que cayera por las paredes del tubo de ensayo.
 Con esto podemos saber cómo es el procedimiento del extracto del ADN, así como si
estructura de una forma fácil y sencilla.

BIBLIOGRAFIA:

http://adncasero2011.blogspot.com/2011/11/marco-teorico.html

https://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_desoxirribonucleico

https://es.slideshare.net/johnnyocanabegabt/prctica-10-extraccin-de-adn