Práctica: Realización de un antibiograma

Es un método que se utiliza para determinar la sensibilidad de una cepa

bacteriana frentea los distintos agentes antimicrobianos (antibióticos), además
vamos a comprender elconcepto de antibiótico y su especificidad de acción
sobre determinadas bacterias yconocer el concepto de cepa sensible y
resistente.
Materiales:
- Jeringa con suero fisiológico estéril (solución de ClNa al 0,9%)
- Placa “problema” (cultivada en agar-sangre)
-Discos de diferentes tipos de antibióticos (4-6 tipos distintos)
- Tubos de ensayo
- Placa agar
-sangre
- Regla milimetrada
- Asa de Platino
- Rotulador de vidrio
- Cinta adhesiva
- Pinzas finas
- Contenedor con lejía
- Tablas para determinación de resistencias

Desarrollo de la Práctica:
Antes de empezar son necesarias una serie de recomendaciones a tener
encuenta durante toda la actividad: No se puede tocar nada que vaya a
tomar contacto con la muestra biológica con las manos (depresor, asa de
siembre,torunda,...) para evitar contaminaciones. Una vez utilizado este
material ha de ser eliminado en un contenedor especial. Estos contenedores
serán llevadosposteriormente a una planta de tratamiento de residuos
biológicos, donde seránincinerados. Todos los materiales o muestras tomadas
deben estar perfectamenteidentificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del
tipo de muestra. Las placassembradas deben sellarse con cinta adhesiva al
finalizar para evitar sucontaminación o la nuestra. Al acabar la práctica, se
deben lavar bien las manos.
1.- Siembra del microorganismo
-Tomamos con una jeringa una pequeña cantidad de suero
f i s i o l ó g i c o e s t é r i l ( 2 - 5 ml) y lo vertemos en un tubo de ensayo. A partir de
la placa problema, que contiene colonias del microorganismo cuyasensibilidad
a los antibióticos queremos determinar, tomamos una muestraSUPERFICIAL
de UNA SOLA COLONIA con un asa de siembra.Introducimos el asa de
siembra con la muestra en el tubo y agitamos el asa para realizar una
suspensión de las bacterias en el suero fisiológico. Al acabar echamosal
contenedor de residuos el asa de siembra.Introducimos una asa de henle
estéril en el tubo y se pasa muy suavemente por lasuperficie de una placa
agar-sangre nueva.

En esta ocasión realizaremos una siembra en césped, es decir, por toda la

superficie de laplaca, para conseguir que crezca bacterias de modo masivo. Es
importante que la siembrasea SUPERFICIAL, sin profundizar en el medio de
cultivo.Se tapa la placa y se rotula indicando en el nombre, grupo y
fecha y marcando con una Ala tapa (antibiograma).

2.- Colocación de los discos de antibiótico

Tomamos ahora con las pinzas –NUNCA CON LAS MANOS- un disco de cada
uno de losantibióticos que se facilitan (cada disco es un papel de filtro que
contiene una
suspensiónd e u n o o v a r i o s a n t i b i ó t i c o
s a l a c o n c e n t r a c i ó n t e r a p é u t i c
a ) . Se deposita el disco suavemente sobre la placa, sin tocar con la
superficie con las
pinzas.E s m u y i m p o r t a n t e q u e e l d i s c o c o n t a c t e c o n e l m e
d i o d e c u l t i v o e n u n ú n i c o s i t i o . Realizamos la misma
operación con los otros cinco antibióticos, colocando los nuevosdiscos
separados de los anteriores, formando un hexágono.
3.- Incubación y observación

Se llevan las placas a incubar a 37ºC(temperatura corporal), durante

24 horas. Tras este período se recogen las placas y
SIN ABRIR se observa el crecimiento bacteriano.

4.- Medición del halo de inhibición

Por la parte trasera de la placa incubada mediremos el diámetro de los halos de inhibiciónque
se han formado alrededor de los discos de antibiótico a los que la bacteria “problema es
sesible” Anota los datos en la representación de la figura 2, indicando con un número del 1 al
6, elantibiótico colocado en el disco y dibujando la presencia o ausencia de halos y su tamaño
en mm.
5.- Traslada los datos a la tabla siguiente:

Con ayuda de las tablas que se te proporcionan determina si la bacteria es

sensible (S) o resistente (R) a cada antibiótico y anótalo en la tabla, en las
columnas correspondientes.
6. Conclusiones
Mediante un antibiograma podemos establecer qué tratamiento será el más
adecuado
parae l p a c i e n t e a f e c t a d o p o r u n a i n f e c c i ó n p o r l a b a c t e r i
a que estemos estudiando.
¿Qué son los halos de inhibición?
Alrededor de cada disco de antibiótico, las bacteriass e n s i b l e s
a ese antibiótico no habrán podido reproducirse y, por
lo tanto, no formacolonias, dejando un hueco alrredeor del
disco.
¿Por qué se miden los halos? No basta con ver si las bacterias han crecido o
no alrededor del antibiótico para saber si son o no sensibles. Hay que
saber “cuánto” no han
crecido.S o l o s i e l h a l o d e i n h i b i c i ó n e s s u f i c i e n t e m e n t e g r
a n d e , u s a n d o e l a n t i b i ó t i c o a l a concentración terapéutica –la que
el antibiótico puede alcanzar en el lugar de la infecciónsin que se produzcan
efectos tóxicos o secundarios- se dice que la bacteria es sensible alantibiótico.
Por eso se mide el efecto y se consultan las tablas.