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sesquiterpénicas de extracto
diclorometánico en hojas de
Ambrosia arborescens Mill.
“Altamisa o Marco”
TRABAJO DE
INVESTIGACIÓN
0
Determinación de las lactonas sesquiterpenicas en extracto diclorometanico de hojas deAmbrosia
arborescens Mill. “altamisa o marco” TRABAJO DE
INVESTIGACIÓN
UNIVERSIDAD NACIONAL
MAYOR DE SAN MARCOS
(Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA)
TRABAJO DE INVESTIGACIÓN
TÍTULO:
INTEGRANTES:
ASESOR:
2017
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA/ UNMSM 2016 - II
Determinación de las lactonas sesquiterpenicas en extracto diclorometanico de hojas deAmbrosia
arborescens Mill. “altamisa o marco” TRABAJO DE
INVESTIGACIÓN
INDICE
INTRODUCCIÓN ......................................................................................................................................... 1
ANTECEDENTES ........................................................................................................................................ 2
JUSTIFICACIÓN .......................................................................................................................................... 3
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA .................................................................................................. 4
2. HIPÓTESIS .......................................................................................................................................... 4
3. OBJETIVOS ......................................................................................................................................... 4
3.1 OBJETIVO GENERAL ....................................................................................................................... 4
3.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS ............................................................................................................. 4
4. MARCO TEÓRICO .............................................................................................................................. 5
4.1 ASPECTO BOTÁNICOS .............................................................................................................. 5
4.2 CARACTERISTICAS TAXONOMICAS ........................................................................................ 7
4.2.1 CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA ......................................................................................... 8
4.3 COMPOSICIÓN QUÍMICA DE LA PLANTA ................................................................................. 8
4.3.1 SESQUITERPENOS .......................................................................................................... 11
4.3.2 SESQUITERPENLACTONAS ................................................................................................... 14
............................................................................................................................................................... 14
............................................................................................................................................................... 16
4.4 RELACIÓN ESTRUCTURA ACTIVIDAD DE LACTONAS SESQUITERPÉNICAS ............................ 18
4.4.1 ACTIVIDAD TERAPEUTICA ........................................................................................................ 18
4.4.2 ACTIVIDAD FARMACOLOGICA................................................................................................... 18
4.1.3 ACTIVIDAD CITOSTÁTICA .......................................................................................................... 19
4.1.4 ACTIVIDAD ANTITUMORA (ANTICANCERÍGENA, ANTINEOPLÁSTICA).................................. 19
4.1.5 ACTIVIDAD BACTERICIDA Y FUNGICIDA ................................................................................. 19
4.1.6 ACTIVIDAD ANTIINFLAMATORIA .............................................................................................. 20
4.1.7 ACTIVIDAD FITOTÓXICA ............................................................................................................ 20
4.5 PROPIEDADES MEDICINALES AMBROSIA ARBORESCENS ........................................................ 21
5 METODOLOGÍA ................................................................................................................................ 21
5.1 MATERIALES .................................................................................................................................. 21
5.2 MATERIAL VEGETAL ...................................................................................................................... 22
5.3 REACTIVOS .................................................................................................................................... 22
5.4 EQUIPOS ......................................................................................................................................... 23
5.5 MÉTODOS ...................................................................................................................................... 23
5.5.1 LOCALIZACIÓN DEL DESARROLLO DEL PROYECTO ........................................................ 23
1
Determinación de las lactonas sesquiterpenicas en extracto diclorometanico de hojas deAmbrosia
arborescens Mill. “altamisa o marco” TRABAJO DE
INVESTIGACIÓN
ANTECEDENTES
Los cronistas españoles hacen referencia a este recurso señalando que los
aborígenes siempre la llevaban consigo dándole muchas aplicaciones para la
cura de sus males. La utilizaban para embalsamar cadáveres. (8)
JUSTIFICACIÓN
2. HIPÓTESIS
3. OBJETIVOS
4. MARCO TEÓRICO
f) Distribución (11)
A) Familia
B) Género
Las especies de Ambrosia son hierbas o arbustos poco altos, aunque en alguna
especie alcanzan los 4 m. Tienen tallos erectos e híspidos, que se presentan en
matas densas de hasta medio metro de diámetro con ramificaciones basales. La
Phylum: Spermatophyta
Subdivisión: Angiospermae
Clase: Magnoliopsida(Dicotiledoneas)
Subclase: Asteridae
Superorden: Asteranae
Orden: Asterales
Familia: Asteraceae
Subfamilia: Asteroideae
Tribu: Heliantheae
Género: Ambrosia
Especie: A. arborescens
Nombre botánico: Ambrosia arborescens Mill.
Nombre común: Altamisa, Marco
4.3.1 SESQUITERPENOS
Biosíntesis de sesquiterpenoides
4.3.2 SESQUITERPENLACTONAS
5 METODOLOGÍA
5.1 MATERIALES
Papel toalla
Parrilla porta placas cromatográficas
Pera de bromo PIREX 125 mL
Pipeta Pasteur 3 mL
Pipetas de 5mL, 10 mL
Placa de vidrio para cromatografía d 20x20 cm2;5x10 cm2
Platos de loza
Probeta 100 mL
Propipeta
Soporte universal
Tazón
Tocuyo
Tubos de ensayo 5mL y 10mL
Vacuette
Viales
5.3 REACTIVOS
Diclorometano
Alcohol 70°
Alcohol 96°
Reactivo de Legal
Reactivo Baljet
Silicagel 60G/Merck
5.4 EQUIPOS
5.5 MÉTODOS
Eliminación de la clorofila
El extracto etanólico seco 1.2 g será tratado con solución de acetato de plomo
10 % y con gotas ácido acético para la precipitación de clorofila. Esta mezcla
se llevará a filtrar usando papel filtro, posteriormente se procederá a decantar
la mezcla con solución diclorometano, produciéndose dos fases reforzándolo
con cloruro de sodio. La fase acuosa se llevará a baño maría para la
evaporación del solvente que dará una solución amarillenta representada la
muestra libre de clorofila. (27) (28) (29) (30)
Se usará un tubo pequeño que contenga VIII gotas del extracto libre de
clorofila, donde se añadirá 2ml de la mezcla de Baljet A Y Baljet B, que dará
como resultado una reacción positiva rojo oscuro. (31) (32)
Método de extracción
Métodos de coloración:
a. Preparación de Baljet
b. Preparación de Legal
c. Preparación de hidroxamato férrico
RECOLECCION DE ALTAMISA
SECADO CORTE
DESINFECCIÓN
CUCHILLAS
MÉTODO
SOXHLET
METODO
SECADO DEL EXTRACTO
DESTILACION
ELIMINACION DE CLOROFILA
RECONOCIMIENTO DE LACTONAS
SESQUITERPÉNICAS
6. PARTE EXPERIMENTAL
A) RECOLECCIÓN
B) DESINFECCIÓN DE LA PLANTA
Fig. 11: Lavamos la planta con 2 gotas de lejía para su desinfección, separamos las
hojas del tallo y dejamos secar las hojas y tallos a temperatura ambiente.
C) SECADO
D) CORTE CUCHILLAS
Tras obtener la muestra seca de Altamisa, se procedió al triturado con cuchillas, para
tener mayor cantidad de superficie de contacto con el solvente extractor.
Fig 13: Muestra seca de Altamisa Fig 14. Muestra seca y triturada
A) MACERACION
B) FILTRACION
C) SECADO
Fig 20: Extracción doble con 10 mL cada Fig 21: Eliminación del diclorometano por
una de diclorometano y decantación de evaporación en baño maría.
la fase acuosa.
E) PREPARACION DE BALJET
A) METODO SOXHLET
B) EXTRACCIÓN DE LA CLOROFILA
Fig 37. Al filtrar con papel filtro se obtuvo dos porciones una más oscura y
otra más clara, por lo cual estas dos fases las colocamos por separado
en peras de decantación a la cual añadimos 20 mL de diclorometano cada
una, decantamos en colocándolos en matraces y realizamos la
cromatografía con estas dos fases acuosas para confirmar si se extrajo la
clorofila y sobre todo cual de ambos extractos es más visible las lactonas.
D) SELECCIÓN DE ENSAYOS
Antes de decidir cuál tipo de extracto usar y cuál método de extracción de
clorofila utilizar, se procedió a hacer ensayos previos en TLC. El primer sistema
de solventes fue 1:9 (acetona:diclorometano), en donde se revelan la línea azul
brillante característica de lactonas sesquiterpénicas. En las dos primeras
Realizamos el sembrado de las fases acuosa y orgánica, notamos que el primer extracto
la clorofila aún está presente, pero se está dirigiendo hacia la parte superior y se logra
notar con más claridad una mancha azul lo cual es la lactonas
365 nm 254 nm
Parte
Parte orgánica 1
acuosa 2
FRACCION
2
C D
H) PROCESO DE FRACCIONAMIENTO
1
2
J) PROCESO DE FILTRADO
K) PROCESO DE CRISTALIZACION
L) REVELADO UV
FRACCION 1
FRACCION 2
7. RESULTADOS:
ESPECTROSCOPIA UV
ESPECTROSCOPÍA IR y RMN
8 .DISCUSIÓN
Las lactonas sesquiterpénicas (LS) están usualmente dentro de los tricomas glandulares
(44) , así para extraer de mejor manera LS se procedió a secar la muestra y triturar para
ener una mayor superficie de contacto con el solvente a elección, se suele usar
cloroformo (45), acetona (46), así también diclorometano (44), utilizamos el diclorometano
por tener buenos resultados en otras inestigaciones.
Tras el ensayo de Baljet se determinó la presencia de LS, con una coloración amarilla
naranja, tal y como se puede evidenciar en otros trabajos (32,6,31). Los cuales hacen
referencia también a lactonas sesquiterpénicas reveladas tras tornarse color amarillo con
el reactivo mencionado.
Se obtuvieron 4 fracciones (f) eligiéndose las mayoritarias f1 y f2, las cuáles fueron
eluídas con DCM. Se determinaron los respectivos espectros UV de las fracciones f1 y f2.
9 .CONCLUSIONES
1. Ascencio A. efectos de los extractos: Artemisia absinthium Linneo (ajenjo), Ambrosia Miller
(altamisa) y Nicotiana undulata Ruiz & Pavón (qamasairi),en larvas de Eurysacca quinoae
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ANEXOS
Ensayo de Baljet
Prueba de Legal
Hidroxamato férrico
ESPECTRO UV FRACCION 1
ESPECTRO UV FRACCION 2