Cultivo in vitro de Cactáceas

con fines de conservación ex situ

Peter Seemann, Claudia Rodríguez y Gloria Jara

Facultad de Ciencias Agrarias
Universidad Austral de Chile

2º Simposio de Horticultura Ornamental

Talca, 06 y 07.12.2007
 INTRODUCCIÓN

Antecedentes Generales.

ƒ La familia Cactaceae es de orígen americano

ƒ Se distribuye de Canadá a Tierra del Fuego, con
mayor diversidad en México
ƒ Existen ± 86 géneros y unas 2000 especies
descritas
ƒ En Chile hay aproximadamente 160 especies,
145 son endémicas, la mayoría amenazadas
ƒ Existe una demanda creciente por especies de
cactáceas con interés científico y para cultivo
ornamental
Objetivos

Establecer cultivos in vitro de once especies de

cactáceas nativas o introducidas

Inducir organogénesis para una propagación

masiva

Conservar el recurso ex situ

 Micropropagación de diversas especies de cactáceas

Medio de
Autor Especie Fitohormonas M (1)
cultivo
Minocha y Mehra, 1974 Neomammillaria Murashige 10 - 20 mg/L 2,4 - D +1 – 2, mg/L KIN C (2)
prolífera y
Skoog
(MS)
Mammillaria
Johnson y Emino, 1979a elongata MS 2 -10 mg/L 2,4 - D +1 – 2 mg/L 2iP C
10 mg/L 2iP + 1 mg/L AIA B (3)
60 mg/L ANA o AIB R (4)
Epiphyllum
Lazarte et al.,1982 chrysocardium MS 50% 1 mg/L BAP + 0,1 mg/L ANA B
0,01mg/L AIA R
Sin hormonas R
Epithelantha
Starling y Hutson, 1984 micromeris MS 1 mg/L BAP + 0,1 mg/L ANA B
Martínez - Vázquez y Mammillaria san -
Rubluo, 1984 angelensis MS 1 mg/L BAP con o sin 0,01 mg/L ANA B
Leuchtenbergia
Starling, 1985 principis MS 10 mg/L BAP + 0,1 mg/L ANA B
Coryphantha
Smith et al., 1991 macromeris MS 10 mg/L BAP + 0,1 mg/L 2,4 - D CyB
Sin hormonas ByR
Dabekaussen et al., 1991 Sulcorebutia alba MS 1.5 0,25 – 1,0 mg/L BAP B
(Continuación)
Medio de M
Autor Especie Fitohormonas (1)
cultivo
Pérez et al., 1998 Mammillaria formosa MS 1 mg/L BAP + 0,1 mg/L ANA B
Mammillaria obscura 0,5 – 1,0 mg/L AIA o AIB R
Nyctocereus
Pérez et al., 1998 serpentinus MS 2 mg/L BAP B
0,5 mg/L AIA R
Coryphantha
Bhau, 1999 elephantidens MS 2 mg/L 2,4 - D + 1 mg/L KIN C
0,5 mg/L 2,4 - D +1 mg/L KIN B
Sin hormonas R
Malda et al., 1999 Obregonia denegrii MS 0,5 mg/L BAP + 0,1 mg/L ANA B
Coryphantha minima 5 mg/L AIA o AIB R
Llamoca - Zarate et al., 1999 Opuntia ficus - indica MS 0,5 mg/L 2,4 - D + 0,2mg/L KIN C
2 – 3 mg/L BAP + 0,0 – 0,5 mg/L
Mata et al., 2001 Turbinicarpus laui MS ANA B
MS 50% Sin hormonas R
Pelecyphora
Pérez y Dávila, 2002 aselliformis MS 2 mg/L BAP B
Pelecyphora
strobiliformis
Pérez et al., 2002 Carnegiea gigantea MS 2 mg/L BAP B
Pachycereus pringlei 1 mg/L BAP B
Stenocereus thurberi 1 mg/L AIB R
 Especies en estudio

Especie Distribución Conservación

Copiapoa chaniaralensis Ritter endémica, IIIª R. Rara
Copiapoa hypogaea Ritter endémica, IIIª R. En peligro
Neoporteria napina (Phil.) Bckbg. endémica, IIIª R. En peligro
Eriosyce sandillon (Remy.) Phil. Los Andes, IVª, Vª y RM Vulnerable

Opuntia berteri (Colla) A.E.Hoffm. Vª R. hasta Arequipa, Fuera de peligro

Perú
Opuntia cylindrica (Juss. ex Lam.) S-Ecuador , N-Perú s.i.
DC,
Cereus peruvianus (L.) Mill. Perú s.i.

Trichocereus sp. N-Chile, Bolivia, s.i.

Argentina
Loxanthocereus aureispinus Argentina, Uruguay s.i.
(F. Ritter) F. Buxbaum
Rhipsalidopsis gaertneri (Regel) Brasil s.i.
Lindgr.
Mammillaria elongata DC México, Texas s.i.
Copiapoa chaniaralensis

Copiapoa hypogaea
 Eriocyse sandillon

Neoporteria napina
 Opuntia berteri

Trichocereus sp.

Opuntia cylindrica
Cereus peruvianus

Rhipsalidopsis gaertneri
Loxanthocereus aureispinus

Mammillaria elongata
Formas de Propagación de Cactáceas

Propagación sexual:

•Semillas

Propagación vegetativa

• Esquejes,
• Rebrotes o hijuelos,
• Frutos,
• Injertos,
• Cultivo de tejidos in vitro.
Propagación mediante semillas
Propagación vegetativa

Esquejes:

• De cladodios
individuales

• De brazos
Secciones de cladodios:

•Fracción mínima: una areola o

yema a cada
lado

•Edad optima: un año, máxima

de tres años

Secciones de tallo:

• ápices
Rebrotes:

•Decapitación de tallos
viejos.

• Rebrote natural.
Frutos:

•Frutos en desarrollo son capaces de

diferenciación a partir de sus areolas.
Injertos:

• Unión de tejidos de dos o más

especies de cactáceas.

•El patrón nutre al injerto que suele

ser de una especie delicada.

• La planta injertada crece más que

sobre un sustrato.

•Aplicación en cactos difíciles de

cultivar en sus propias raíces.
Cultivo de Tejidos:

Mediante explantes

• Provenientes de semillas.

• Provenientes de tejido
(areolas) de plantas adultas.

• Provenientes de plantas
cultivadas in vitro

Opuntia cylindrica
Areolas o yemas:

- Presencia en prácticamente
toda la superficie de la planta.

- Ápices de brotes con dos o

mas areolas.

- Areolas individuales.
 MATERIAL Y MÉTODOS
Tejido:

Proveniente de areolas de 3 a 10 mm de diámetro por 5 mm de

espesor.

Especies:

ƒ Copiapoa chaniaralensis Ritter,

ƒ Copiapoa hypogaea Ritter,
ƒ Neoporteria napina (Phil.) Bacbg.,
ƒ Eriosyce sandillon (Remy.) Phil.,
ƒ Opuntia berteri (Colla) A.E.Hoffm.,
ƒ Opuntia cylíndrica (Juss. ex Lam.) DC,
ƒ Cereus peruvianus (L.) Mill.
ƒ Trichocereus sp.,
ƒ Loxanthocereus aureispinus (F. Ritter) F. Buxbaum,
ƒ Rhipsalidopsis gaertneri (Regel) Lindgr.
ƒ Mammillaria elongata DC,
Preparación y desinfección del tejido:

ƒ Lavado con cepillo suave,

ƒ corte de espinas,
ƒ Desinfección con Captan (2,7 g/L)+ Benlate (1,8 g/L), EtOH
(70%, 5 sec.), NaOCl (1% c.a., 10 min.), 3 x H2O estéril.

Siembra:

ƒ Medio M.S., 20 g/L sacarosa, 2 g/L Gelrite,

0,1 mg/L ANA + 1,0 mg/L BAP (A)
0,1 mg/L ANA + 2,0 mg/L BAP (B)

Incubación:

ƒ Tº ambiental 22º C
ƒ Fotoperíodo 16 horas luz
ƒ Intensidad lumínica ± 50 µmol/m2s1 (2000 a 4000 lux)
Evaluación:

ƒ Sobrevivencia: %
ƒ Formación de callo: % e intensidad
ƒ (Brotación: %, N° y longitud)
ƒ (Enraizamiento: %, N° y longitud)
ƒ (Pardeamiento (%) y vitrificación(%))
 RESULTADOS

Evolución de la sobrevivencia y morfogénesis en dos

especies de Copiapoa en dos medios de cultivo

Variable SV FC BR NB LB
Medio A B A B A B A B A B
Especie Semana

Copiapoa chaniaralensis

4a. 50 75 0 0

Copiapoa hypogaea

12a. 85 80 100 31 59 63

16a. 55 65 100 31 100 77 5,8a 1,0 b 1,0a 0,5 b

SV = Sobrevivencia (%); FC = Form. de callo (%); BR = Brotación (%)

NB = Número de brotes; LB = Largo de brotes (cm)
Formación de callo y brotes de Copiapoa hypogaea

Callo

Brotes
 Sobrevivencia de explantes de Eriocyse sandillon y de

Loxanthocereus aureispinus en función del medio de cultivo y el tiempo.

Eriocyse sandillon: Loxanthocereus aureispinus:

Variable Sobrevivencia (%) Variable Sobrevivencia (%)

Medio A B Medio A B

Semana Semana

4a. 100 91 4a. 70 75

8a 55 36 8a 70 75

12a. 0 0 12a. 0 0
 Sobrevivencia y morfogénesis en explantes de
Neoporteria napina

Variable SV FC BR
Medio A B A B A B
Semana

4a. 90 95 63 75 0 0

8a. 45 25 50 57 0 0
 Sobrevivencia y morfogénesis in vitro de explantes de
Mammillaria elongata

Variable SV FC BR NB LB
Medio A B A B A B A B A B

Semana

8a. 70 60 86 100 0 0

12a. 70 60 100 100 36 50 5,9a 3,2 b 0,9a 0,9a

20a. 70 60 100 100 86 100

Mammillaria elongata DC.
 Sobrevivencia, formación de callo y brotes en
explantes de Opuntia berteri

Variable SV FC BR NB
Medio A B A B A B A B
Semana

8a. 85 75 56 44 88 87
12a. 85 75 56 44 88 93 8,2a 3,6 b
16a. 85 75 56 44 94 93
Opuntia berteri (Colla) A.E.Hoffm.
 Sobrevivencia, formación de callo y brotación en
Opuntia cylindrica.

Var. SV FC BR NB
Medio A B A B A A
Sem.
4a. 75 10 35 10 93 1,5
8a. 75 10 40 10 100 4,5
Sobrevivencia y morfogénesis en Trichocereus sp.

Variable SV FC BR NB LB

Medio A B A B A B A B A B

Semana
1,1 0,5 1,8
12a. 60 75 42 79 92 100 a b b 3,5a
Regeneración de Cereus peruvianus en medio A
después de 6 meses
Regeneración de Rhipsalidopsis gaertneri

Brotes

Raíces

Callo
 CONCLUSIONES

•Es posible lograr morfogénesis in vitro a partir de areolas

en miembros de la familia Cactaceae.

•No obstante, se presentan diversos grados de respuesta,

dependiendo de la especie.

•En las especies Copiapoa chaniaralensis, Eriosyce

sandillon y Loxanthocereus aureispinus no hubo respuesta
a la formación de callo bajo las condiciones estudiadas.

•En Neoporteria napina solo se logró la inducción de callo.

• La utilización de 0,1 mg/L de ANA y 1,0 mg/L de BAP resultó
exitosa para la formación de brotes en Copiapoa hypogaea,
Mammillaria elongata, Opuntia berteri, Opuntia cylindrica,
Trichocereus sp., Cereus peruvianus y Rhipsalidopsis
gaertneri,

• Una eficiente formación de raíces sólo fue posible en

algunas de las especies en estudio, al utilizar las
combinaciones de fitorreguladores empleadas.

• La aplicación de técnicas de cultivo de tejidos in vitro con

fines de propagación y conservación representa, por tanto,
una alternativa factible de usar en cactáceas, aunque se
requiere de mayor investigación para cada especie en
particular.
¡Muchas gracias!