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PRACTICA REACCIONES ANTIGENO-ANTICUERPO 2017

I. INTRODUCCIÓN

La reacción antígeno-anticuerpo (Ag-Ac) es la piedra angular de la respuesta inmune y


se pone de manifiesto in vitro por la formación de un precipitado o aglutinación de
partículas (eritrocitos). El acoplamiento estructural entre las macromoléculas está dado
por varias fuerzas débiles que disminuyen con la distancia, como los puentes de
hidrógeno, las fuerzas de Van Der Waals, las interacciones electrostáticas y las
hidrofóbicas. El reconocimiento Ag-Ac es una reacción de complementariedad, por lo
que se efectúa a través de múltiples enlaces no covalentes entre una parte del antígeno
y los aminoácidos del sitio de unión del anticuerpo. La reacción se caracteriza por su
específicidad, rápidez, espontaneidad y reversibilidad: 1

 Específicidad: capacidad de los anticuerpos para distinguir entre dos ligandos de


estructura similar. La unión dada por la especificidad es muy precisa y permite
distinguir entre grupos químicos con diferencias mínimas.
 Rapidez: la velocidad con que ocurre la primera etapa de la reacción Ag-Ac es
del orden de milésimas de segundo, y está limitada únicamente por la difusión.
La segunda etapa, que es más larga, incluye todas las manifestaciones que se
presentan como consecuencia de la interacción, tales como precipitación,
aglutinación, neutralización, etcétera.
 Espontaneidad: la reacción Ag-Ac no requiere energía adicional para efectuarse.
 Reversibilidad: dado que la reacción se debe a fuerzas no covalentes, es
reversible y, en consecuencia, se ve afectada por factores como la temperatura,
la proporción de Ag-Ac, el pH y la fuerza iónica. En pruebas de laboratorio que
usan la aglutinación como punto final, la alteración de las condiciones físicas del
sistema puede incrementar o reducir la sensibilidad de la prueba.

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II. METODOLOGIA
MATERIALES Y REACTIVOS

- Lámina portaobjetos - Sangre humana


- Hisopos - Suero- anti A
- Algodón - Suero- anti B
- Alcohol - Suero- anti D
- Lanceta

PARTE EXPERIMENTAL

- Primero se limpió la lámina portaobjetos con alcohol, se dejó secar.


- Con ayuda de la lanceta se dejó tres gotas de sangre sobre la lámina
portaobjetos.
- Se añadió una gota de los reactivos (Anti A, anti B, anti D).

III. RESULTADOS

Anti-A Anti-B Anti-D

Obs: La muestra sin reactivo


Anti-A

- + +

Idealmente las pruebas de rutina para determinar el grupo sanguíneo ABO deben
hacerse en dos partes: primero buscando en los eritrocitos la presencia de antígenos A
y/o B en la membrana (prueba globular o directa), y segundo, buscando en el suero o
plasma los anticuerpos anti-A y/o anti-B que correspondería tener esa persona (prueba
sérica o inversa).12
INTERPRETACIÓN
(-): Sin aglutinación. Rh-
(+): Reacción de aglutinación. Rh+
Las aglutinaciones evidenciadas fueron observadas a los 3min de incluir el reactivo a
la muestra sanguínea por lo que se debe a:

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1. La muestra de sangre del individuo es del grupo Rh+ es decir que se produjo la
reacción de aglutinación a los 3 minutos con el suero anti-D, donde puede
observar un pequeño cambio de coloración por la agregación de anticuerpos
junto con la aparición de pequeños “grumos”.

2. Ejemplo: Si la muestra de sangre es del grupo AB aglutina con el suero anti B y


si la muestra de sangre es del grupo 0, si no aglutina ni con el suero anti anti-B.

3. Si el individuo es del grupo Rh+, entonces es receptor de sangre del grupo Rh+
y del grupo Rh-.Pero fuera caso contrario si un individuo es de grupo sanguíneo
Rh- entonces solo es receptor de sangre del grupo Rh- y no del grupo Rh+

CONCLUSIÓN

El grupo sanguíneo del individuo es Rh+, debido a la reacción de aglutinación con el


anti- D.

IV. CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son las diferencias y semejanzas entre aglutinación y
precipitación? ¿Tienen igual sensibilidad? 2,3
Los precipitados inmunológicos son complejos insolubles formados por la unión de
anticuerpos (precipitinas) y antígenos (precipitinógenos) que se encuentran en solución.
Para la formación de una malla de precipitado se requiere que tanto las precipitinas
como los precipitinógenos sean al menos bivalentes. Esta reacción tiende a ocurrir más
rápido con el aumento de la temperatura, aunque la precipitación más completa es
obtenida usualmente a temperaturas bajas (0-4ºC). Está determinada por el fenómeno
de zona, lo cual quiere decir que la máxima precipitación ocurre en un punto o zona de
equivalencia que para poder ser visible es necesario determinar las proporciones
óptimas de los reactivos.
Las reacciones de aglutinación consisten en la agregación de material en partículas,
tales como células o material sintético por los anticuerpos llamados aglutininas. La
reacción toma lugar sobre la superficie de las partículas que poseen el antígeno
disponible para los sitios de unión específica de los anticuerpos. La aglutinación es un
ejemplo de una reacción inmune secundaria.

2. ¿Qué es el fenómeno de prozona y cuáles pueden ser las causas que lo


expliquen?

El fenómeno de prozona produce reacciones falsas negativas de aglutinación a


concentraciones elevadas de anticuerpo como resultante de la mala formación de
estructuras de enrejado molecular y por el bloqueo estérico por el exceso de anticuerpo,
el uso de diluciones seriadas estándar elimina esta dificultad. (2) El efecto “prozona” se
debe a que en exceso de Ac se forman preferentemente complejos Ag-Ac solubles
(como los formados en la zona de exceso de Ac en la curva de precipitación). 4

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3. Compare las variantes metodológicas de aglutinación en tubo, placa plana


y microplaca. Ventajas y desventaja de cada una.

- Técnicas en tubo
Es una técnica que proporcionan un menor número de reacciones falsas
negativas/positivas, se pueden añadir aditivos para potenciar la reacción: LISS,
enzimas, AGH, permite la manipulación. Entre sus desventajas la aglutinación es
inestable, requiere manipulación y lectura cuidadosa, utiliza una cantidad importante de
hematíes y suero.

- Aglutinación en placa plana


Es una prueba rápida y específica para despistaje. Los valores positivos deben ser
interpretados clínicamente y/o evaluados con pruebas más sensibles, como son las
aglutinaciones en tubo.

- Técnicas en microplacas
Es una técnica donde la aglutinación se produce en los pocillos y los reactivos están
unidos a la superficie de los estos. Permite automatización y se usan para grandes
series de muestras, ahorro de tiempo de técnico, rapidez, ahorro de reactivo y poco
utillaje preciso. Existen métodos manuales, semiautomatizados y automatizados.
Utilizan antígenos o anticuerpos inmovilizados. 5

4. Enumere aplicaciones concretas de la aglutinación directa.

- Aglutinación de los eritrocitos del grupo A, B, AB por antisueros antiA, antiB, antiAB
respectivamente
- Aglutinación de los eritrocitos RH positivos por el antisuero anti-D
- Aglutinación del antígeno brucelar por anticuerpos anti-Brucella 6

5. ¿Qué es la hemoaglutinación pasiva o indirecta? ¿Qué tipo de glóbulos


rojos pueden usarse? Enumere algunos métodos de estabilización de los
glóbulos rojos y la marcación con distintos tipos de antígenos.

La hemaglutinación indirecta (HAI), también llamada hemaglutinación reversa pasiva,


se basa en la propiedad que tienen los anticuerpos de producir aglutinación específica
en presencia de glóbulos rojos sensibilizados con los correspondientes antígenos. En el
suero existen anticuerpos inespecíficos (heterófilos) que son capaces de aglutinar
glóbulos rojos de distintas especies. Su presencia se investiga enfrentando el suero con
GR no sensibilizados. Los anticuerpos interferentes se eliminan mediante tratamiento
con 2-mercaptoetanol. 7

Este tipo de aglutinación se lleva a cabo utilizando eritrocitos recubiertos de antígenos,


o anticuerpos acoplados de manera espontánea (adsorción pasiva) o mediante un
acoplamiento químico, utilizando diversas sustancias para este fin, tales como Acido
tánico Bencidina bisdiazoada (BDB), Cloruro crómico (CrCIs), Glutaraldehído,
clorurocianúrico entre otros.8

Algunas de las substancias que se absorben para la hemaglutinación:

• Antígenos de Escherichia coli.


• Antígenos de Yersinia.
• Lipopolisacáridos de Neisseria meningitidis.

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• Antígenos de Toxoplasma.
• Derivado proteico purificado (DPP).
• Endotoxina de especies de Micoplasma.
• Virus.
• Antibióticos, especialmente penicilina.
• Ovalbúmina.
• Albúmina sérica bovina.
• Haptenos.
• Antígenos de polen.
• Gonadotrofina coriónica.

6. LOURDES

7. ¿Qué son los anticuerpos incompletos?


Son los anticuerpos tipo IgG (o incompletos) que son incapaces de producir la
aglutinación de los eritrocitos por si solos, sin embargo son capaces de adherirse a su
superficie tanto in vivo como in vitro (pueden requerir de adyuvantes para aglutinar
eritrocitos), capaces de fijar el complemento sin llegar a producir la hemolisis de los
eritrocitos.
Estos anticuerpos tipo IgG pueden reaccionar con un suero de conejo en el que existen
anticuerpos antiglobulina humana del tipo IgM (completos). El resultado de esta reacción
es una aglutinación de los eritrocitos.9
La prueba de Coombs para antiglobulinas permite detectar los anticuerpos de tipo
bloqueante, las globulinas y el complemento que se encuentran fijados a los antígenos
del eritrocito en los fenómenos de isosensibilización.10
8. ¿Qué es la isosensibilización por Rh? ¿Cómo puede producirse?
La isosensibilización es un proceso que se produce en el sistema inmunológico de la
madre como reacción frente a agentes extraños, se conoce como isoinmunización
Rhesus, enfermedad Rh (D), incompatibilidad Rhesus,
enfermedad Rhesus, enfermedad hemolítica RhD. Se forman anticuerpos en la sangre
materna que destruyen los glóbulos rojos del bebé, apareciendo la “enfermedad
hemolítica fetal”, que puede traer consecuencias graves en la salud del niño.
Esta enfermedad ocurre cuando los anticuerpos anti-Rh pueden atravesar la placenta y
producen la destrucción de los glóbulos rojos del bebé: La causa más común de
incompatibilidad Rh es la exposición de una madre Rh negativa por sangre fetal Rh
positivo durante el embarazo o el parto. Como consecuencia, la sangre de la circulación
fetal puede filtrarse en la circulación materna y, después de una exposición significativa,
se produce una sensibilización que conduce a la producción de anticuerpos maternos
contra el antígeno Rh externo. Una vez producidos, los anticuerpos maternos de
inmunoglobulina G (IgG) persisten de por vida y pueden cruzar libremente desde la
placenta hasta la circulación fetal, donde forman complejos antígeno-anticuerpo con
eritrocitos fetales Rh positivos y finalmente se destruyen, lo que produce una aloinmune
fetal.11
La presencia o la ausencia de antígeno Rh, tiene una importancia fundamental en las
reacciones de transfusión, paternidad y fenómenos de isosensibilización. Hay 8
fenotipos de Rh sanguíneos que se determinan por su reacción con tres aglutininas

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séricas específicas (anti-Rho, anti-rh´, anti-rh¨). Los anticuerpos Rh son aglutininas


salinas (completas) o bien anticuerpos “bloqueantes” (incompletos) y estos anticuerpos
son del tipo G, que se utilizan en los procedimientos para pruebas de RH y con mayor
frecuencia en reacciones de isosensibilización o autoinmunes. 10

V. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
1. Bautista J. Factores que intervienen en la reacción antígeno-anticuerpo y
clasificación antigénica eritrocitaria. Rev Med Inst Mex Seguro Soc. 2005; 43 (1):
9-12
2. Garcia V. Reacciones de aglutinación. Gac Méd Méx. 2004; 140 (3): 50- 52
3. Duke J. Anestesia (Secretos). 3 ed. Colorado: Editorial Elsevier. 2006
4. UBA. Guía de técnicas inmunológicas. [sede web] Facultad de Medicina. Buenos
Aires. 2008. Disponible en:
http://www.fmed.uba.ar/depto/microbiologia/guia01.pdf
5. Buesa C. Pruebas de compatibilidad, ¿qué técnica emplear? XIV Jornadas de
Medicina Transfusional. Hospital Universitario Central de Asturias. [Web]
[Acceso 22 de noviembre 2017] Disponible en:
https://www.asturias.es/Astursalud/Ficheros/AS_Calidad%20y%20Sistemas/AS
_Calidad/SEGURIDAD%20DEL%20PACIENTE/GHAS%202011/Jornadas/Prue
bas%20compatibilidad_DraBuesa.pdf
6. Aguilar v. Reacciones de aglutinación. Gac Méd Méx Vol. 140, Suplemento No.
3, 2004

7. Prueba de hemaglutinación indirecta para la detección de anticuerpos contra el


Trypanosoma cruzi [Pagina Web]. [Acceso 22 de noviembre del 2017].
Disponible en: http://www.wiener-
lab.com.ar/DesignFiles/ImagenesHomePortal/Chagas/6377_chagatest_hai_sp.
pdf.
8. Aguilar V. Reacciones de aglutinación. Gac Méd Méx. 140(3). 2004
9. García B, Rubio F., Crespo M. Técnicas de análisis Hematológico. Editorial
Paraninfo. Ed 1,2015:pág. 422
10. Genaro A. Remington: The science and practice of Pharmacy. Editorial
Panamericana. Ed 20th, Vol 1. 2000: pág. 655
11. Salem L., Singer K. Medsacape Education. [Actualizado noviembre 2017]. Sitio
web: https://emedicine.medscape.com/article/797150-overview
12. Arbeláez C. Sistema de grupo sanguíneo ABO. Medicina & Laboratorio, Vol15,
Números 7-8, 2009 : pág. 339