Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
UNIDAD # 3
NOMENCLATURA
Durante el desarrollo de la espectroscopia de absorción ha surgido alguna confusión en la
terminología de tal forma que para un concepto o una propiedad existen diferentes
nombres en las obras de los distintos autores. Recientemente se ha hecho un considerable
esfuerzo por la American Society for Testing Materials (ASTM) para crear una nomenclatura
uniforme, los términos y símbolos que se señalan están basados en estas
recomendaciones.
ESPECTRO VISIBLE
Región que corresponde a la zona coloreada que comprende radiaciones de luz entre 400-
750 nm de longitud de onda ó 4 000 - 7500 ángstrom, es la región más pequeña del
espectro electromagnético.
La sensación de color es una respuesta a una serie de estímulos físicos, químicos y
biológicos del ciertas partes de la retina del ojo para la energía radiante de las determinadas
longitudes de onda, los colores del espectro son visibles simples, o sea que no se
descomponen en otros colores, la luz blanca es la superposición de las radiaciones del
espectro visible. La luz blanca contiene radiación de todas las longitudes de onda de la
región visible, la luz blanca es una mezcla compleja de fotones de energías diferentes. Es
posible seleccionar la luz de una sola longitud de onda (radiación monocromática) a partir
de la luz blanca (por ejemplo, con un prisma), si la luz blanca se priva de uno de sus colores
(generalmente, por absorción), la luz blanca resultante aparecerá como el complemento de
ese color, es decir, si de la luz blanca se separa la luz azul (450 a 480 nm), la radiación
resultante será amarilla.
ESPECTRO VISIBLE
2.- Los métodos espectrofotométricos, miden esta relación a una determinada longitud de
onda, el instrumento se llama Espectrofotómetro opera en la región del visible, ultravioleta o
infrarrojo.
Los métodos espectrofotométricos no se limitan al uso de la luz visible, sino que también
incluye a aquellos que emplean energía radiante de otras regiones del espectro
electromagnético, como el ultravioleta o el infrarrojo. Se ha desarrollado métodos de
análisis colorimétricos y espectrofotométricos para la mayoría de elementos y compuestos
orgánicos de muchas clases. Los métodos que se basan en la absorción de la luz sirven
perfectamente para determinar constituyentes de las muestras desde cantidades mínimas
hasta cantidades de 1 % aproximadamente, pero no se usan con tanta frecuencia para
analizar cantidades mayores (macrocantidades) de sustancias. Por ejemplo: es mejor
determinar un analito usando métodos de valoración cuando su concentración es elevada.
La determinación colorimétrica de la muestra implica aplicar las diluciones necesarias para
que la concentración del analito se reduzca al intervalo en el cual se aplica los métodos
colorimétricos.
En espectrofotometría hay dos formas principales de analizar, una de ellas es empleando el
color natural de un ión o compuesto. Las sustancias muy coloridas como el permanganato,
el bicromato, y las tinturas orgánicas se determinan con facilidad. La otra forma es utilizando
la radiación ultravioleta e infrarroja para la determinación espectrofotométrica de sustancias
(especialmente de sustancias orgánicas), que no presentan color en la región visible (y por
consiguiente no absorben la luz visible) pero si absorben fuertemente en las regiones
espectrales del infrarrojo o del ultravioleta.
Los iones o moléculas que tienen poco o ningún color natural pueden determinarse
espectrofotométricamente después de hacerlas reaccionar con un reactivo apropiado que
las convierta en producto muy colorido.
Con respecto a la región visible la solución tendrá un color que corresponde a las longitudes
de onda que la solución no absorbe, es decir el color que observamos es el color
complementario del color de la luz que absorbe. Por ejemplo, una solución absorbe la luz
azul del espectro a 475 nm el color visible de la solución es el color amarillo que es el color
complementario del azul.
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
400 - 435 Violeta Verde amarillo
----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------
A) Comparación Directa
Se mide las soluciones patrón y la muestra desconocida mediante la observación de
estas soluciones y se determina la solución patrón que es semejante a la
desconocida; ésta, por tanto, contiene la misma cantidad del constituyente que se
desea determinar que el patrón que se asemeja. Debido a que el método esta
basado en el criterio subjetivo del operador, los errores personales pueden llegar a
ser considerables.
B) Comparación Indirecta
En este método el “color” se mide como porcentaje de transmitancia o absorbancia
en un aparato usando algún tipo de detector (fototransformador) en lugar del ojo.
Cada serie de patrones se mide en tandas, y las lecturas, o alguna función con ella
relacionada, se representa en función de la concentración obteniéndose así una
curva de calibrado. El problema preparado en la misma forma que los patrones, se
mide también y la lectura del instrumento se convierte en concentración con auxilio
de la curva de calibración o por métodos analíticos de cálculo.
El método está exento de los errores personales de comparación visual de color. Es posible
obtener una exactitud del orden del 0.5 % de error relativo. El método, por tanto, se puede
comparar favorablemente con los mejores métodos gravimétricos y volumétricos de análisis
y es incluso superior a esos métodos para la determinación de pequeñas cantidades del
constituyente deseado.
ANALISIS QUÍMICO II Ingeniería Biotecnológica 41
a) El reactivo que forma color debe presentar cierta selectividad o especificidad para el
constituyente que se analiza. Las sustancias extrañas no deberían impedir la reacción de
formación del color, ni dar otros productos coloreados. Estos interferentes deben ser eliminados
mediante un cambio de condiciones, tales como pH, temperatura, disolventes, si esto no
sucede, se debe proceder a enmascarar o separar el elemento interferente.
b) El color que forma debe ser estable para que permita realizar repeticiones de las mediciones
c) La formación del color deberá ser rápida. Cuando se forma la especie coloreada se debe
estudiar y tener en cuenta los siguientes factores:
* Efecto del tiempo algunas reacciones de formación de color son más rápidas, otras son
muy lentas, además algunas especies coloreadas experimentan “desvanecimientos “debidos
a la descomposición por la luz y/o por el calor o por reposo. Lo ideal es que la reacción de
formación de color sea rápida, y que las especies coloreadas sean estables en el tiempo, de
modo que no sea necesario realizar el análisis en un tiempo prefijado, y que permita
realizar mediciones repetidas.
Para encontrar la curva de absorción se irradia a la solución coloreada con energía radiante de una
gama de longitudes de onda de tal manera que a cada longitud de onda se mide su valor de
absorbancia o porcentaje de Transmitancia, esta energía absorbida se traduce en un espectro de
absorción que es obtenido en función de los valores Absorbancia o porcentaje de Transmitancia frente
a las longitudes de onda, en la curva se ubica el máximo pico que corresponde a un máximo de
absorbancia el cual corresponde a una longitud de onda determinada, esta longitud de onda a la cual
ANALISIS QUÍMICO II Ingeniería Biotecnológica Ing Armando Salinas Sánchez 42
la especie coloreada absorbe con mayor intensidad la energía radiante, se llama longitud de onda
máxima, óptima, analítica o de trabajo.
Amarillo Azul
Azul Rojo
Las variables comunes que influyen en el espectro de absorción de una sustancia incluyen
el tipo de disolvente, el pH de la solución, la temperatura, concentración elevada de
electrólitos y la presencia de sustancias que interfieren, se deben conocer los efectos de
estas variables así como las condiciones que se han seleccionado para el análisis, de modo
que la absorbancia del analito no sea afectada materialmente por variaciones incontroladas,
de pequeña magnitud.
Verificar la Ley de Beer que relaciona las absorbancias y las concentraciones, es decir,
la cantidad de energía que absorben son función lineal de las concentraciones.
Permite encontrar las concentraciones de la muestra problema mediante el método
llamado gráfico
ANALISIS QUÍMICO II Ingeniería Biotecnológica Ing Armando Salinas Sánchez 44
Las concentraciones de los Estándares de acuerdo al error fotométrico no deben ser ni muy
diluidas ni muy concentradas, estas deben tener valores entre 20 - 60% Transmitancia.
4. Análisis de la muestra
La muestra problema tiene un tratamiento conocido de:
Pesada de la muestra,
disolución
separación de interferentes,
formación de la especie coloreada bajo las mismas condiciones de los estándares.
El reactivo formador de color debería ser específico o muy selectivo para el analito.
Las sustancias extrañas no deberían impedir la reacción de formación del color, ni
dar otro análogo (espectro de absorción).
Para obtener la solución problema final esta debe encontrarse a una concentración
apropiada, de tal manera que su valor este comprendido en el intervalo de las
soluciones patrones (aproximadamente debe presentar un 37 % de transmitancia).
El problema consiste en lo que debe hacerse, en la práctica, cuando las soluciones
preparadas para la medida tienen una transmitancia fuera del intervalo de exactitud
máxima.
Escogiendo un tamaño de muestra y un volumen de solución (por tanto, de
concentración), del trayecto óptico y de la absortividad, puede hacerse unas
variaciones de las condiciones, a fin de que se verifique la medida dentro de los
límites óptimos.
Los distintos métodos para obtener las condiciones de medida son los siguientes:
1.- La solución puede medirse con una celda de un trayecto óptico mayor, por
ejemplo, 5 ó 10 cm. en vez de 1 cm.
2.- Puede utilizarse una muestra mayor, en el mismo volumen
3.- Puede disolverse una muestra del mismo tamaño pero en un volumen menor
5. Cálculo de Resultados
Para determinar la concentración del analito existen dos métodos:
a) Método gráfico
El instrumento sea fotocolorimetro o Espectrofotómetro arroja valores de Absorbancia o
porcentaje de transmitancia y se calcula la concentración de la muestra en la curva de
calibrado, a continuación se toma en cuenta las disoluciones efectuadas, el peso inicial de
la muestra para luego calcular la concentración del componente activo.
b) Método analítico
Se emplea la relación de la ley combinada de Beer
a1 = A1 //b x c1 a2 = A2 / b x c2 a3 = A3 / b x c3
a m = a1 + a2 + a3