PRACTICA Nº 03.

EXAMEN QUIMICO DE ORINA

I. OBJETIVOS:
➢ Realizar el estudio cualitativo y cuantitativo de sustancias anormales
de la orina.
➢ Reconocer los valores de proteínas, hemoglobina, glucosa, cetonas,
Bilirrubina y urobilinógeno que contiene la muestra de orina.

II. INTRODUCCION.
Realizar un examen químico a una muestra de orina nos permite determinar un estudio
cualitativo, semicuantitativo o cuantitativo de algunas sustancias que pueden estar
presentes en una muestra de orina y cuya presencia a niveles elevados es indicador de
alguna patología.

Teniendo en cuenta en esta práctica que la toma de muestra es muy importante, para la
determinación de ciertas sustancias que se ven directamente influenciadas por la
alimentación elevando sus niveles de concentración en la sangre y por ende en orina.

Para realizar los estudios químicos de la orina existen los métodos convencionales como:
para la determinación cualitativa de proteínas el método de Héller, para la determinación
semi cualitativa de glucosa el método de Benedict y para la determinación cualitativa de
acetona el método de Legal.

Sin embargo actualmente existe un método más sensible y rápido que se realiza con tiras
reactivas (Labstix, Multistix y otras) que contienen espacios con diferentes reactivos
específicos, indicadores y buffers (pH, glucosa, hemoglobina, etc).

En la presente practica emplearemos los métodos convencionales y el método habitual

para determinar sustancias anormales en la orina como: proteínas, glucosa, cuerpos
cetonicos, etc.)

III. FUNDAMENTO TEORICO.

La presencia de sustancias anormales en la orina nos indica la presencia de algún
patología. Dentro de estas sustancias podemos encontrar.

1. PROTEINAS.
El test para proteínas se hace en orina entera, pero para pruebas semi-cuantitativas de
proteína urinaria deben realizarse en el sobrenadante de orina centrifugada ya que las
células suspendidas en orina normal puede producir una estimación falsamente alta
de proteína.
Normalmente, sólo pequeñas proteínas del plasma son filtradas al glomérulo y son
reabsorbidas por los túbulos renales. Sin embargo, una cantidad pequeña de
proteínas del plasma filtradas y proteína secretada por el nefrón (proteína de Tamm-
Horsfall) pueden encontrarse en orina normal.
 La excreción de la proteína total normal generalmente no excede 150 mg/24 horas o
10 mg/100 ml en cualquier muestra simple. Más de 150 mg/24 horas se define como
proteinuria. Proteinuria > 3.5 g/24 horas son severas y conocidas como síndrome
nefrótico.
Las tiras detectan proteína por producción de color del colorante indicador, Azul de
Bromofenol que es muy sensible a la albúmina pero detecta globulinas y pobremente
proteína de Bence-Jones.
La precipitación a través de calor es un mejor método semicuantitativo, pero no es
una prueba muy sensible.
El test del ácido sulfosalicílico es una prueba de precipitación más sensible. Puede
detectar albúmina, globulinas, y proteína de Bence-Jones a concentraciones bajas.
En términos gruesos, resultados positivos trazas (que representa una apariencia
ligeramente opalescente en orina) es equivalente a 10 mg/100 ml o aproximadamente
150 mg/24 horas (el límite superior normal). 1+ corresponden a aproximadamente
200-500 mg/24 horas, un 2+ a 0.5-1.5 g/24 horas, un 3+ a 2-5 g/24 horas, y un 4+
representan 7 g/24 horas o mayor.

2. GLUCOSA.
Menos de 0.1 % de glucosa normalmente es filtrado por el glomérulo y aparece en
orina (< 130 mg/24 hr).
Glucosuria (exceso de azúcar en orina) generalmente significa diabetes mellitus. Las
tiras que emplean la reacción de glucosa oxidasa para detectarla son específicas para
glucosa pero pueden perder otros azúcares reductores como galactosa y fructosa. Por
esta razón, se procesan las orinas de recién nacidos e infantes rutinariamente para
azúcares reductores por métodos diferentes a glucosa oxidasa (como el Clinitest, una
prueba modificada de la reducción de cobre de Benedict).
El valor normal de la glucosa en orina es de100 mg/dl (tira reactiva = 0). Su aparición
puede deberse a dos factores: 1) Disminución de la reabsorción tubular (tubulopatía
proximal) y 2) Niveles sanguíneos que superan el umbral renal, como la diabetes
mellitus u otros estados hiperglucémicos.

3. CETONAS.
Las cetonas aparecen en la orina cuando existe un metabolismo anormal o disminuido
de carbohidratos, por lo cual es muy común hallarlas durante el ayuno, el ejercicio
prolongado o cuando existen vómitos reiterados. La única patología en la cual la
cetonuria tiene importancia práctica es la diabetes mellitus.

4. SANGRE.
La tira reactiva positiva indica tres posibilidades:
1) Hematuria, 2) Hemoglobinuria o 3) Mioglobinuria. La observación del sedimento en
la muestra de orina centrifugada orientará el diagnóstico. Si hay eritrocitos estamos en
presencia de hematuria; en caso contrario deberá realizarse el diagnóstico diferencial
entre hemoglobinuria y Mioglobinuria para el cual podrá utilizarse cualquiera de los
métodos que se enumeran a continuación: 1) Se centrifuga una muestra de sangre y si
el plasma es rosado existe hemólisis; por lo tanto, en orina hay hemoglobina(Hb); si el
 plasma es claro en orina hay mioglobina; 2) Agregando sulfato de amonio(2,8 g) a 5 ml
de orina centrifugada, se espera5 minutos y se filtra. La Hb precipita y queda en el
papel; la mioglobina no precipita, por lo tanto pasa libremente a través del filtro.
La patología asociada a Mioglobinuria es el daño muscular severo, que puede ser
causado por convulsiones, ejercicio prolongado, shock eléctrico, politraumatismos
severos e hipertermia maligna, en especial si existe una miopatía preexistente. La
mioglobina es liberada por los músculos y es libremente filtrada por el riñón. Cuando
la cantidad filtrada de Hb o mioglobina es importante, puede desarrollarse
insuficiencia renal aguda por obstrucción tubular. La hemoglobinuria es secundaria a
crisis hemolíticas de cualquier etiología.

5. BILIRRUBINA.
La reacción positiva para la bilirrubina indica la presencia de enfermedades hepáticas.
La lectura de trazas de bilirrubina es suficiente para realizar una investigación en
sangre con enzimas hepáticas.

6. UROBILINOGENO.
El urobilinógeno está presente en orina cuando en la sangre hay aumento de
bilirrubina no conjugada, como ocurre en las anemias hemolíticas o en la hepatitis
grave, aunque ya casi no se toma en cuenta porque el urobilinógeno se oxida
rápidamente con el aire.

7. LEUCOCITURIA.
Se detecta por la acción de la estearasa citoplasmática leucocitaria que produce la
hidrólisis del reactivo de la tira y cambia el color.
Puede diagnosticarse un número anormal de leucocitos con un rango de sensibilidad
de 70%-80%. En orinas muy alcalina existe hemólisis de leucocitos, obteniéndose
falsos positivos.

8. NITRITOS.
La enzima reductasa bacteriana metaboliza los nitratos urinarios en nitritos. Si la orina
contiene un número importante de bacterias, por este método se podrá detectar
bacteriuria con una sensibilidad del 50%.Sin duda el examen microscópico es el mejor
método para diagnosticar leucocituria y bacteriuria. Falsos positivos y negativos de las
tiras reactivas Los factores más comunes que pueden alterar los resultados de las tiras
reactivas son los siguientes: valores extremos de pH y densidad urinarios, oxidantes,
antibióticos, ácido ascórbico, proteinuria, antisépticos y jabones.
IV. MATERIALES:
➢ Tubos de ensayo
➢ Muestra de orina
➢ Mechero
➢ Ácido nítrico concentrado
➢ Reactivo de Benedict
➢ Nitropruciato de sodio 5%
➢ Hidróxido de sodio 50%
➢ Ácido acético glacial
➢ Lugol
➢ Tiras reactivas

V. PROCEDIMIENTO.
1. Determinación cualitativa de proteínas:( Método de Héller).
Prueba de laboratorio para la determinación de proteinuria en la que la orina
se coloca en capa sobre ácido nítrico. La aparición de un anillo de precipitado
proteico en la interfase de los dos líquidos es un signo positivo.
Este método puede ser útil cuando sólo se dispone de una cantidad pequeña
de orina, pero no es tan sensible como las demás pruebas de precipitación.
También es muy difícil semicuantificar los resultados.

➢ RESULTADOS POSITIVOS FALSOS

Esta prueba resulta afectada por los fármacos que interfieren las pruebas de
calor y con ácido.
Concentraciones elevadas de ácido úrico y de
urea pueden dar resultados positivos falsos, pero estos obstáculos pueden
salvar diluyendo la orina y repitiendo la prueba.

➢ RESULTADOS NEGATIVOS FALSOS

Como esta prueba es muy sensible, las orinas diluidas pueden dar
resultados negativos. El uso de rutina de ácido nítrico concentrado en esta
prueba puede constituir una desventaja.
El procedimiento para la reacción del anillo de Robert es idéntico al de la
reacción de Heller, salvo que el reactivo para la primera está formado por una
parte de ácido nítrico concentrado y 5 partes de sulfato de magnesio saturado.

➢ SIGNIFICACIÓN CLÍNICA
La orina de personas sanas no contiene proteínas o sólo pequeñas cantidades;
normalmente el glomérulo evita el paso de estas de la sangre al filtrado
glomerular.
Alteraciones glomerulares causan el aumento de la permeabilidad de las
proteínas plasmáticas lo que ocasiona la proteinuria, que indica presencia de
proteínas en orina. La presencia persistente de proteinuria indica enfermedad
renal. Concentraciones elevadas de proteínas en líquido cefalorraquídeo (LCR)
pueden ser debidas a infecciones o a presión intracraneal elevada. El
 diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos
y de laboratorio.
➢ PROCEDIMIENTO:
● Colocar 1 ml de ácido nítrico concentrado en el fondo de un tubo de
ensayo.
● Cubrir el ácido con 1 ml de orina centrifugada, pero cuidado que ésta
se deslice lentamente por la pared del tubo, de este modo se forman
dos capas de líquido.
● La formación de un precipitado blanco en la unión de ambos líquidos
al cabo de tres minutos indica la presencia de proteína.
● Pude intentarse cuantificar la densidad del anillo formado.

RESULTADOS:

La formación de un anillo
blanco en la interfase del
ácido nítrico y la orina nos
demuestra una proteinuria.

2. Determinación semicuantitativa de glucosa (Método de Benedit)

El fundamento de esta reacción radica en que en un medio alcalino, el ion
cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del
grupo Aldehído del azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa
como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O).
El medio alcalino facilita que el azúcar esté de forma lineal, puesto que el
azúcar en solución forma un anillo de piranósico o furanósico. Una vez que el
azúcar está lineal, su grupo aldehído puede reaccionar con el ion cúprico en
solución.
En estos ensayos es posible observar que la fructosa (una cetopentosa) es
capaz de dar positivo. Esto ocurre por las condiciones en que se realiza la
prueba: en un medio alcalino caliente esta cetohexosa se tautomeriza
(pasando por un intermediario enólico) a glucosa (que es capaz de reducir al
ion cúprico).
 Los disacáridos como la sacarosa (enlace α (1 → 2) y la trehalosa (enlace
α(1→1), no dan positivo puesto que sus OH anoméricos están siendo
utilizados en el enlace glucosídico.
En resumen, se habla de azúcares reductores cuando tienen su OH anomérico
libre, y éstos son los que dan positivo en la prueba de Benedict.

➢ PROCEDIMIENTO:
● En un tubo de ensayo colocar 2.5 ml de reactivo de Benedict.
● Agregar 4 gotas de orina.
● Mezclar bien luego llevar a baño maría de agua hirviente por 5
minutos.
● Dejar enfriar espontáneamente.
GLUCOSA g/ 100ml
CC 0.0 0.25 0.5 1.0 1.5 2.0
COLOR Azul Verde Verde c/ pp Amarillo Marrón Anaranjado a
amarillo a Verde Roja
oliva
APARIENCIA (-) (±) (+) (2+) (3+) (4+)

➢ RESULTADOS.

La Acción reductora de la glucosa en

medio alcalino de sulfato de cobre
reduce el ión cúprico en cuproso el
cual precipita en forma de óxido de
color anaranjado.

Apariencia: (4+)

3. Determinación cualitativa de acetona (Metodo de Legal)

La prueba se basa en el principio de la prueba de Legal. El ácido acetoacético y
la acetona reaccionan con nitroprusiato sódico y glicina en un medio alcalino
para formar un complejo color violeta, que el bacteriólogo mediante una tabla
de comparación puede leer o el lector de tirillas detectar para determinar la
presencia de cetonas en la orina. La reacción es específica para el ácido
acetoacético y la acetona. No es interferida por el ácido beta-hidroxibutírico ni
por la presencia de glucosa, proteínas y ácido ascórbico en la muestra.
 La intensidad del color de anillo es directamente proporcional a la
concentración de acetona.

➢ INTERPRETACIÓN DE LA PRUEBA:
Valores de referencia: negativo (< 5 mg/dL). Las cetonas (ácido acetoacético,
beta-hidroxibutírico y acetona) aparecen en la orina cuando en el organismo
se produce un aumento de la degradación de las grasas por un aporte
energético insuficiente de hidratos de carbono. El predominio de la lipólisis
sobre la lipogénesis produce un aumento de los niveles de ácidos grasos libres
en el suero y, por su descomposición en el hígado, se forma más acetil
coenzima A, que puede ser utilizada por otros procesos metabólicos como el
ciclo del ácido tricarboxílico. Este exceso se convierte en ácido acetoacético,
que a su vez se transforma parcialmente en ácido beta-hidroxibutírico y de la
acetona.

➢ UTILIDAD CLÍNICA:
Desde el punto de vista clínico, la detección de cetonuria, sin ser exclusiva, es
particularmente útil en los pacientes con diabetes mellitus. La cetonuria se
encuentra muy asociada a la diabetes descompensada, pero también puede
ocurrir durante el embarazo, debido a dietas libres de carbohidratos, a
deshidratación ayuno, inflamación intestinal e hiperémesis.

➢ PROCEDIMIENTO.

● En un tubo de ensayo colocamos 3 ml de orina.

● Agregamos 0.3 ml de Nitropruciato de sodio al 2 %.
● Agregamos luego 1ml de hidróxido de sodio al 50 %.
● Agregamos III gotas de ácido acético glacial por las paredes del tubo.
● Las pruebas son positivas cuando se forma el añillo rojo vinoso.

➢ RESULTADOS.

4. Utilización de tiras reactivas.

La Tira Reactiva de análisis de orina es una prueba de detección rápida
para la detección de: Acido NoAscorbico,
se observaGlucosa,
la formación de Cetona,
Bilirrubina,
Peso. un anillo de color rojo, por tanto
la prueba es negativa.
➢ Procedimiento.
● Colocar orina en un tubo de ensayo.
● Introducir la tira reactiva.
● Retirar la tira escurriendo por las
paredes del tubo.
● Observar cambios de color.
BILIRRUBINA -

URUBILINOGENO Normal

CETONA -
GLUCOSA >100
PROTEÍNAS +
SANGRE -
NITRITOS -
PH 7
DENSIDAD 1.025
LEUCOCITOS 24
➢ Resultados.

VI. CONCLUSIONES.
 ➢ El examen químico de orina tiene la finalidad de detectar la presencia
de elementos que normalmente no están presentes en la orina.
➢ El examen de orina por medio de las tiras reactivas es un método muy
útil y practico; ya que puede usarse en la práctica diaria y obtener un
diagnostico presuntivo previo que se confirmará con un examen
microscópico.
➢ En esta práctica realizada con métodos convencionales y con las tiras
reactivas encontramos:
➢ Presencia de proteínas lo que puede deberse a un daño a nivel
glomerular.
➢ Glucosa en la orina siendo la causa una elevada concentración de
glucosa en la sangre (diabetes mellitus) y.
➢ La presencia de leucocitos que puede deberse a una infección
urinaria o inflamación de las vías urinarias.

VII. CUESTIONARIO.
Importancia de los nitritos en orina.
La base química de la prueba de nitrito es la capacidad de ciertas bacterias
para reducir el nitrato un constituyente normal de la orina, a nitrito que
normalmente no aparece en orina.
Por tanto la presencia de nitrito en la orina nos ayudará a detectar la
infección inicial de la vejiga (cistitis), porque los pacientes a menudo son
asintomáticos o tienen síntomas vagos que podrían no inducir al médico a
que solicite un urocultivo. Que como consecuencia de una cistitis no tratada
se puede llegar a una pielonefritis, al daño del tejido renal, deterioro de la
función renal, hipertensión e incluso septicemia.
También otro aspecto de importancia clínica es la monitorización de pacientes
con alto riesgo de infecciones urinarias y la evaluación de la
antibioticoterapia.