UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA EDUCACIÓN,

HUMANAS Y TECNOLOGÍAS

GUÍA DE TRABAJO EXPERIMENTAL

1. DATOS INFORMATIVOS:
CARRERA: BIOLOGÍA, QUÍMICA Y LABORATORIO

SEMESTRE: QUINTO No.

ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA Y FECHA: 2018-06-29

LABORATORIO

DOCENTE: MGS. ELENA URQUIZO

TITULO: Tinción de Gram

PROBLEMA:
Utilización de técnicas sencillas para la observación de microorganismos
MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES

 Mechero Bunsen o de Alcohol

 Asa de Siembra o aguja enmangada
 Pinzas
 Portaobjetos
 Palillos
 Microscopios
 Soporte de Tinciones
 Goteros
 Pinzas

REACTIVOS

 Muestras bacterianas de origen natural: Yogur, Sarro Dental, Suelo, etc.

 Agua destilada
 Aceite de inmersión
  Colorantes para Tinción: Solución de cristal Violeta Lugol Safranina Etanol
95%

PROCESO/MÉTODO:

I. prepara las muestras siguiendo estos pasos:

1. Con unas gotas de agua colocadas sobre un portaobjetos, disuelve una pequeña
cantidad de yogur con ayuda de un palillo higiénico. Haz lo mismo con la muestra de
sarro dental extraído de la boca de alguien.
2. Prepara una fina extensión (frotis), en otros portas, dejándolos secar.
3. Fija este frotis dándole varios pases a los portas sobre la llama del mechero, con la
muestra hacia arriba.

II Tiñe ahora los frotis fijados mediante los siguientes pasos:

1. Cubre ambos frotis con cristal violeta durante 3 min. Se retirará el colorante mediante
un suave lavado con agua, deslizando el agua sobre el porta, para non desprender la
muestra.
2. cubrir ahora con Lugol durante 1 min., y después se realizará otro lavado suave.
Todas las células se teñirán de violeta.
3. Se retirará el colorante con etanol, goteándolo por el portaobjetos, hasta que las gotas
que salen no tengan casi color. Las células Gram- pierden el colorante violeta y
quedarán incoloras. Las Gram + seguirían violeta.
4. Añade una gota de agua a la preparación y cubre las preparaciones 2 min. con
safranina (colorante de contraste).
Finalmente, lava el colorante con agua. Este colorante sólo entrará en las bacterias
Gram –, que quedarán rojas. Las Gram + seguirán violetas.
Seca las preparaciones sobre papel de filtro y obsérvalas con microscopio utilizando el
objetivo de inmersión. En esta tinción diferencial las bacterias Gram – aparecen rojas y
las Gram + violeta. Observar (100×). Lugol
Tinción negativa
1. colocar una pequeña gota de tinta china en el extremo de un portaobjeto, colocar una
gota de muestra 2. Realizar frótis, 3. Dejar secar.

ANÁLISIS Y RESULTADOS