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"Año del Diálogo y Reconciliación Nacional"

DIRIGIDO A: ESCUELA ACADEMICA DE TECNOLOGÍA MÉDICA

DE: KAREN GUERRERO VASQUEZ, INTERNO EN TECNOLOGÍA MÉDICA CON LA


ESPECIALIDAD DE LABORATORÍO CLÍNICO Y ANATOMIA PATÓGICA

INFORME: BANCO DE SANGRE

CODIGO: 2008157245

ASUNTO: INFORME DE ACTIVIDADES DE INTERNADO DEL MES JUNIO

TUTOR ACADEMICO: ANTONIO MARTIN PEREZ ALDAVE

FECHA: 01 DE MARZO DEL 2018

POR MEDIO DE LA PRESENTE ES GRATO DIRIGIRME A UD. PARA SALUDARLO Y A LA VEZ HACERLE
CONSTAR, SOBRE LAS ACTIVIDADES REALIZADAS EN EL INTERNADO.

“2018 -"Año del Diálogo y Reconciliación Nacional” |Universidad Alas Peruanas


Contenido
Escuela Académico Profesional de Tecnología Médica ................... ¡Error! Marcador no definido.
Especialidad de Laboratorio Clínico y Anatomía Patológica ........ ¡Error! Marcador no definido.
Flebotomía.......................................................................................................................................................................... 6
Separación de Hemocomponentes........................................................................................................................... 6
DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO POR FASE GLOBULAR Y SERICA ....................................... 9
INTRODUCCIÓN........................................................................................................................................................... 9
EQUIPOS Y MATERIALES ..................................................................................................................................... 10
Centrífuga ......................................................................................................................................................... 10
PROCEDIMIENTOS .................................................................................................................................................. 10
Prueba globular.................................................................................................................................................... 11
Prueba sérica......................................................................................................................................................... 11
CONCLUSIONES ................................................................................................................................................... 12
DETERMINACIÓN DE Rh Debil ............................................................................................................................... 12
MARCO TEORICO .......................................................................................................................................................... 14
SISTEMA RHESUS .................................................................................................................................................... 14
GENÉTICA Y HERENCIA ................................................................................................................................... 15
BIOQUÍMICA DEL COMPLEJO RH ................................................................................................................. 16
ANTICUERPOS DEL SISTEMA RHESUS ...................................................................................................... 17
FENOTIPO Y GENOTIPO DEL SISTEMA RHESUS ................................................................................... 18
EXPRESIÓN DEL ANTÍGENO D ...................................................................................................................... 18
Procedimientos realizados en la práctica – 22/Setiembre/2017............................................................ 19
DETERMINACIÓN DE Rh:D - TECNICA EN PLACA ......................................................................................... 19
Procedimiento ........................................................................................................................................................... 19
SUSPENSION CELULAR AL 5 % PARA LA DETERMINACIÓN DEL Rh EN TUBO ............................... 20
PRINCIPIO .............................................................................................................................................................. 20
MATERIALES ......................................................................................................................................................... 20
1° RA FORMA DE PREPARACIÓN ................................................................................................................. 20
TECNICA EN TUBO....................................................................................................................................................... 21
PROCEDIMIENTO - TIPIFICACION DEL D débil DEL SISTEMA RH ................................................ 21
OBJETIVO:............................................................................................................................................................... 21
PROCEDIMIENTO..................................................................................................................................................... 22
IMÁGENES ADJUNTAS DEL PROCEDIMIENTO ....................................................................................... 23
..................................................................................................................................................................................... 24
..................................................................................................................................................................................... 24
..................................................................................................................................................................................... 24
..................................................................................................................................................................................... 24
INTERPRETACION DE RESULTADOS EN OTROS CASOS ................................................................... 24
DETERMINACIÓN DE COOMBS DIRECTO EN TARJETA LISS/COOMBS POLIESPECIFICOAGH .. 26
INTERPRETACION DE REACCION EN OTROS CASOS .......................................................................... 28
CONLUSIONES ...................................................................................................................................................... 28
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ...................................................................................................................... 29
Objetivos:

• Afianzar conocimientos
sobre separación de
hemocomponentes.
• Determinar las
temperaturas, tiempo,
volumen, en el que se
conservan los
hemocomponentes
• Determinar los grupos
sanguíneos del sistema ABO
por fase globular y serica
• Demostrar la presencia del
antígeno D.
• Preparación de células
control coombs
Flebotomía
Es la extracción de la sangre de la vena medial de buen calibre que se le extrae al

donante voluntario 450ml en 12 min.

Separación de Hemocomponentes
Son procesos que se llevan a cabo para obtener esencialmente 3

hemocomponentes:

1) Paquete Globular (Conservar de 1-6 grados C, por 42 días con optizol)

2) Concentrado plaquetario (Conservar de 19 – 22 grados C, por 5 días en

agitación)

3) Plasma fresco congelado (Congelar a – 40 grados C, por 1

año, antes de ser transfundido, se debe descongelar por 1 hr

a 37 grados C en el Baño María, luego de ser descongelado,

se tiene hasta 24 hrs para transfundir, de lo contrario se

elimina la unidad de plasma.


1. Pesar e Equilibrar

- Contrapesar la bolsa de sangre total con otra

similar. (Las bolsas con las que se trabaja son

bolsas satelitales triples)

2. Centrifugación PG- PRP

- 2200rpm

- T° 20C°

- Tiempo : 10 minutos

(En esta etapa se realiza la primera

Centrifugación de 2200 rpm a 20C°, debido

a que se desea obtener plaquetas)

Una vez centrifugada la bolsa, se procede

a separar el PG del PRP:

esto puede realizarse de forma manual

o automatizada.

3. Método - Separador automático

- Prender el comprensor de aire

- Pesar la balanza de plasma y balanza BC

200g.
- Se programa el equipo para separar el plasma

rico en plaquetas del paquete globular. (Este

equipo separará por presión

en las bolsas, los hemocomponentes ya

mencionados)

- Una vez separado el PG del PRP, se romperá el seguro que

dejará pasar OPTISOL hacia la bolsa del paquete globular

(confiriéndole el preservante

necesario para que esta dure 42 días, el volumen del

PG es de 250 ml aporx.)

4. Obtención de concentrado plaquetario Y PFC

- 3100rpm

- T° : 20 C°

- 10 min

(En esta etapa se realiza la segunda centrifugación donde

se separará el Concentrado plaquetario del Plasma).

Cabe resaltar que el volumen final del concentrado

plaquetario es un aprox de 50 ml y el volumen final del

Plasma es de 200 ml aprox.


Una vez obtenida la concentración plaquetaria se recomienda un reposo de 1

hora, para que luego estas sean almacenadas en agitación a 20 grados C

Con respecto al Plasma, este debe almacenarse de inmediato en congelación

a -40 grados C, para obtener PFC.

DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO POR


FASE GLOBULAR Y SERICA

INTRODUCCIÓN
Las secciones de Inmunohematología y Banco de Sangre tienen bajo su
responsabilidad el preparar los hemocomponentes y seleccionar el más indicado
para el paciente, a quien el médico se lo prescribe.
Para cumplir con esta labor se debe interaccionar con los donantes de sangre,
realizar pruebas inmunohematológicas como la determinación de grupos
sanguíneos, fenotipos y pruebas de compatibilidad dentro de otras.
La determinación de los grupos sanguíneos se realiza mediante una reacción
antígeno-anticuerpo.
El sistema de grupos sanguíneos ABO es único en cuanto a que una persona que
carezca de los antígenos A y/o B en los eritrocitos, regularmente tiene anticuerpos
en el suero dirigidos al antígeno o antígenos faltantes.
Para realizar el grupo sanguíneo de una persona se prueban directamente los
eritrocitos con reactivo Anti-A, y Anti-B (prueba con eritrocitos o prueba directa).
La confirmación de los resultados se hace utilizando eritrocitos de grupo A y B
(prueba sérica o prueba inversa). Algunas pruebas adicionales facilitan la
identificación de subgrupos
Prueba Globular (Directa): Es un método sencillo que consiste en hacer reaccionar
los glóbulos rojos del paciente con los antisueros A y B buscando aglutinación
visible, lo cual indica que las células poseen el antígeno contra el que está dirigido el
anticuerpo.
Prueba Sérica (Inversa): En este método se utiliza el suero del paciente el cual se
hace reaccionar con células A1, células A2 y células B. La aglutinación indica la
presencia de Anti-A y/o Anti-B en el suero.Para que el grupo sea determinado, las
pruebas directa e inversa deben ser correspondientes

EQUIPOS Y MATERIALES

Materiales
Materiales para la preparación de Grupo Sanguineo ABO en prueba sérica
▪ Marcador de vidrio.
▪ Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm del sistema de extracción al
vacío.
▪ Tubos de ensayo
▪ Gradilla para tubos.
▪ Guantes descartables.
▪ Reactivo Anti A - Anti B - Anti D
▪ Solucion Salina Fisiologica
Equipo
Los Equipos para la preparación de del pool y
▪ Micropipeta automática regulable.
▪ Centrífuga

PROCEDIMIENTOS
1. Preparar un pool del grupo sanguíneo “o” con 6 muestras distintas del grupo
“o”
2. De cada muestra traspasar 250 ul al tubo rotulado para el pool
3. Homogenizar suavemente
4. Lavar los glóbulos rojos del pool del grupo sanguíneo “O”, de la muestra de
sangre “A”, “B”, y “AB”
5. Rotular cuatro tubos de ensayo uno para cada grupo(A, B. AB, O)
6. A cada tubo de ensayo pipetear 500ul de sangre de cada grupo sanguíneo
según corresponda
7. Completar a cada uno de los tubos con suero fisiológico, faltando un dedo
para llenar el tubo de ensayo
8. Homogenizar suavemente
9. Centrifugar a 2500 rpm durante 3 minutos
10. Retirar de la centrifuga suavemente y con la pipeta Pasteur retirar el
sobrenadante con mucho cuidado(utilizar una pipeta Pasteur diferente para
cada muestra)
11. Realizar el procedimiento por cuatro veces
12. Rotular cuatro tubos de ensayo uno para cada grupo sanguíneo (A,B,AB,O)
13. Preparar la suspensión de glóbulos rojos lavados al 5% con la siguiente
formula

5 x 50 = 250 ml glóbulos rojos lavados

100 50 5000 ml suero fisiológico

Prueba globular
Realizar dilución al 5% para lo cual pipetear 25 ul de paquete globular del paciente
y 500ul de suero fisiológico

Rotular tres tubos de ensayo (Anti- A, Anti- B, Anti- D)

De la dilución al 5% pipetear 50ul del pool a cada tubo de ensayo rotulado

Agregar una gota del reactivo a cada tubo de ensayo rotulado de acuerdo que
corresponda para el tubo Anti-A reactivo Anti- A, para el tubo Anti- B reactivo Anti-
B y para el tubo Anti-D reactivo Anti D

Centrifugar a 2500 rpm durante 15 segundos

Retirar de la centrifuga con mucho cuidado evitando movimientos bruscos y


observar resultado, homogenizar suavemente hasta desprender el botón formado

Prueba sérica
1. Rotular cuatro tubos de ensayo para cada grupo sanguíneo (A, B, AB Y O)
2. Pipetear 50ul de la suspensión al 5% de glóbulos rojos lavados de cada tipo
de grupo sanguíneo según corresponda a cada tubo de ensayo rotulado (del
grupo A al tubo de ensayo rotulado A y así sucesivamente)
3. Luego pipetear 100ul de suero de la muestra del paciente y agregar a cada
tubo de ensayo rotulado
4. Homogenizar y centrifugar a 2500 rpm durante 15 segundos
5. Retirar de la centrifuga suavemente evitando movimientos exagerados y
proceder a la lectura uno por uno cada tubo de ensayo, homogeneizar
suavemente hasta desprender el botón formado y anotar cada resultado.

CUADRO

FASE GLOBULAR FASE SERICA Auto Posible


Anti A Anti B Anti AB Cel Cel B Cel O control Grupo
A
0 0 4+ 4+ 4+ 4+ 0 0

CONCLUSIONES

- Se Identtificaron que en la prueba globular y séricas nos ayudaron a


identificar los grupos sanguíneos, demostrándonos la presencia en la fase
globular los antígenos ABO correspondientes y la presencia de anticuerpos
del sistema ABO en el suero de la muestra que se quiere estudiar.
- Se realizo con éxito la concentración al 5% tanto en la preparación del pool
de los globulos rojos y que la cantidad se suero que se debe utilizar tiene que
ser proporcional la canidad de glóbulos rojos y su carga antigénica, por lo
cual se tienes que utilizar 50 ul. de glóbulos rojos y 100 ul. de suero de la
muestra desconocida
- En la fase globular se utilizo 50 ul de globulos rojos (pool) mas una fota de
reactivo Anti- A, Anti-B y Anti- D en cada tubo rotulado A;B;O.

DETERMINACIÓN DE Rh Debil

INTRODUCCIÓN
El grupo Rh (D) se determina por la presencia o ausencia del antígeno D sobre los
glóbulos rojos, el cual puede ser detectado por una prueba de aglutinación directa
con un suero clasificador anti-D. Una persona
que posee en sus glóbulos rojos el antígeno D, se conoce como “Rh positivo”,
mientras que la ausencia del antígeno D denota a una persona “Rh negativo”. El
antígeno D es altamente inmunogénico, lo cual le confiere la característica de ser el
de mayor importancia clínica después de los antígenos del sistema ABO. Se estima
que entre 30-85 % de las personas Rh D negativo que reciben una transfusión Rh D
positivo producen anticuerpos anti-D causantes de enfermedad hemolítica
fetoneonatal (en el caso de embarazadas), anemias hemolíticas autoinmunes y
reacciones transfusionales. La diversidad y complejidad antigénica del sistema Rh
se genera por la disposición y proximidad de los genes RHD y RHCE en el brazo corto
del cromosoma 1, lo que facilita la aparición de múltiples eventos de intercambio
genético que originan las variantes débiles y parciales del antígeno D. Desde el punto
de vista clínico, la variante parcial DVI se postula como la de mayor importancia en
la población blanca. Existen múltiples variables que pudieran influir en la
determinación serológica del antígeno D, como la gran diversidad de metodologías,
reactivos anti-D, polimorfismos del sistema Rh, variantes del antígeno D, entre otras,
por lo que este documento busca estandarizar y entregar recomendaciones para una
adecuada clasificación sanguínea RhD.
MARCO TEORICO

SISTEMA RHESUS

El sistema Rhesus (Rh) es complejo y está constituido por 35 a 40 o más


antígenos, de los cuales cinco (D, C, E, c y e) revisten una importancia especial.
El antígeno Rh D fue caracterizado en 1939 por Levine y Stetson. El antígeno
recibió su nombre en 1940 cuando Lendsteiner y Weiner inmunizaron
conejos con eritrocitos del mono Rhesus y dicho antisuero aglutinaba el 85%
de la población Rh positivo. Sin embargo hace algunos años se observó que
los pacientes Rh negativos desarrollaban anti-Rh solamente al ser
inmunizados (transfusión, embarazo, etc.). La presencia de los antígenos del
sistema Rh está determinada por genes, y dos teorías tratan de explicar la
herencia de los antígenos Rhesus, una fue propuesta por Sir Ronald Fisher y
el Dr. Robert Race de Inglaterra, según ellos los cinco determinantes
antigénicos principales que integran el sistema Rh (D, C, c, E, e) son el
producto de 3 pares de genes situados en 3 locus distintos, pero
inmediatamente ligados. En su concepto cada gen da origen a un antígeno
determinado. Estos locus están constituidos por pares de genes alelos Dd, Cd,
Ee, con transmisión codominantes. El más importante de estos locus fue
denominado D, ocupado por el gen responsable del antígeno D y la otra teoría
propuesta por el Dr. Alexander Wiener de EEUU, que nos dice que la herencia
del sistema Rh es controlada por un gen único, localizado en un locus simple
en un cromosoma. Cada aglutinógeno se caracteriza por especificidades
serológicas múltiples, denominadas factores, identificadas por anticuerpos
específicos. Existen múltiples alelos de este gen y los ocho alelos mayores son
denominados con los símbolos: r, r´, r´´, R, Ro, R1, R2, Arz. Cada gen da lugar
a un antígeno eritrocitario conocido como aglutinógeno, el cual puede ser
identificado en sus diferentes factores mediante sueros específicos.
GENÉTICA Y HERENCIA
El sistema Rh es una agrupación de varios antígenos productos de dos genes
adyacentes y homólogos del brazo corto del cromosoma 1, ubicados en la
región p36.13-p34.3 que codifica los polipéptidos no glucosilados,
denominados RHD y RHCE. El gen RHD determina la presencia de una
proteína de membrana que confiere actividad D a los glóbulos rojos, el otro
gen RHCE determina los antígenos C, c, E y e; sus alelos son RHCe, RHCE, RhcE
y Rhce. Los productos de estos genes son proteínas que contienen 417
aminoácidos, estos atraviesan la membrana eritrocitaria doce veces y solo
exhiben ramas aminoacídicas cortas en el exterior, en la cual se expresan los
respectivos antígenos, estos polipéptidos son ácidos grasos acetilados y no
contienen carbohidratos. Los antígenos de este sistema presentan homología,
su diferencia se basa en la posición de diferentes aminoácidos que hacen
únicos cada antígeno; entre los antígenos C y c difieren en cuatro aminoácidos
en las posiciones 16, 60 y 103 de los cuales solo la serina o prolina en la
posición sería crítica, la presencia de alanina o prolina en la posición 226
parece ser la única característica que distingue a los antígenos E de los de e.
Los polipéptidos D, en cambio poseen 35 aminoácidos que en los individuos
D negativos se perciben como extraños. La presencia o ausencia del gen RHD
en el ADN humano determina las bases moleculares del polimorfismo RhD
positivo y RhD negativo. Los individuos RhD positivos poseen los dos genes
RH, mientras que el fenotipo RhD negativo resulta de la ausencia del gen RHD,
estos genes son heredados por los progenitores como carácter mendeliano y
se expresan a partir de la sexta semana de vida intrauterina.
La herencia de los antígenos Rh es determinada por un complejo de dos genes,
de los cuales uno codifica la proteína transportadora de antígeno D y otro
codifica la proteína transportadora de antígeno “C” o “c”, de “E” y “e”. Las
personas Rh positivas poseen genes Rh D, que codifica la especificidad de la
proteína transportadora de C y E. Mientras el Rh negativo tiene únicamente
un gen RhCE. El 45% de los individuos Rh positivos es homocigoto al factor D
y el 55% restante es heterocigoto por haber heredado un factor D positivo y
otro negativo de sus progenitores.
BIOQUÍMICA DEL COMPLEJO RH
Teniendo en cuenta lo expresado por Patricia Tippett y análisis
inmunoquímicos posteriores, revelarían que los antígenos del sistema Rh son
proteínas de transmembrana codificadas por genes que se encuentran en el
brazo corto del cromosoma 1 (RhD – RhCE) y el cromosoma 6 (RhAG). La
proteína del cromosoma 6 (RhAG), que actuaría como precursor para la
expresión de los antígenos del sistema. Se desconoce el papel biológico de las
proteínas Rh, se cree que actuarían como transportadores de cationes, pero
tendrían una importancia fundamental en la estructura de la membrana del
hematíe ya que se comprobó que su ausencia (en los muy raros casos “Rh
null”) compromete a la morfología eritrocitaria de tal manera que produce
verdaderos esferocitos, con una viabilidad globular obviamente disminuida.
Antígenos del Sistema Rhesus Existen 35 a 40 o más antígenos en el sistema
Rh, pero solo cinco son los que se utilizan con más frecuencia y en el uso
rutinario es el antígeno Rh o (D); al igual que en el sistema ABO el sistema Rh
tiene un puesto prominente en la práctica de la transfusión sanguínea y en
relación de la enfermedad hemolítica del recién nacido (EHRN). El antígeno
Rh (D), después de los antígenos ABO, es el más importante en la práctica de
transfusión. Aproximadamente 75% de las personas Rh (D) negativo
desarrollan anti-D al ser expuestos a eritrocitos Rh (D) positivo.

Todavía no se ha determinado la constitución química de los antígenos


Rhesus. El antígeno Rho (D) es determinado genéticamente a través de un gen
autosómico dominante. Dicho gen aparentemente reside en el cromosoma 1.
Cada individuo hereda de cada padre un gen que controla un antígeno Rh que
tiene varias determinaciones antigénicas, la combinación es equivalente a su
fenotipo. En la rutina de transfusión (con excepción de embarazos y algunos
pacientes Rh negativo) solo se tipea por el antígeno D en el sistema Rh y los
demás únicamente si el anticuerpo se presenta en problemas de paternidad.
Con el tiempo se descubrió que el sistema Rh-Hr es un sistema complejo y casi
simultáneamente se crearon dos sistemas de nomenclatura: Nomenclatura
Rh-Hr (Weiner). Cada fenotipo se designa usando las letras Rh o Hr con
superscriptos y comillas. La mayúscula R se reserva para cuando se refiere a
la presencia de Rho. Nomenclatura CDE (Fisher y Race). La relación recíproca
entre varios de los factores Rh hizo que Fisher y Race desarrollaran el
concepto de que los antígenos Rh se derivaban de 3 locus de genes
íntimamente relacionados. Cada uno con dos alelos. Estos alelos se designan
con las letras CDE y cde. Se han encontrado anticuerpos contra CDE, c y e, pero
nunca se ha identificado anti-d. La combinación de genes da por resultado el
genotipo. Ej: CDE/cde.

ANTICUERPOS DEL SISTEMA RHESUS


El embarazo y la transfusión de sangre producen la mayor parte de
anticuerpos Rh como resultado de la exposición a eritrocitos humanos.
Ocasionalmente, los anticuerpos Rh (por ejemplo, anti-E y anti-Cw) se
producen en forma natural. El antígeno D es el inmunógeno más potente,
seguido del c y el E. A pesar de algunos anticuerpos Rh reaccionan mejor en
sistemas antiglobulínicos ricos en proteínas o enzimáticos. En general, los
anticuerpos persisten durante muchos años. Si los niveles séricos declinan
por debajo de los umbrales de detección, la exposición antigénica ulterior
desencadena una rápida respuesta inmunológica secundaria. Con muy pocas
excepciones, los anticuerpos Rh no fijan complemento cuando se combinan
con sus antígenos, o bien esta fijación no es detectable por las técnicas de uso
corriente. Por lo tanto, en las reacciones transfusionales con anticuerpos Rh,
la hemólisis es sobre todo extravascular en vez de intravascular. Los anti-D
casi nunca muestran diferencias en la reactividad con los eritrocitos de
individuos homo y heterocigotos para RhD pero la expresión de los antígenos
D parece variar de alguna forma con los alelos acompañantes del genotipo.
Por ejemplo, los glóbulos rojos de los individuos DcE/DcE poseen más puntos
antigénicos D que los de aquellos DCe/DCe y podrían revelar títulos más altos
con anti-D. A veces “el efecto dosis” se demuestra con algunos anticuerpos
contra los antígenos E, c y e, en ocasiones, contra los antígenos C . A diferencia
del sistema ABO, en el sistema Rh no existen aglutininas (anticuerpos)
naturales que cuando se presentan son el resultado de una inmunización
previa. Los anticuerpos del sistema Rh suelen ser inmunes, no existen en los
individuos que carecen del antígeno correspondiente a no ser que se haya
producido una sensibilización previa por gestación o transfusión sanguínea.

Estos anticuerpos son inmunológicos, generalmente son de tipo IgG, por lo


que atraviesan la placenta de forma activa a través de un dominio del
fragmento Fc, en general los anticuerpos persisten durante muchos años y no
suelen aglutinar con el antígeno correspondiente en medio salino, por lo que
se utiliza para su detección en este medio diferentes procedimientos capaces
de aumentar la aglutinabilidad de los eritrocitos adicionando
macromoléculas (Albúmina, antiglobulina) o enzimas. Los anticuerpos
inmunógenos más potentes son los de los antígenos D, seguidos de los c y E.
Los anticuerpos anti-D inmunológicos aparecen en personas Rh negativas
como respuesta a la estimulación del antígeno D, esto puede ocurrir por la
incompatibilidad fetal o en transfusiones. Los anticuerpos anti-E puro se
presentan con más frecuencia que los demás debido a que este antígeno no
está presente en todos los eritrocitos.

FENOTIPO Y GENOTIPO DEL SISTEMA RHESUS


Los fenotipos Rh expresan los antígenos que están presentes en el eritrocito,
estos antígenos son producidos de dos en dos por los diferentes haplotipos,
los productos de estos genes pueden ser homocigotos (D, D; C, C: E, E) o
heterocigotos (D, d; c, C; e, E).
El gen RHce codifica los productos c y e, el gen RHCe codifica los productos C
y e, el gen RhcE codifica los productos c y E; y el gen RHCE codifica los
productos C y E que son excepcionales.
Las combinaciones de estos genes originan para los sujetos Rh positivos
CCDEE, CCDEe, CCDee, CcDEE, CcDEe, CcDee, ccDEE, ccDEe y ccDee, para los
sujetos con Rh negativo CCdEE,CCdEe, CCDee, CcdEE, CcdEe, Ccdee,
ccdEE,ccdEe y ccdee.
Las reglas elementales para establecer el genotipo a partir del fenotipo son
determinar inicialmente los cinco antígenos C, c, D, E, e y establecer si el
fenotipo es Rh positivo o negativo. Si es Rh negativo, se acepta que es
homocigoto para dd. En ausencia de C, se anota c en cada cromosoma (c/c),
si es CC se coloca C en cada cromosoma (C/C) y si tiene C y c se coloca C en el
primer cromosoma y c en el segundo cromosoma (C/c). Se inscribe la D en el
mismo cromosoma donde esta C, por ejemplo, heterocigoto Cc se anotará
CD/cd. Se determina la presencia o ausencia de E, ante e, e se coloca una en
cada cromosoma (e/e), EE se coloca una en cada cromosoma (E/E) y E, e se
anota E en el primer cromosoma y e en el segundo cromosoma. Se ubica la E
en el mismo cromosoma donde está D, a menos que ya exista una C. No
existe el antígeno d, pero esta letra significa la ausencia de D y se emplea
para definir el fenotipo Rh negativo.

EXPRESIÓN DEL ANTÍGENO D


En los últimos diez años se han desarrollado diversas hipótesis acerca de los
mecanismos moleculares para explicar la ausencia del antígeno D en las
personas Rh negativo, esta ausencia se debe a la deleción del RHD, es una
condición homocigota con la ausencia del gen RHD, es el mismo mecanismo
dominante en personas de raza blanca. La pérdida de la expresión de la
proteína D se presenta como un gen RHD inactivo o parcial, este mecanismo
es común en sujetos de raza negra enotipo D débil Los eritrocitos de fenotipo
D débil poseen un número menor de sitios antigénicos, que puede deberse a
que produce menor cantidad de antígenos, antiguamente llamado Du de alto
grado, o ser resultado del efecto supresor del haplotipo ¨Ce¨ en posición
¨trans¨, Du de bajo grado. Como en estos casos no se trata de una diferencia
cualitativa sino debida puramente a una menor cantidad de sitios antigénicos.
Algunos fenotipos D parcial pueden presentar una disminución cuantitativa
del antígeno D, pudiendo ser erróneamente clasificados como D débil, debido
a que la identificación de este fenotipo depende fundamentalmente del
reactivo ¨anti D¨ (Rho) y del método utilizado para su investigación.

Procedimientos realizados

DETERMINACIÓN DE Rh:D - TECNICA EN PLACA


Procedimiento

1. Colocar una gota de Anti – D (Rh) sobre una placa de vidrio limpia y
rotulada.
2. Agregar 1 gota de sangre total con anticoagulante al lado del anti D
3. Mezclar el antisuero con los glóbulos rojos en un área aproximada de 2
cm de diámetro y balancear constantemente la placa durante
2 minutos.
4. Observar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación
TECNICA EN PLACA
Resultados de la práctica
1) Colocar una gota de Anti-D (Rho) sobre una placa
Anti-A Anti-B Anti-D
de vidrio limpia y rotulada.
Anti-A Anti-B Anti-D
2) Agregar al lado una gota de la suspensión de glóbulos rojos a probar. Debe
mantenerse la relación antisuero:células en todos los ensayos.
3) Mezclar el antisuero y los glóbulos rojos con un palillo descartable en un
área de 2 cm de diámetro y balancear constantemente la placa durante 2
minutos.
Observar macroscópicamente la presencia o ausenciade aglutinación. La
observación puede facilitarse si se emplea unaGrupo:
fuente“O” RhD:
de luz positivo
difusa.
Si el período de observación es mayor a 2 minutos,efectos de la evaporación
del reactivo pueden conducira resultados equivocados (débilmente
Observación
positivos).
Algunas muestras D débiles o D parcial pueden no aglutinar cuando se utiliza
la técnica en placa. Ante resultados indeterminados o negativos deben
confirmarse utilizando la técnica en tubo. Las técnicas en placa no están
aconsejadas para la detección de muestras D débil o D parcial.
SUSPENSION CELULAR AL 5 % PARA LA DETERMINACIÓN DEL Rh EN
TUBO

PRINCIPIO
La utilización de suspensiones de glóbulos rojos a diferentes porcentajes es
muy útil en muchos procedimientos serológicos y el objetivo es lograr un
número adecuado de glóbulos rojos para leer y graduar las reacciones.

MATERIALES
• Muestra de sangre
• Tubos
• Pipetas automáticas
• Solución salina
• Centrifuga (3000 rpm o equivalente)
• Suspensión eritrocitaria al 5%
1° RA FORMA DE PREPARACIÓN
PROCEDIMIENTO:
Lavado de Glóbulos Rojos
1.Colocar 1ml de sangre total con anticoagulante

2. Agregar SSF

3.Homogenizar Glóbulos rojos + Solución salina fisiológica.

4.Centrigugar 2500 x 3min (Hospital Carrión)

5.Lavar 3 veces
6.Retirar todo el sobrenadante y dejar los glóbulos rojos lavados

Suspension al 5%
950 ul ClNa (0.9%) + 50 ul GR lavados˂˃ 1 ml de GR al 5%

CONCLUSION
• El lavado y suspensión de glóbulos rojos tienen como propósito
graduar la concentración de glóbulos rojos en un porcentaje ya
conocido para poder estudiar mejor las reacciones e interacciones en
las pruebas de compatibilidad sanguíneas.

• Se lavan los glóbulos para descartar partículas que podrían inferir con
el estudio como (fragmentos eritrocitarios, restos de Hb , componentes
extracelulares).

TECNICA EN TUBO
PROCEDIMIENTO - TIPIFICACION DEL D débil DEL SISTEMA
RH

OBJETIVO:
• La expresión del antígeno D en el grupo de los D débiles esta
disminuido en número de copias de antígeno D, por lo que su presencia
tiene que ser demostrado mediante la técnica de la antiglobulina.
• El objetivo de esta técnica es demostrar la presencia del antígeno D.
ALCANCE: Centros de Hemoterapia y Bancos de Sangre.

MUESTRA: Sangre entera anticoagulada.

MATERIALES Y EQUIPOS:

• Suero comercial Anti D policlonal o monoclonal.


• Suero Control Rh o Albumina BSA al 22% (En esta práctica se utilizo
albumina)
• Suero coombs Poliespecifico Anti IgG - C3d
• Células de control de Coombs
Nota:
Todos los reactivos deben usarse de acuerdo con las instrucciones del
fabricante.

EQUIPOS:

• Centrifuga De Inmunohematologia,
• Aglutinoscopio
• Tubos 12x 75
• Pipetas automáticas

PROCEDIMIENTO
1. Suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio en solución salina al
0.9%.
2. Colocar una gota de Anti D en un tubo limpio y rotulado D.
3. Colocar una gota de suero control RH o Alb 22% en un tubo limpio y
rotulado. “Control”
4. Agregar una gota de la suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio,
a cada tubo.
5. Mezcla con suavidad y centrifugar de acuerdo con las instrucciones
casi siempre por 15 seg a 2500 rpm (leer) o por 3 min. a 2500 rpm.
(lavar)
6. Resuspender con suavidad las células y examine macroscópicamente
en busca de aglutinación con la ayuda del aglutinoscopio.
7. Leer, interpretar y registra los resultados. Si reacción es negativa
continuar procedimientos.
8. Incubar en baño maría durante 30 min, luego repetir el paso 5 y 6 si
es negativo continuar.
9. Lavar los tubos con Sol.salina por 4 veces decantando totalmente el
ultimo lavado.
10. Agregar 2 gotas de Suero Coombs repetir paso 5 y 6.
11. comprobar con células control de Coombs.
IMÁGENES ADJUNTAS DEL PROCEDIMIENTO

1 2

CONTROL
Tubo D

CÉLULAS DE
ESTUDIO AL 5 %

3
4

Tubo D Control
-1 gota GR 5 % -1 gota GR 5%
-Anti-D -Alb 22%

5 6 6

LUEGO SE LAVAN LOS 2 TUBOS


CON SSF POR 4 VECES, Y EN EL
ULTIMO LAVADO SE DECANTA
TODO EL SOBRENADANTE

NO HAY
AGLUTINACIÓN SE PROCEDIO A INCUBAR LAS 2
MUESTRAS EN EL BAÑO MARIA
POR 15 MIN (tiempo min) A 37 °

LUEGO SE CENTRIFUGA A 2500


X 15 SEG, SE RESUSPENDEN LAS
CELL. Y SE INTERPRETAN
RESULTADOS.

RESULTADO:

NO HUBO AGLUTINACION
SE AGREGA 2 GOTAS DE AGH
EN LOS 2 TUBOS PREVIAMENTE
7 LAVADOS.

SE CENTRIFUGA A 2500 X 15
SEG, SE RESUSPENDEN LAS CELL. FINALMENTE, PARA CORROBORAR LA
Y SE INTERPRETAN NEGATIVIDAD DE LA PRUEBA SE
RESULTADOS AGREGAN CELULAS CONTROL
COOMBS EN LOS 2 TUBOS DONDE LA
RESULTADO:
AGLUTINACION SERA DE 1+/2+.
NO HUBO AGLUTINACION
DANDONOS EL
SIGUIENTE RESULTADO

TABLA RH NEGATIVO TIPICO

D Ctl RH Interpretación
Lectura inmediata 0 0 Continuar
Lectura de incubación 0 0 Continuar
Lectura de suero de 0 0 Continuar
CoomBs

Control de Coombs 1+/2+ 1+/2+ Negativo

INTERPRETACION DE RESULTADOS EN OTROS CASOS

✓ Las aglutinaciones de los glóbulos rojos en estudio constituyen


resultados positivos.
✓ La resuspensión de las células constituye un resultado negativo
✓ La validación como Rh negativo se dará si ambos tubos no aglutinan.
TABLA RH NEGATIVO TIPICO

D Ctl RH Interpretación
Lectura inmediata 0 0 Continuar
Lectura de incubación 0 0 Continuar
Lectura de suero de 0 0 Continuar
CoomBs

Control de Coombs 1+/2+ 1+/2+ Negativo

TABLA RH POSITIVO DEBIL

D Ctl RH Interpretación
Lectura inmediata 0 0 Continuar
Lectura de incubación 0 0 Continuar
Lectura de suero de 1+ 0 Positivo
Coombs

Control de Coombs 1+/2+ Positivo

TABLA RH NO DETERMINADO

D Ctl RH Interpretación
Lectura inmediata 0 0 Negativo
Lectura de incubación 0 0 Negativo
Lectura de suero de 1+ 1+ INVALIDO
Coombs

Control de Coombs
OBSERVACIONES:

Se debe analizar un control negativo de manera simultanea (autocontrol)

DEFINICIONES Y ABREVIACIONES
• D débil: corresponde al fenotipo cuyos eritrocitos poseen una cantidad
reducida del antígeno D y requieren, por tanto, de la prueba de
antiglobulina indirecta para su detección.
• D parcial: corresponde al fenotipo cuyos eritrocitos son catalogados
como D positivos, pero carecen de una porción del antígeno D, pudiendo
estos pacientes aloinmunizarse cuando reciben transfusiones de
glóbulos rojos D positivos.
• Del: corresponde al fenotipo cuyos eritrocitos expresan niveles muy
bajos del antígeno D, por lo que no pueden ser detectados con métodos
serológicos de rutina.
Suero control D: control que permite evaluar la especificidad del suero
anti-D empleado, ya que al agregarlo a los glóbulos rojos en estudio no
se observa aglutinación.
• Variantes del antígeno D: designación de las variaciones en la expresión
del antígeno D, lo cual incluye los fenotipos D débil, D parcial y Del.

DETERMINACIÓN DE COOMBS DIRECTO EN


TARJETA LISS/COOMBS POLIESPECIFICOAGH

1.Dilucion de Hematíes al 1%

Diluir los hematies al 1% (1000ul ID- Diluent 2 + 10ul Glóbulos Rojos)


2.Dispensar 50 ul de los hematies diluidos al 1% en un microtubo de la tarjeta.

3.Centrifugar
1 2

INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

1 Grupo: “O” RhD: positivo (4+)


Combs: Negativo
Control: Negativo (prueba valida)

Grupo: “O” RhD: negativo


2 Combs: Negativo
Control: Negativo (prueba valida)

INTERPRETACION DE REACCION EN OTROS CASOS

CONLUSIONES
• La técnica en micro tarjeta, es una técnica
sencilla y rápida, tanto en el procedimiento
como en la interpretación de resultados.
• Reduce el riesgo de contaminación biológica.
• Ofrece una buena reproducibilidad y
repetibilidad.
• Reduce el tiempo de la prueba significativamente
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
• Roback JD, editor. AABB Technical Manual, 17th ed., Bethesda, Maryland,
2011.

• American Association of Blood Banks. AABB Standards for Blood Bank and
Transfusion Services, 25th ed., Bethesda, Maryland, 2008.

• Ministerio de Salud de Chile. Orientaciones para Centros de Sangre y


Unidades de Medicina Transfusional, MINSAL, 2007