ANTÍGENOS BACTERIANOS

Esta práctica consiste en realizar una técnica de aglutinación en tubo para la

detección y semicuantificación de anticuerpos anti-Salmonella, Brucella y Proteus
en suero humano. Los reactivos (suspensiones bacterianas coloreadas y
estandarizadas), aglutinan en presencia del anticuerpo homólogo correspondiente
en las muestras ensayadas.
El diagnóstico de enfermedades febriles puede establecerse bien sea por el
aislamiento del microorganismo en sangre, orina o heces o por la demostración del
título de anticuerpos específicos, somáticos (O) y flagelares (H) en el suero del
paciente. La determinación de estos anticuerpos forma las bases para el ensayo de
Widal que establece que altos niveles de anticuerpos O y H superiores a 1/100 en
suero, es indicativo de infección por estos microorganismos.
El resultado de la prueba se obtiene tras ensayar las diluciones dobles del suero
problema en solución salina, frente a un volumen igual de solución antigénica
estandarizada.

Procedimiento
Nosotros vamos a realizar el método de aglutinación en tubo (semicuantificación):
-Prepararemos una serie de tubos, tal como se muestra en la imagen.Preparamos
6 tubos para S. typhi “O” y otros 6 tubos para S.typhi “H”.
Como muestra usaremos el frasco de antígenos febriles.
Lo que haremos es una serie de diluciones de la muestra, para semicuantificarla.

El siguiente paso es preparar 2 tubos más para el control positivo y el

negativo: 0,1 mL control + 0,9 mL de solución salina

A continuación añadiremos una gota (50

microlitros) de antígeno a cada tubo de los 6
tubos (diferenciando los tubos de S.typhi “O” y
S.typhi “H”).

Agitamos para homogeneizar e incubamos a 37ºC durante 24 horas.

Resultados
El título es el último tubo que presenta aglutinación. El control positivo debe
presentar aglutinación y el control negativo no, por lo que se verá todo el líquido
coloreado.
Como se observa en la imagen, los dos últimos tubos corresponden a los controles.
El negativo no presenta aglutinación (es el último de la derecha) mientras que el
positivo si presenta aglutinación (es el penúltimo).
Con respecto a las muestras, que corresponden a S.typhi “O” (antígeno somático),
el título correspondería al segundo tubo, ya que es el último que presenta
aglutinación. Por lo tanto, el título es 1/40.

En esta imagen, correspondiente a S.typhi “H” (antígeno flagelar), no podemos

determinar el título, ya que al agitar el último tubo se sigue observando aglutinación.
Para determinar el título tendriamos que seguir haciendo diluciones del último tubo
hasta que no se observe el aglutinado. El título corresponderá a la última dilución
en la que se observe aglutinación.