Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
Autores:
Castillo Fabricio
Leiva Luis
Villacrés Tamia
Villafuerte Jessica
NRC: 4324
I. Tema:
Determinación del tipo de inhibición de la Succinato deshidrogenasa
II. Objetivos
General
.
Determinar el tipo de inhibición de la Succinato deshidrogenasa
Específicos
.
III. Introducción
La enzima succinato deshidrogenasa (SDH), ( EC1.3.5.1) es un complejo proteico
ligado a la membrana interna mitocondrial que interviene en la sexta reacción
del ciclo de Krebs y en la cadena de transporte de electrones, y que
contiene FAD (flavín-adenín-dinucleótido) unido covalentemente. Cataliza la
reacción: Succinato + ubiquinona(aceptor) ⇆ fumarato + ubiquinol(aceptor
reducido). Donde el succinato cumple un papel catalítico en la oxidación de sustratos
y no sólo es otro sustrato (Voet, Voet, & Pratt, 2009, pág. 530).
En cuanto al ácido tricloroacético se sabe que este puede inhibir las reacciones
oxidativas en el ciclo de Krebs, ya que se tiene como antecedente que C-halógenos de
la seria alifática, flúor, bromo, yodo, cloro, y yodo acetato actúan sobre compuestos
proteicos sulfurados del tipo cistina de ciertas enzimas (Novoa, 1995, pág. 63).
IV. Metodología
Materiales
Materiales Reactivos
Tubos de ensayo Azul de metileno
Gradillas Solución de ácido tricloroacético
Vasos de precipitación Extracto de hígado
Espectrofotómetro Solución de Succinato
Baño María Aceite vegetal
Micropipetas de 10-100μL Agua destilada
Procedimiento
Inhibidor 2 ml 2 ml 2 ml 2 ml
Succinato (sustrato) 1 ml 1 ml 1 ml 1 ml
Nota. Repetir el procedimiento para cada concentración de inhibidor. El tubo que no tiene inhibidor el
volumen se debe complementar con 2 ml de agua destilada
V. Resultados
Calculo de Km y Vmax
Sin Inhibidor
[S] V 1/[S] 1/V
3,12647E-05 0,008957895 31985 111,633373
0,001563233 0,011427368 639,7 87,5092115
0,003126466 0,011863158 319,85 84,2945874
0,015632328 0,011378947 63,97 87,8815911
80
1/V
60
Series1
40 Linear (Series1)
20
0
0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 35000
1/[S]
Vmax[umol/min] Km1[M]
0,01158843 9,27074E-06
y = 0.0055x + 87.701
250
R² = 0.9838
150
y = 0.0016x + 86.218
R² = 0.9858
100 y = 0.0011x + 86.322
R² = 0.9865
50
y = 0.0008x + 86.293
R² = 0.9834
0
0 5000 10000 15000 20000 25000 30000 35000
1/[S]
Vmax
[umol/min]
Sin inhibidor 0,01158843
1% 0,01158453
Con 10% 0,01159851
inhibidor 15% 0,01161575
20% 0,01140238
Dado:
Km aumenta valor y la Vmax permanece constante estamos hablando de una inhibición
competitiva.
VI. Discusión
VII. Conclusiones
VIII. Bibliografía
Novoa, L. (1995). Algunos factores que influencian la actividad del ácido tricloroacético (TCA) en el
combate de malezas perennes. Costa Rica: Instituto Interamericano de Ciencias Agrícolas.
Voet, D., Voet, J., & Pratt, C. (2009). Fundamentos de Bioquímica. Buenos Aires: Panamericana.